鸡新城疫病毒和禽肺炎病毒二重RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：2

1

作者 谢志勤 谢芝勋 +11 位作者 邓显文 谢丽基 范晴 罗思思 黄莉 黄娇玲 张艳芳 王盛 刘加波 庞耀珊 梁亮 冯务玲 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期546-551,共6页

【目的】建立一次性可同时扩增鉴别鸡新城疫病毒(NDV)和禽肺炎病毒(APV)的二重RT-PCR,为有效防控鸡新城疫和禽肺炎病毒病提供技术支持。【方法】根据Gen Bank已发表NDV的F基因序列(Gen Bank登录号JX840454)和APV的F基因序列(Gene Bank... 【目的】建立一次性可同时扩增鉴别鸡新城疫病毒(NDV)和禽肺炎病毒(APV)的二重RT-PCR,为有效防控鸡新城疫和禽肺炎病毒病提供技术支持。【方法】根据Gen Bank已发表NDV的F基因序列(Gen Bank登录号JX840454)和APV的F基因序列(Gene Bank登录号AF187154)分别设计2对特异性引物,应用这2对引物建立可同时检测鉴别NDV和APV的二重RT-PCR,对扩增条件进行优化,并通过特异性试验、敏感性试验和临床样品检测等验证其实用性。【结果】优化后的二重RT-PCR可特异性扩增出参试NDV毒株(La Sota株、F48E9株、I株)及APV/MN-10毒株的目的条带,其大小分别为247和424 bp,而其他对照参试毒株在247和424 bp处均无特异条带出现。二重RT-PCR针对NDV和APV的最低检出限均为10 pg的RNA。应用建立的二重RT-PCR对132份从广西采集的病鸡样品进行检测,结果得到NDV阳性样品26份、APV阳性样品2份,与血清学方法的鉴定结果一致。随机选取的2份NDV阳性PCR产物与NDV(Gen Bank登录号JX840454)的F基因序列一致,同源性达100%;2份APV阳性PCR产物与APV(Gen Bank登录号AF187154)的F基因序列也完全一致,同源性达100%。【结论】针对NDV和APV建立的二重RT-PCR具有特异性好、灵敏度高、简便快速的特点,可用于临床快速鉴别诊断,为有效防控鸡新城疫和禽肺炎病毒病提供了技术支持。 展开更多

关键词 鸡新城疫病毒(ndv) 禽肺炎病毒(APV) 二重RT-PCR 检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

基于量子点标记技术的鸡新城疫病毒sFLISA检测技术研究 被引量：3

2

作者 房保海 孙涛 +5 位作者 贾俊涛 岳志芹 姜英辉 赵玉然 梁成珠 徐彪 《山东农业科学》 2014年第5期118-121,共4页

本研究建立了基于量子点的鸡新城疫病毒(NDV)sFLISA检测方法。该方法以抗NDV多克隆抗体为捕捉抗体、以生物素标记抗NDV单克隆抗体为检测抗体、以量子点标记的链霉亲和素为荧光探针。该方法与其它有关禽类病毒(产蛋下降综合征病毒、鸡传... 本研究建立了基于量子点的鸡新城疫病毒(NDV)sFLISA检测方法。该方法以抗NDV多克隆抗体为捕捉抗体、以生物素标记抗NDV单克隆抗体为检测抗体、以量子点标记的链霉亲和素为荧光探针。该方法与其它有关禽类病毒(产蛋下降综合征病毒、鸡传染性法氏囊病病毒、禽白血病病毒)无交叉反应,比血凝试验灵敏,为临床早期快速检测NDV提供了行之有效的方法。 展开更多

关键词 鸡新城疫病毒(ndv) 量子点 双抗夹心荧光免疫分析(sFLISA)

在线阅读 下载PDF 职称材料

金线莲提取物体外抑菌及抑制鸡新城疫病毒在CEF上的增殖 被引量：4

3

作者 何玉琴 林标声 +2 位作者 邱龙新 戴爱玲 杨小燕 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2012年第4期520-523,共4页

