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鸡催乳素受体胞外域的分子克隆及原核表达
被引量：
2
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作者
刘颖
黎敏义
+2 位作者
刘志
李孝伟
施振旦
《华南农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第4期73-77,共5页
根据家鸡催乳素受体基因胞外域序列（GenBank号：D13154）设计并合成1对覆盖编码区58～1249位核苷酸的引物，以家鸡垂体总RNA为模板，经反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法获得了特异性片断，将该片断克隆入pMD18-T载体并转化感受态细菌...
根据家鸡催乳素受体基因胞外域序列（GenBank号：D13154）设计并合成1对覆盖编码区58～1249位核苷酸的引物，以家鸡垂体总RNA为模板，经反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法获得了特异性片断，将该片断克隆入pMD18-T载体并转化感受态细菌Ecoli DH5α永久保存．通过设计第2对引物扩增PRLR胞外域cDNA片段，该片段经酶切后克隆到表达载体pRSETA的EcoRⅠ和HindⅢ两酶切位点之间，构建重组质粒pR-PRLR．该质粒在转化感受态细菌E．coli B121（DF．3）后，在IPTG诱导下促使重组菌表达了相对分子质量为53640左右的重组融合蛋白，表达量在0．1mmol／L IPTG诱导5h时达到最高，约占总菌体蛋白的17．6％左右．表达产物可经体积分数为50％的Ni-NTA凝胶纯化，说明重组蛋白中具有正确的His-tag标签及之后的鸡催乳素受体编码区胞外域序列．
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关键词
鸡催乳素受体基因
胞外域
克隆
表达
纯化
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职称材料
题名
鸡催乳素受体胞外域的分子克隆及原核表达
被引量：
2
1
作者
刘颖
黎敏义
刘志
李孝伟
施振旦
机构
华南农业大学动物科学学院
出处
《华南农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第4期73-77,共5页
基金
广东省自然科学基金团队项目(04205804)
教育部博士点基金(20050564001)
文摘
根据家鸡催乳素受体基因胞外域序列（GenBank号：D13154）设计并合成1对覆盖编码区58～1249位核苷酸的引物，以家鸡垂体总RNA为模板，经反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法获得了特异性片断，将该片断克隆入pMD18-T载体并转化感受态细菌Ecoli DH5α永久保存．通过设计第2对引物扩增PRLR胞外域cDNA片段，该片段经酶切后克隆到表达载体pRSETA的EcoRⅠ和HindⅢ两酶切位点之间，构建重组质粒pR-PRLR．该质粒在转化感受态细菌E．coli B121（DF．3）后，在IPTG诱导下促使重组菌表达了相对分子质量为53640左右的重组融合蛋白，表达量在0．1mmol／L IPTG诱导5h时达到最高，约占总菌体蛋白的17．6％左右．表达产物可经体积分数为50％的Ni-NTA凝胶纯化，说明重组蛋白中具有正确的His-tag标签及之后的鸡催乳素受体编码区胞外域序列．
关键词
鸡催乳素受体基因
胞外域
克隆
表达
纯化
Keywords
chicken prolactin receptor gene
extracellular domain
cloning
expression
purification
分类号
S831 [农业科学—畜牧学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鸡催乳素受体胞外域的分子克隆及原核表达
刘颖
黎敏义
刘志
李孝伟
施振旦
《华南农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
2
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