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DOT1L敲除的鸡胚成纤维细胞系构建及其对ALV-J复制和细胞信号通路的影响
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作者 余莫涵 王鑫妍 +4 位作者 蔡清清 王佳兴 高琦 常国斌 陈世豪 《中国家禽》 北大核心 2025年第8期1-10,共10页
研究旨在通过CRISPR-Cas9技术构建DOT1L基因敲除的鸡胚成纤维细胞系(DF-1),并分析DOT1L基因敲除对J亚群禽白血病病毒(ALV-J)复制及其细胞信号通路的影响,也为后续进一步研究DOT1L的生物学功能提供生物材料。研究首先利用CRISPR/Cas9基... 研究旨在通过CRISPR-Cas9技术构建DOT1L基因敲除的鸡胚成纤维细胞系(DF-1),并分析DOT1L基因敲除对J亚群禽白血病病毒(ALV-J)复制及其细胞信号通路的影响,也为后续进一步研究DOT1L的生物学功能提供生物材料。研究首先利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建DOT1L基因敲除的DF-1细胞系,分析野生型和敲除细胞对ALV-J复制的影响,再通过转录组测序技术对敲除细胞与野生型细胞的基因表达谱进行了差异分析。结果显示:设计的sgRNA均具有T7E1酶切割活性且sgRNA-1切割活性最高。DNA测序显示,筛选DOT1L敲除的阳性细胞外显子区域分别缺失2个和4个碱基,导致移码突变产生。Western blot验证DOT1L基因敲除的单克隆细胞的H3K79me2水平显著降低(P<0.05),并且DOT1L敲除显著抑制ALV-J复制。RNA-Seq结果显示,与野生细胞系相比DOT1L敲除细胞系的差异表达基因(DEGs)共有2821个,其中上调基因1384个,下调基因1437个。DEGs的GO功能注释主要与细胞成长代谢和生物过程的调节相关;KEGG通路富集分析主要集中在细胞黏附、ECM受体和Wnt途径等信号通路。综上,研究首次成功构建了DOT1L基因敲除的鸡胚成纤维细胞系,并通过转录组测序分析和筛选DOT1L基因敲除细胞系的差异基因表达谱,这有助于理解DOT1L基因在鸡胚成纤维细胞中的潜在作用,还为进一步探究鸡DOT1L的抗病毒天然免疫调控功能提供重要的生物材料。 展开更多
关键词 DOT1L基因 纤维细胞系 CRISPR-Cas9 ALV-J 转录组测序
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蓝莓花色苷对鸡胚成纤维细胞系生长的影响 被引量:1
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作者 王丹 黄紫藤 +1 位作者 马越 赵晓燕 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2016年第8期13-16,共4页
以花色苷含量为21.34%的蓝莓花色苷粉末为原料,采用MTT法、显微镜观察法,同时利用细胞计数仪测定细胞活率,3种方法共同检测蓝莓花色苷作用于鸡胚成纤维细胞系的细胞毒性,以完成细胞试验模型的建立。结果表明t50~100μg/mL的蓝... 以花色苷含量为21.34%的蓝莓花色苷粉末为原料,采用MTT法、显微镜观察法,同时利用细胞计数仪测定细胞活率,3种方法共同检测蓝莓花色苷作用于鸡胚成纤维细胞系的细胞毒性,以完成细胞试验模型的建立。结果表明t50~100μg/mL的蓝莓花色苷可以促进鸡胚成纤维细胞生长。高于100μg/mL的蓝莓花色苷,对细胞生长产生抑制作用。该结果可为进一步拓展花色苷功能性研究,以及以鸡胚成纤维细胞为模型的生物功能性研究提供理论依据。 展开更多
关键词 蓝莓花色苷 纤维细胞系 MTT法
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先导编辑在鸡胚成纤维细胞系中的效率研究
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作者 高翔 韩瑞莹 +4 位作者 张喆 伍钊涛 唐非台 王晓丽 唐小川 《中国家禽》 北大核心 2023年第12期1-8,共8页
为探究先导编辑在鸡细胞系中的基因编辑效率,研究通过点突变和重组连接的方式构建先导编辑的表达质粒,使用在线软件设计并化学合成靶向OVM、MSTN和NHE1基因的先导编辑引导RNA(pegRNA)质粒,脂质体转染上述质粒至鸡胚成纤维细胞系(DF-1)... 为探究先导编辑在鸡细胞系中的基因编辑效率,研究通过点突变和重组连接的方式构建先导编辑的表达质粒,使用在线软件设计并化学合成靶向OVM、MSTN和NHE1基因的先导编辑引导RNA(pegRNA)质粒,脂质体转染上述质粒至鸡胚成纤维细胞系(DF-1)中并进行药物筛选,PCR产物TA克隆测序检测并统计各位点的编辑效率。结果显示:测序和PCR鉴定结果表明先导编辑表达质粒构建成功;DF-1中OVM基因经先导编辑后成功产生错义突变,其中精确编辑效率为41.10%、错误插入与缺失(indel)效率为6.67%,均显著优于对照组的常规基因编辑(P<0.05);MSTN基因的先导编辑精确编辑效率为10.24%、indel效率为13.57%,NHE1基因的先导编辑精确编辑效率为24.88%、indel效率为7.18%。结果验证了先导编辑在鸡细胞系中的有效性和普适性,为其进一步应用于基因编辑鸡的制备奠定基础。 展开更多
关键词 先导编辑 纤维细胞系 CRISPR基因编辑 同源重组修复