采用滤纸片扩散法和二倍稀释法测定金线莲不同方法提取物对6种供试菌的体外抑菌效果,并利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定金线莲水提取物对NDV在鸡胚成纤维细胞(CEF)上增殖的影响.结果表明:3种提取方法所获得的金线莲提取物均对链球菌有较... 采用滤纸片扩散法和二倍稀释法测定金线莲不同方法提取物对6种供试菌的体外抑菌效果,并利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定金线莲水提取物对NDV在鸡胚成纤维细胞(CEF)上增殖的影响.结果表明:3种提取方法所获得的金线莲提取物均对链球菌有较强抑制作用,表现为高敏;对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌表现为中敏;对酵母菌和普通变形杆菌的抑制作用不明显,表现为低敏.最小抑菌浓度均不高于12.5 g.L-1.药物与病毒混合组对NDV的抑制率显著高于先病毒后药物组和先药物后病毒组(P<0.05).药物浓度与NDV抑制率存在明显的正相关(P<0.05).在先药物后病毒组和药物与病毒混合组中,15.62-31.25 g.L-1金线莲水提取物具有显著的抗NDV效果;1.95-3.90 g.L-1金线莲水提取物抗NDV效果不明显. 展开更多

关键词 金线莲 提取物 体外抑菌 新城疫病毒(ndv)

在线阅读 下载PDF 职称材料

不同方法处理的金银花提取液在鸡胚内抗新城疫病毒作用 被引量：3

4

作者 梁尧 张钊伟 +1 位作者 张瑞莉 葛铭 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2010年第6期82-83,共2页

关键词 新城疫病 毒作用 提取液 金银花 水提醇沉法 高速离心法 鸡胚 药物残留

在线阅读 下载PDF 职称材料

抗NDVF蛋白单克隆抗体在鹅源新城疫病毒感染快速检测中的应用 被引量：1

5

作者 金文杰 王倩倩 +2 位作者 崔平福 邵红霞 秦爱建 《中国家禽》 北大核心 2012年第20期29-32,共4页

自1997年以来,鹅源新城疫病毒(GNDV)的感染已经成为养鹅业最重要的疾病之一。本研究以抗新城疫病毒融合蛋白单克隆抗体为介导,建立了快速检测鹅源新城疫病毒感染的间接免疫荧光技术(IFA)。所建立的方法特异性强,与传染性法氏囊病病毒、... 自1997年以来,鹅源新城疫病毒(GNDV)的感染已经成为养鹅业最重要的疾病之一。本研究以抗新城疫病毒融合蛋白单克隆抗体为介导,建立了快速检测鹅源新城疫病毒感染的间接免疫荧光技术(IFA)。所建立的方法特异性强,与传染性法氏囊病病毒、马立克氏病病毒及小鹅瘟病毒等均不出现交叉反应;用100TCID50GNDV感染鸡胚成纤维细胞,结果显示在感染后18h就可以检测到GNDV。与技术要求高、操作繁琐的RT-PCR以及病毒分离鉴定相比,IFA检测鹅源新城疫病毒感染具有快速、简单、特异等优点,具有很好的应用前景。 展开更多

关键词 抗ndv F蛋白单克隆抗体 鹅源新城疫病毒(Gndv) IFA

在线阅读 下载PDF 职称材料

鹅源新城疫病毒强毒株从鹅到鸡的传播

6

作者 吴力力 陈立功 +7 位作者 崔华敏 武现军 魏昆鹏 李玉荣 万洪全 刘向平 王小波 王宝安 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第11期38-39,共2页

关键词 鹅源新城疫病毒 强毒株 传播 鹅副黏病毒病 鸡 生物学特性 ndv 流行趋势

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸡源新城疫病毒强毒株从鸡到鹅的传播

7

作者 陈立功 吴力力 +3 位作者 李玉荣 王小波 万洪全 王宝安 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第3期20-21,共2页

