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禽流感病毒H9N2与新城疫病毒在鸡成纤维细胞中共感染对病毒复制的影响 被引量:5
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作者 谢军 孙英杰 +3 位作者 周昌娈 朱善元 丁铲 柏家林 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期2521-2528,共8页
临床上禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)与新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)共同感染情况经常发生。为研究AIV与NDV在鸡成纤维细胞DF-1中的共感染对病毒复制的相互影响,首先对NDV和H9N2亚型AIV单独感染DF-1细胞时病毒的... 临床上禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)与新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)共同感染情况经常发生。为研究AIV与NDV在鸡成纤维细胞DF-1中的共感染对病毒复制的相互影响,首先对NDV和H9N2亚型AIV单独感染DF-1细胞时病毒的复制情况进行了分析,设定以NDV和AIV共感染细胞后12和24h作为样品采集点,通过Western blot、间接免疫荧光和实时荧光定量PCR检测了两种病毒共感染与单独感染对病毒NP蛋白表达的相互影响。结果显示:Western blot分析表明共感染12和24h,NDV NP蛋白的表达分别下调了70.6%(P<0.001)和45.7%(P<0.001),AIV NP蛋白的表达分别下调了61.5%(P<0.001)和82.8%(P<0.001);免疫荧光分析显示共感染组细胞中NDV和AIV的NP蛋白丰度在感染12h时间点分别下调81.1%(P<0.001)和65.5%(P<0.001),24h时则分别下调41.2%(P<0.05)和47.4%(P<0.001);qPCR结果也证实共感染12和24h组NDV NP的mRNA表达水平分别下调了64.3%(P<0.001)和64.4%(P<0.05),AIV NP的mRNA表达水平分别下调了61.5%(P<0.001)和63.0%(P<0.001)。本研究证明AIV与NDV共感染在细胞水平上可引起病毒复制的相互抑制,为研究NDV和AIV共感染机制在细胞水平上奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 新城疫病毒 鸡成纤维细胞df-1 共感染 病毒复制
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利用PiggyBac转座系统构建稳定表达鹅RIG-I的DF-1细胞系 被引量:4
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作者 胡跃 孙英杰 +5 位作者 王晓旭 仇旭升 宋翠萍 谭磊 胡桂学 丁铲 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第3期53-60,共8页
维甲酸诱导基因-I(retinoic acid inducible gene-I,RIG-I)是最近几年发现的一种细胞内模式识别受体,能够特异性的识别并结合病毒RNA,进而发挥抗病毒效应。RIG-I在进化中相对保守,但已有报道和我们的前期研究显示:家禽中鸭和鹅体内均有R... 维甲酸诱导基因-I(retinoic acid inducible gene-I,RIG-I)是最近几年发现的一种细胞内模式识别受体,能够特异性的识别并结合病毒RNA,进而发挥抗病毒效应。RIG-I在进化中相对保守,但已有报道和我们的前期研究显示:家禽中鸭和鹅体内均有RIG-I受体,但鸡却缺乏RIG-I受体。为了研究这种天然缺失对鸡是否有不利影响,本研究利用PiggyBac转座系统将鹅源RIG-I转染入鸡胚成纤维细胞系DF-1,两次亚克隆后获得单个克隆,以荧光、RT-PCR及Western blot进行鉴定,最终获得稳定表达鹅RIG-I的DF-1细胞系,为进一步研究鸡的先天性免疫机制和鹅RIG-I的功能打下基础。 展开更多
关键词 鹅维甲酸诱导基因-I 纤维细胞df-1 PiggyBac转座系统
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新型鸭呼肠孤病毒在DF-1细胞系中的增殖特性 被引量:1
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作者 云涛 华炯钢 +3 位作者 叶伟成 倪征 陈柳 张存 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第5期716-721,共6页
为了研究新型鸭呼肠孤病毒(new-type duck reovirus,NDRV)在鸡胚成纤维细胞DF-1中的增殖特性,将NDRV JDM10毒株接种到DF-1细胞,连续传代后,通过观察病毒对细胞的致病变效应,测定半数组织感染量(TCID_(50))、RT-PCR检测、间接免疫荧光(I... 为了研究新型鸭呼肠孤病毒(new-type duck reovirus,NDRV)在鸡胚成纤维细胞DF-1中的增殖特性,将NDRV JDM10毒株接种到DF-1细胞,连续传代后,通过观察病毒对细胞的致病变效应,测定半数组织感染量(TCID_(50))、RT-PCR检测、间接免疫荧光(IFA)及Western-blot免疫学检测,探索NDRV对DF-1细胞的作用效果。结果表明,NDRV JDM10毒株在DF-1细胞中能有效增殖,产生明显的致病变效应;RT-PCR检测成功扩增出1条大小为1 001 bp的条带;病毒蛋白在细胞中获得了良好的表达,并与抗NDRVσC单克隆抗体发生特异性反应;NDRV JDM10毒株在感染DF-1细胞后会经历潜伏期、快速增长期、稳定期3个时期,并在72 h病毒效价达到峰值,TCID_(50)为1×10^(-7.90)·(0.1mL)^(-1)。本研究为进一步研究NDRV的致病机理和研制细胞疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 新型鸭呼肠孤病毒(NDRV) 纤维(df-1)细胞 增殖特性