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利用PiggyBac转座系统构建稳定表达鹅RIG-I的DF-1细胞系 被引量:4
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作者 胡跃 孙英杰 +5 位作者 王晓旭 仇旭升 宋翠萍 谭磊 胡桂学 丁铲 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第3期53-60,共8页
维甲酸诱导基因-I(retinoic acid inducible gene-I,RIG-I)是最近几年发现的一种细胞内模式识别受体,能够特异性的识别并结合病毒RNA,进而发挥抗病毒效应。RIG-I在进化中相对保守,但已有报道和我们的前期研究显示:家禽中鸭和鹅体内均有R... 维甲酸诱导基因-I(retinoic acid inducible gene-I,RIG-I)是最近几年发现的一种细胞内模式识别受体,能够特异性的识别并结合病毒RNA,进而发挥抗病毒效应。RIG-I在进化中相对保守,但已有报道和我们的前期研究显示:家禽中鸭和鹅体内均有RIG-I受体,但鸡却缺乏RIG-I受体。为了研究这种天然缺失对鸡是否有不利影响,本研究利用PiggyBac转座系统将鹅源RIG-I转染入鸡胚成纤维细胞系DF-1,两次亚克隆后获得单个克隆,以荧光、RT-PCR及Western blot进行鉴定,最终获得稳定表达鹅RIG-I的DF-1细胞系,为进一步研究鸡的先天性免疫机制和鹅RIG-I的功能打下基础。 展开更多
关键词 鹅维甲酸诱导基因-I 纤维细胞系DF-1 PiggyBac转座系统
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黑豆皮花色苷抗禽白血病病毒A亚群活性的研究 被引量:2
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作者 雷用东 王丹 +4 位作者 童军茂 张莉 马越 张超 赵晓燕 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期344-349,共6页
为探寻黑豆皮花色苷(anthocyanins from black soybean seed coat,ABSC)抗禽白血病病毒A亚群(subgroup A avian leukosis virus,ALV-A)的活性效果。本文以ABSC粉为原料,采用高效液相色谱仪与质谱仪联机(HPLC-MS)的方法鉴定了其花色苷主... 为探寻黑豆皮花色苷(anthocyanins from black soybean seed coat,ABSC)抗禽白血病病毒A亚群(subgroup A avian leukosis virus,ALV-A)的活性效果。本文以ABSC粉为原料,采用高效液相色谱仪与质谱仪联机(HPLC-MS)的方法鉴定了其花色苷主要活性成分,随后采用体外实验,应用MTT法和观察细胞形态法检测了ABSC对鸡成纤维细胞系(DF-1)的细胞毒性,建立细胞模型,研究加入ABSC后对ALV-A的预防和治疗作用。结果表明:黑豆皮花色苷粉中含四种花色苷成分,其中主要为矢车菊色素-3-葡萄糖苷;ABSC对DF-1无细胞毒性的最大相对安全质量浓度为20μg/mL;ABSC在安全浓度范围内能抑制ALV-A的增殖,且抑制程度成剂量关系。结论,ABSC质量浓度为12μg/mL能够显著抑制ALV-A诱导的DF-1细胞形态变化,降低凋亡。 展开更多
关键词 黑豆皮花色苷 鸡成纤维细胞系 禽白血病病毒A亚群 生物活性
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黑加仑花色苷抗禽白血病A亚群病毒作用
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作者 雷用东 王丹 +4 位作者 童军茂 张莉 马越 张超 赵晓燕 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期821-827,共7页
研究了黑加仑花色苷(Anthocyanin from Blackcurrant,ACB)对禽白血病A亚群病毒(Avian leukosis virus subgroup A,ALV-A)的抑制作用。作者以ACB粉为原料,采用高效液相色谱仪与质谱仪联机(HPLC-MS)的方法鉴定了其主要活性成分,随后采用... 研究了黑加仑花色苷(Anthocyanin from Blackcurrant,ACB)对禽白血病A亚群病毒(Avian leukosis virus subgroup A,ALV-A)的抑制作用。作者以ACB粉为原料,采用高效液相色谱仪与质谱仪联机(HPLC-MS)的方法鉴定了其主要活性成分,随后采用体外实验,应用MTT法和观察细胞形态法检测了ACB对鸡成纤维细胞系(DF1)的细胞毒性的影响,建立细胞模型,研究加入ACB后对ALV-A的预防和治疗作用。结果表明:ACB主要含飞燕草色素-3-鼠李糖苷-5-葡萄糖苷和矢车菊色素-3-鼠李糖苷-5-葡萄糖苷两种组分;ACB对DF1无细胞毒性的质量浓度为10μg/mL;基于ACB的预防和治疗实验,ACB可明显抑制ALV-A的增殖,具有良好的剂量-效应关系,因此ACB具有一定的体外抗ALV-A作用。 展开更多
关键词 黑加仑花色苷 鸡成纤维细胞系 禽白血病病毒A亚群 MTT法
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