关键词 鹅副黏病毒病 新城疫病毒 强毒株 鸡源 传播 生物学特性 ndv 流行趋势

在线阅读 下载PDF 职称材料

新城疫病毒对不同日龄及抗体水平的肉仔鸡致病性研究 被引量：2

8

作者 宋秀红 赵化阳 +1 位作者 高晓磊 刘思当 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期115-119,共5页

将正常免疫的AA肉仔鸡于10、20及30日龄时,按抗体水平的高低分成2组(H组、L组),接种新城疫病毒建立人工致病模型,对攻毒鸡群的症状、病理变化及抗体水平进行动态观察。结果发现,日龄及抗体水平不同的肉仔鸡均表现非典型新城疫,淋巴组织... 将正常免疫的AA肉仔鸡于10、20及30日龄时,按抗体水平的高低分成2组(H组、L组),接种新城疫病毒建立人工致病模型,对攻毒鸡群的症状、病理变化及抗体水平进行动态观察。结果发现,日龄及抗体水平不同的肉仔鸡均表现非典型新城疫,淋巴组织广泛性坏死是其主要病变,L组比H组病情严重。发病率及病理变化的程度10日龄时攻毒低于20与30日龄攻毒,各感染组鸡的抗体水平均呈先迅速下降后逐渐回升的消长规律,但L组抗体水平始终低于H组。试验结果表明,日龄及抗体水平与抵御新城疫病毒的攻击能力密切相关。 展开更多

关键词 新城疫病毒(ndv) 肉鸡 抗体水平 日龄 致病性

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸡新城疫病毒LaSota株在BHK-21细胞上增殖条件的优化 被引量：7

9

作者 董炳梅 孙培娇 +2 位作者 苗立中 沈志强 韩文瑜 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第3期858-864,共7页

本研究旨在对鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)LaSota株在BHK-21细胞上的增殖条件进行优化,为实现应用细胞系生产NDV提供参考。在确定BHK-21细胞TPCK-胰酶耐受浓度的基础上,在培养基中添加不同浓度的TPCK-胰酶、新生牛血清及... 本研究旨在对鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)LaSota株在BHK-21细胞上的增殖条件进行优化,为实现应用细胞系生产NDV提供参考。在确定BHK-21细胞TPCK-胰酶耐受浓度的基础上,在培养基中添加不同浓度的TPCK-胰酶、新生牛血清及调节不同pH,通过对细胞培养液细胞半数感染量(TCID_(50))的测定,确定最适胰酶浓度、血清浓度及pH;通过固定接毒量而添加不同数量细胞或固定细胞数量而接种不同量的病毒,确定最适细胞量及接毒量;将BHK-21细胞接种NDV LaSota株后,通过测定不同时间细胞上清液TCID_(50)绘制增殖曲线,确定最佳收毒时间;应用转瓶对该病毒进行扩大培养,并进行TCID_(50)、鸡胚半数感染量(EID_(50))与血清凝集价(HA)的测定。结果显示,NDV LaSota株在BHK-21细胞上增殖的最适TPCK-胰酶浓度为3μg/mL,最适接毒量为10^(6.375) EID_(50),细胞数量为1×10~6个,培养基pH为7.2,且可用无血清培养基进行培养,BHK-21细胞接种NDV LaSota株后最佳收毒时间为34～36 h。应用BHK-21细胞采用转瓶培养的方式对NDV LaSota株进行增殖,结果显示,细胞培养液TCID_(50)值为10^(7.0)/0.1 mL,EID_(50)为10^(7.5)/0.1 mL,HA效价为1∶256。因此,应用以上条件增殖培养NDV LaSota株,完全适用于该病毒的规模化生产,且符合现行的兽医生物制品与检验制造规程。 展开更多