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长非编码RNA lnc-ALVE1-AS1与禽白血病病毒抗性和易感品系鸡相关性分析 被引量:3
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作者 柴文娴 骆欢 +4 位作者 陈绪靖 陈世豪 耿拓宇 崔恒宓 胡序明 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第4期26-32,共7页
内源性反转录病毒是长非编码RNA的重要来源,在抗病毒先天性免疫中发挥重要作用。鸡内源性反转录病毒衍生的长非编码RNA lnc-ALVE1-AS1能够激活细胞免疫功能并抑制禽白血病病毒增殖。为进一步探讨lnc-ALVE1-AS1在ALV抗性和易感品系鸡中... 内源性反转录病毒是长非编码RNA的重要来源,在抗病毒先天性免疫中发挥重要作用。鸡内源性反转录病毒衍生的长非编码RNA lnc-ALVE1-AS1能够激活细胞免疫功能并抑制禽白血病病毒增殖。为进一步探讨lnc-ALVE1-AS1在ALV抗性和易感品系鸡中的表达规律及其与禽白血病病毒抗性的相关性,本研究通过荧光定量PCR发现,lnc-ALVE1-AS1在ALV抗性(G1)品系鸡免疫器官(胸腺、脾脏和法氏囊)和CEF细胞中的表达水平显著高于ALV易感(G3)品系鸡。病毒感染实验表明lnc-ALVE1-AS1在ALVJ感染CEF(G1和G3来源)细胞24h和96h后均显著下调;但是,lnc-ALVE1-AS1在G3来源CEF细胞中的表达水平下降更为明显,且ALVJ病毒复制水平显著高于G1鸡来源的CEF细胞。进一步通过lnc-ALVE1-AS1过表达实验证实,lnc-ALVE1-AS1不仅可以显著上调G3来源CEF细胞dsRNA识别受体(TLR3和IFIH1)和抗病毒天然免疫基因(IFI27-L2、IFIT5、IFITM3、IFN-β、ISG12-2和RASD2)表达,还显著抑制ALVJ复制。本研究揭示了lnc-ALVE1-AS1在禽白血病病毒抗性和易感品系鸡细胞和免疫组织器官中的表达规律和抗病毒功能,为抗病育种研究提供了新的遗传基础。 展开更多
关键词 内源性反转录病毒 lnc-ALVE1-AS1 禽白血病病毒 纤维细胞
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体外试验探究Ⅱ型ZTC1+1天然澄清剂对连翘煎剂安全性的影响
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作者 肖传飞 张瑞莉 葛铭 《中兽医医药杂志》 2010年第6期11-13,共3页
目的:探究Ⅱ型ZTC1+1天然澄清剂对连翘煎剂安全性的影响。方法:将连翘煎剂经Ⅱ型ZTC1+1天然澄清剂处理,经过浓度梯度稀释后作用于鸡胚成纤维细胞(CEF),通过细胞病变的观察和MTT法以确定Ⅱ型ZTC1+1天然澄清剂对连翘煎剂安全性的影响。结... 目的:探究Ⅱ型ZTC1+1天然澄清剂对连翘煎剂安全性的影响。方法:将连翘煎剂经Ⅱ型ZTC1+1天然澄清剂处理,经过浓度梯度稀释后作用于鸡胚成纤维细胞(CEF),通过细胞病变的观察和MTT法以确定Ⅱ型ZTC1+1天然澄清剂对连翘煎剂安全性的影响。结果:试验组的安全浓度范围比对照组扩大10倍,并且试验组的CEF生长状态较对照组和正常组更好。结论:Ⅱ型ZTC1+1天然澄清剂对连翘煎剂有良好的澄清效果,并能提高其安全性。 展开更多
关键词 Ⅱ型ZTC1+1天然澄清剂 连翘 纤维细胞(CEF) MTT
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笃斯越桔花色苷抗禽白血病病毒A亚群活性的试验研究 被引量:2
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作者 张莉 雷用东 +5 位作者 盖丽丽 赵晓燕 童军茂 王丹 马越 张超 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2013年第6期174-180,共7页
为探讨笃斯越桔花色苷(Anthocyanin from Vaccinium uliginosum L.,AVU)抑制禽白血病病毒A亚群(Avian leukosis virus subgroup A,ALV-A)的生物活性作用。以笃斯越桔花色苷粉为试验材料,采用高效液相色谱仪与质谱仪联机(HPLC-MS)方法鉴... 为探讨笃斯越桔花色苷(Anthocyanin from Vaccinium uliginosum L.,AVU)抑制禽白血病病毒A亚群(Avian leukosis virus subgroup A,ALV-A)的生物活性作用。以笃斯越桔花色苷粉为试验材料,采用高效液相色谱仪与质谱仪联机(HPLC-MS)方法鉴定其花色苷主要活性成分,将AVU作用于感染ALV-A的DF-1鸡胚成纤维细胞(DF-1细胞)单层表面,通过检测AVU对感染ALV-A的DF-1细胞形态学变化及采用MTT法测定细胞存活情况来研究AVU的抗病毒作用。结果表明,笃斯越桔花色苷粉中含6种花色苷活性成分,其中主要为矢车菊色素-3-葡萄糖苷;AVU对DF-1细胞的最大安全质量浓度为80μg/mL;AVU在40~80μg/mL安全浓度范围内能抑制ALV-A的增殖,且抑制程度与剂量呈一定相关性;AVU质量浓度为60μg/mL能够显著抑制ALV-A对DF-1细胞感染。 展开更多
关键词 笃斯越桔 花色苷 df-1纤维细胞 禽白血病病毒A亚群 生物活性
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