关键词 新城疫病毒(ndv) LaSota株 BHK-21细胞 增殖

在线阅读 下载PDF 职称材料

一株蛋鸡新城疫病毒的分离鉴定及全基因组序列分析 被引量：7

10

作者 李佳佳 宋建领 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第1期221-228,共8页

为研究云南新城疫病毒(NDV)分子流行特性和致病性,对云南省1个蛋鸡场的组织样品进行病原分离,通过血凝、血凝抑制试验和RT-PCR检测分离毒株,证明为NDV。通过病毒最小致死量(MLD)、鸡胚半数感染量(EID 50)、鸡胚平均死亡时间(MDT)、脑内... 为研究云南新城疫病毒(NDV)分子流行特性和致病性,对云南省1个蛋鸡场的组织样品进行病原分离,通过血凝、血凝抑制试验和RT-PCR检测分离毒株,证明为NDV。通过病毒最小致死量(MLD)、鸡胚半数感染量(EID 50)、鸡胚平均死亡时间(MDT)、脑内接种致病指数(ICPI)和静脉接种致病指数(IVPI)测定病毒毒力,结果EID 50为10-4.4,MLD为10-4,MDT为97.5 h,ICPI为0,IVPI为0,显示分离株为弱毒株。高通量测序及遗传进化分析发现,分离毒株基因组全长为15198 bp,从3′端到5′端有6个结构基因依次为NP-P-M-F-HN-L,各基因之间有1~48个核苷酸间隔。全基因组、F和HN基因遗传进化分析证明分离毒株属于ClassⅠ分支,F基因ORF全长为1662 bp,编码553个氨基酸,F蛋白裂解位点氨基酸序列为112-ERQERL-117,符合NDV弱毒裂解位点特征,HN基因ORF全长为1851 bp,编码616个氨基酸,在HN基因保守区域234-NRKSCS-239位氨基酸序列没有发生变异。F蛋白有6个糖基化位点比较保守,HN蛋白有6个潜在的糖基化位点,但与LaSota相比存在缺失的和多出的糖基化位点。F蛋白半胱氨酸残基分布在76、199、338、347、362、370、394、399、401、424、514、523位氨基酸,F蛋白中性抗原位点在72、75、79和170位氨基酸发生了变异,HN蛋白受体结合部位和NA活性位点氨基酸为174R、401E、416R、526Y,未发生变异。本研究首次报道了云南省蛋鸡新城疫ClassⅠ毒株的全基因序列特征,为新城疫病毒ClassⅠ毒株研究奠定了基础。 展开更多

关键词 新城疫病毒(ndv) 高通量测序 ClassⅠ F基因 HN基因 进化分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

中草药对鸡新城疫病毒鸡胚复制的抑制试验报告 被引量：1

11

作者 贲巧云 房忠文 +2 位作者 林春林 韩书英 曹伟 《中国家禽》 北大核心 2007年第1期33-34,共2页

　　多种中草药具有抗病毒和增强免疫机能的作用,为探索中草药对鸡新城疫病毒的抑制作用,笔者选用金银花、板兰根、连翘、黄芩进行了人工感染鸡胚新城疫病毒的复制抑制试验,现报告如下:……

关键词 鸡胚 强毒 鸡新城疫病毒 ndv 抑制试验 中草药

在线阅读 下载PDF 职称材料

新城疫病毒TS09耐热株在BHK细胞上的传代培养 被引量：8

12

作者 温国元 商雨 +5 位作者 郭静 杨峻 王红琳 罗青平 张蓉蓉 邵华斌 《湖北农业科学》 北大核心 2012年第23期5424-5427,5435,共5页

以新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)TS09耐热株为研究对象,研究了该毒株在幼仓鼠肾传代细胞(BHK细胞)上的培养适应性。通过培养条件的优化、连续传代培养和极限稀释法纯化,获得了一株新的、纯化的、适应BHK细胞的NDV耐热株,命名... 以新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)TS09耐热株为研究对象,研究了该毒株在幼仓鼠肾传代细胞(BHK细胞)上的培养适应性。通过培养条件的优化、连续传代培养和极限稀释法纯化,获得了一株新的、纯化的、适应BHK细胞的NDV耐热株,命名为TS09-C株。TS09-C株的生物学特性测定结果表明,TS09-C株在BHK细胞中的增殖滴度为107.9TCID50/mL,平均鸡胚致死时间(MDT)大于120 h,脑内致病指数(ICPI)为0。与亲本株TS09株相比,TS09-C株的基因序列发生了较为明显的改变,但TS09-C株与亲本株仍保持着较近的遗传进化关系。 展开更多

关键词 新城疫病毒(Newcastle Disease Virus ndv) 耐热 BHK细胞 传代

在线阅读 下载PDF 职称材料

单抗标记检测新城疫病毒免疫胶体金试纸条的研制 被引量：5

13

作者 李希友 田夫林 +2 位作者 张秀娥 李建亮 崔言顺 《西南农业学报》 CSCD 2006年第6期1162-1165,共4页

利用柠檬酸钠还原氯金酸,形成胶体金颗粒,选择直径20 nm的胶体金颗粒标记单克隆抗体4E8,用兔抗鼠二抗喷洒在硝酸纤维素膜上作为对照线,用另一株单抗5E6作为检测线,制备成胶体金试纸条。用试纸条检测120份泄殖腔样品,结果与病毒增殖后HA... 利用柠檬酸钠还原氯金酸,形成胶体金颗粒,选择直径20 nm的胶体金颗粒标记单克隆抗体4E8,用兔抗鼠二抗喷洒在硝酸纤维素膜上作为对照线,用另一株单抗5E6作为检测线,制备成胶体金试纸条。用试纸条检测120份泄殖腔样品,结果与病毒增殖后HA法测得的结果符合率为95.8%,HA效价在1∶2以上,试纸条均能检测为阳性,与其他病毒的阳性血清没有交叉反应,且室温下可有效保存6个月。试纸条应用方便、快速,适合临床推广以及流行病学调查。 展开更多

关键词 新城疫病毒(ndv) 试纸条 胶体金 单克隆抗体

在线阅读 下载PDF 职称材料

人工感染鸭源新城疫病毒对绍鸭β-防御素和细胞因子基因表达的影响 被引量：5

14

作者 许丽文 王秋玲 +2 位作者 王芳芳 刘诚刚 马得莹 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第2期536-547,共12页

试验旨在探讨人工感染鸭源新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)对绍鸭β-防御素(avianβ-defensins,AvBDs)和细胞因子基因表达的影响。选用45只20日龄SPF绍鸭,随机分为攻毒组(27只)和对照组(18只),攻毒组采用滴鼻点眼的途径(108.38... 试验旨在探讨人工感染鸭源新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)对绍鸭β-防御素(avianβ-defensins,AvBDs)和细胞因子基因表达的影响。选用45只20日龄SPF绍鸭,随机分为攻毒组(27只)和对照组(18只),攻毒组采用滴鼻点眼的途径(108.38 EID50)接种鸭源NDV强毒株(Md/CH/LGD/1/2005),对照组接种磷酸盐缓冲液。在攻毒后24和48h,从对照组及攻毒组各随机取6只鸭屠宰,分别采集肾脏、肺脏、气管、腺胃、骨髓、脾脏、盲肠扁桃体、哈德氏腺、法氏囊9个组织,运用实时荧光定量PCR法检测组织样品中9种AvBDs和细胞因子的表达量;剩余鸭每天持续观察,每隔4d采血1次,直至24d,检测血清抗体水平;于攻毒后24、48、72和120h采集咽喉及泄殖腔拭子,以确定排毒周期。结果表明,感染该NDV毒株后,鸭没有临床发病症状和死亡情况发生;感染后鸭排毒开始于攻毒后第1天,到第5天停止,在攻毒组咽喉及泄殖腔拭子中均检测到NDV。抗体水平检测结果显示,该NDV能够诱导鸭体内产生抗NDV特异抗体。实时荧光定量PCR结果发现,与对照组相比,感染后24h,部分鸭组织中AvBD1、AvBD2、AvBD5、AvBD6、AvBD9和AvBD16表达量均显著升高(P<0.05);感染后48h,AvBD1和AvBD6在部分鸭组织中表达量均显著上调(P<0.05);感染后48h法氏囊中白细胞介素6(IL-6)和脾脏中干扰素γ(IFN-γ)的表达量明显低于感染后24h的表达量。综上所述,该鸭源NDV毒株感染可诱导绍鸭体内在早期产生天然免疫反应,这些反应可能与病毒在机体内复制有关。 展开更多

关键词 绍鸭 新城疫病毒(ndv) 禽β-防御素(AvBDs) 细胞因子

在线阅读 下载PDF 职称材料

新城疫病毒HN基因克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量：4

15

作者 刘铀 毕英佐 曹永长 《西南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期785-788,共4页

用RT-PCR方法扩增新城疫病毒HN基因并将其克隆至T载体,测定其核苷酸序列。尔后用PCR扩增球状头部编码区,并将其克隆至pSOC质粒soc基因3'端EcoRⅠ位点,重组质粒pSOC-HN转化E.coliBL-21(DE3)感受态细胞,以终浓度1mmol/L的IPTG诱导表达... 用RT-PCR方法扩增新城疫病毒HN基因并将其克隆至T载体,测定其核苷酸序列。尔后用PCR扩增球状头部编码区,并将其克隆至pSOC质粒soc基因3'端EcoRⅠ位点,重组质粒pSOC-HN转化E.coliBL-21(DE3)感受态细胞,以终浓度1mmol/L的IPTG诱导表达,在SDS-PAGE凝胶上可检测到分子量约67KD的融合蛋白特异条带,west-blot证实表达产物与NDV抗血清具有良好的反应性。 展开更多

关键词 新城疫病毒(ndv) HN基因 克隆 表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

五味消毒饮加味体外抑菌和抑制新城疫病毒试验 被引量：3

16

作者 张为民 邢福珊 +3 位作者 张彦明 徐永平 张伟玲 张德刚 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期7-11,共5页

为了解五味消毒饮及加味对临床分离致病菌的体外抑制作用及对新城疫病毒(NDV)在鸡胚内增殖的抑制作用,采用水煎醇沉法得到五味消毒饮及加味的供试水煎液,琼脂扩散法和试管倍比稀释法测定对11株分离菌的体外抑制作用;鸡胚法测定五味消毒... 为了解五味消毒饮及加味对临床分离致病菌的体外抑制作用及对新城疫病毒(NDV)在鸡胚内增殖的抑制作用,采用水煎醇沉法得到五味消毒饮及加味的供试水煎液,琼脂扩散法和试管倍比稀释法测定对11株分离菌的体外抑制作用;鸡胚法测定五味消毒饮加味对新城疫病毒(NDV)在鸡胚内增殖的抑制作用。结果表明,五味消毒饮对沙门菌(鸡)、链球菌(猪)、无乳链球菌(奶牛)、2株表皮葡萄球菌(奶牛)、绿脓杆菌(奶牛)和金黄色葡萄球菌(奶牛)的最小杀菌质量浓度(MBC)分别为大于1、1、0.5、0.5(0.5)、0.5和1 g/mL,五味消毒饮加味的MBC分别为1、0.5、0.25、0.25(0.25)、0.5和1 g/mL;五味消毒饮加味0.2、0.1和0.05g/mL对NDV在鸡胚内增殖与对照组比较具有显著的抑制作用(P<0.05或P<0.01),药毒混合组>预防组>治疗组。五味消毒饮加味抑菌作用优于原方,并对NDV在鸡胚内增殖具有抑制作用。 展开更多

关键词 五味消毒饮 体外抑菌 新城疫病毒(ndv)

在线阅读 下载PDF 职称材料

新城疫病毒耐热弱毒TS09-C株反向遗传操作系统的建立 被引量：3

17

作者 温国元 郭静 +9 位作者 商雨 陈晨 王红琳 罗青平 张蓉蓉 王宏才 张腾飞 杨峻 程国富 邵华斌 《湖北农业科学》 北大核心 2014年第24期6075-6078,6081,共5页

为了建立新城疫病毒(NDV)耐热弱毒株的反向遗传操作平台,以NDV TS09-C耐热弱毒株为研究对象,构建了TS09-C株的全长c DNA克隆质粒和3个分别表达NP、P和L的辅助质粒。通过4个质粒共转染预感染有表达T7 RNA聚合酶的痘病毒的BHK-21细胞,拯... 为了建立新城疫病毒(NDV)耐热弱毒株的反向遗传操作平台,以NDV TS09-C耐热弱毒株为研究对象,构建了TS09-C株的全长c DNA克隆质粒和3个分别表达NP、P和L的辅助质粒。通过4个质粒共转染预感染有表达T7 RNA聚合酶的痘病毒的BHK-21细胞,拯救出了重组病毒r TS09-C株。生物学特性试验结果表明,重组病毒r TS09-C株具有与亲本株相似的耐热、弱毒和细胞增殖特性。NDV耐热毒株反向遗传操作系统的建立为耐热活疫苗载体的研究,进一步研发新型多联(多价)耐热禽用活疫苗提供了技术平台,也为耐热机理的研究打下基础。 展开更多

关键词 新城疫病毒(ndv) 耐热 反向遗传操作

在线阅读 下载PDF 职称材料

表达禽腺病毒血清4型Fiber2蛋白的重组耐热新城疫病毒的构建及免疫效果评估 被引量：2

18

作者 商雨 李林涛 +9 位作者 李丽 徐英英 冯贺龙 汪宏才 张蓉蓉 曾哲 王红琳 罗青平 邵华斌 温国元 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第2期650-659,共10页

【目的】研究针对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)和禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)的耐热基因工程疫苗。【方法】利用反向遗传学操作技术将NDV耐热株的HN基因替换到LaSota疫苗株上,再将禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus sero... 【目的】研究针对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)和禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)的耐热基因工程疫苗。【方法】利用反向遗传学操作技术将NDV耐热株的HN基因替换到LaSota疫苗株上,再将禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)的Fiber2基因插入到其基因组上,构建表达Fiber2蛋白的重组耐热NDV质粒pTS-HN-Fiber2。通过病毒拯救技术拯救重组NDV rTS-HN-Fiber2,并测定其生物学特性和作为疫苗候选株的免疫原性和攻毒保护性。【结果】rTS-HN-Fiber2的鸡胚平均致死时间>168 h,且脑内接种致病指数为0,属于弱毒的范畴;在细胞上的生长曲线结果表明,rTS-HN-Fiber2与亲本LaSota株有相似的生长曲线,但最终的生长滴度略低于LaSota株;rTS-HN-Fiber2在56℃处理15 min后,病毒滴度下降约10^(3) TCID_(50)/mL,而LaSota株56℃处理5 min几乎无感染性;间接免疫荧光试验结果表明,rTS-HN-Fiber2能表达Fiber2蛋白。免疫和攻毒试验结果显示,rTS-HN-Fiber2能产生NDV抗体,且能显著提高雏鸡在FAdV-4强毒下的存活率,减轻FAdV-4强毒引起的组织病变,降低组织中的病毒载量。【结论】本研究成功构建了表达FAdV-4 Fiber2蛋白的重组耐热NDV,该病毒保持了亲本LaSota株的弱毒生物学特性,但热稳定性有显著提升;重组NDV免疫雏鸡可产生针对NDV和FAdV-4强毒的保护,该重组NDV可作为开发针对FAdV-4和NDV二联基因工程疫苗的候选病毒株。 展开更多

关键词 禽腺病毒血清4型(FAdV-4) 新城疫病毒(ndv) Fiber2蛋白 重组病毒 耐热

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸭源新城疫病毒的生物学特性 被引量：4

19

作者 钱忠明 宋红芹 +1 位作者 钱晨 陈义平 《中国家禽》 北大核心 2005年第6期15-17,共3页

用鸡胚尿囊腔传代法从23个鸭泄殖腔拭子中分离到1株病毒,经血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验鉴定为新城疫病毒。该毒株的ELD50为5.85log10,鸡胚平均致死时间(MDT)为92.5h,1日龄鸡脑内致病指数(ICPI)为0.5,6周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI)为0.3... 用鸡胚尿囊腔传代法从23个鸭泄殖腔拭子中分离到1株病毒,经血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验鉴定为新城疫病毒。该毒株的ELD50为5.85log10,鸡胚平均致死时间(MDT)为92.5h,1日龄鸡脑内致病指数(ICPI)为0.5,6周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI)为0.3,属于中等偏弱毒力的毒株。该毒株不引起6周龄雏鸡发病。结果表明家鸭也能感染NDV。 展开更多

关键词 新城疫病毒 生物学特性 鸭源 脑内致病指数 ELD50 试验鉴定 血凝抑制 致死时间 泄殖腔 毒株 ndv 鸡胚 周龄 日龄 接种 毒力 发病 雏鸡 家鸭

在线阅读 下载PDF 职称材料

2004年黑龙江省新城疫病毒分子流行病学分析 被引量：9

20

作者 连宏军 刘培欣 +5 位作者 闫丽辉 曹殿军 孙建宏 梁宏志 韩正博 冉多良 《动物医学进展》 CSCD 2005年第7期91-97,共7页

2004年从黑龙江省部分鸡场疑似新城疫(ND)病死鸡和鸽体内分离到9株NDV。对这9株NDV生物学特性进行测定,并对其F基因包括裂解位点在内的540bp片段进行了克隆、测序和同源性分析。结果表明,9株NDV鸡胚平均死亡时间(MDT)和1日龄雏鸡脑内接... 2004年从黑龙江省部分鸡场疑似新城疫(ND)病死鸡和鸽体内分离到9株NDV。对这9株NDV生物学特性进行测定,并对其F基因包括裂解位点在内的540bp片段进行了克隆、测序和同源性分析。结果表明,9株NDV鸡胚平均死亡时间(MDT)和1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)分别在47.8h～78.4h和1.51～2.00之间;8个分离株在F蛋白裂解位点氨基酸顺序为112RRQKRF117,1个分离株F蛋白裂解位点氨基酸顺序为112RRQRRF117,表明了它们全为ND中、强毒株。同源性分析显示,9株NDV分离株之间核苷酸与推导的氨基酸同源性分别为79.7%～99.7%和79.8%～100%;系统发生树分析表明,6株分离株与台湾株(TW98、TW99和TW2000等)遗传距离较近,可能有共同的起源,为基因Ⅶe型NDV,2株为鸽源NDV基因Ⅵ型,1株与我国特有的F48E9遗传距离最近,为基因Ⅸ型NDV。 展开更多

关键词 2004年 黑龙江省 流行病学分析 新城疫 病毒分子 同源性分析 裂解位点 氨基酸同源性 遗传距离 ndv 生物学特性 系统发生树 分离株 死亡时间 F蛋白 病死鸡 F基因 强毒株 核苷酸 分析表 顺序 鸡场 接种 日龄 鸡胚 鸽源

在线阅读 下载PDF 职称材料