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鲤鱼生长激素在毕赤酵母中的表达 被引量:29
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作者 李英华 白俊杰 +4 位作者 李新辉 叶星 简清 罗建仁 梁旭方 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期488-491,共4页
将编码鲤鱼 (Cyprinuscarpio )生长激素 (GH)成熟肽的cDNA克隆到毕赤酵母 (P .pastoris)胞内表达载体pHIL D2中 ,构建重组表达质粒pHIL D2 GH .转化组氨酸缺陷型酵母GS115,获得表达鲤鱼GH的酵母工程菌 .经甲醇诱导 ,SDS PAGE和Western... 将编码鲤鱼 (Cyprinuscarpio )生长激素 (GH)成熟肽的cDNA克隆到毕赤酵母 (P .pastoris)胞内表达载体pHIL D2中 ,构建重组表达质粒pHIL D2 GH .转化组氨酸缺陷型酵母GS115,获得表达鲤鱼GH的酵母工程菌 .经甲醇诱导 ,SDS PAGE和Western印迹检测表明 ,鲤鱼GH在酵母中得到表达 ,表达产物在胞内以可溶状态存在 ,具有鲤鱼GH的免疫活性 .用诱导后的酵母投喂罗非鱼 。 展开更多
关键词 鲤鱼生长激素 毕赤酵母 胞内表达 生长作用
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重组鲤鱼生长激素的试验制备与纯化 被引量:1
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作者 简清 白俊杰 +3 位作者 李英华 叶星 罗建仁 劳海华 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期55-58,共4页
采用高效表达鲤鱼生长激素的大肠杆菌基因工程菌株E .coli(pBVcGH8)进行发酵培养 ,经温度诱导可产生一分子量约为 3.6 3× 10 -2 0 g的特异表达产物 ,该表达产物主要以包涵体的形式存在 ,表达量占菌体总蛋白的 2 9.2 %。表达产物经... 采用高效表达鲤鱼生长激素的大肠杆菌基因工程菌株E .coli(pBVcGH8)进行发酵培养 ,经温度诱导可产生一分子量约为 3.6 3× 10 -2 0 g的特异表达产物 ,该表达产物主要以包涵体的形式存在 ,表达量占菌体总蛋白的 2 9.2 %。表达产物经包涵体收集、洗涤等初步纯化后 ,纯度可达 85 .0 %。再经变性与复性后 ,用阴离子交换层析进一步分离纯化 ,最终可获得纯度为 96 .0 %的重组鲤鱼生长激素。用该纯化过的重组鲤鱼生长激素注射罗非鱼 。 展开更多
关键词 鲤鱼生长激素 生长作用 基因变组 制备 纯化
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鲤鱼生长激素和对虾白斑病毒囊膜蛋白VP28的融合表达及功能研究 被引量:5
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作者 韩建山 龙燕 +3 位作者 孟小林 徐进平 鲁伟 王健 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期308-313,共6页
鲤鱼生长激素GH是鲤鱼生长腺体分泌并促进鲤鱼生长的一种分泌蛋白。对虾白斑综合病毒(WSSV)VP28蛋白为囊膜蛋白,是病毒感染宿主的必需因子。根据gh和vp28的上下游序列,分别设计合成两对引物,PCR扩增gh和vp28基因,将基因gh和vp28按先后... 鲤鱼生长激素GH是鲤鱼生长腺体分泌并促进鲤鱼生长的一种分泌蛋白。对虾白斑综合病毒(WSSV)VP28蛋白为囊膜蛋白,是病毒感染宿主的必需因子。根据gh和vp28的上下游序列,分别设计合成两对引物,PCR扩增gh和vp28基因,将基因gh和vp28按先后次序融合后插入穿梭质粒pPIC6αC多克隆位点,构建成重组分泌表达穿梭质粒pPIC6αC-(gh+vp28),用Bstx1单酶切穿梭质粒pPIC6αC-(gh+vp28)线形化,转化毕赤酵母X-33。重组菌株30℃甲醇诱导,实现在酵母中的融合分泌表达,获得融合蛋白。表达产物经SDS-PAGE检测和Western Blot印迹鉴定,显示与预期大小66kD相吻合的融合蛋白带。用Ni2+-柱纯化后的基因工程蛋白注射鳌虾进行蛋白生物功能测试,结果表明该蛋白获得了促鳌虾生长和抗WSSV感染的双重功效。 展开更多
关键词 鲤鱼生长激素(GH) 对虾白斑综合病毒(WSSV)VP28 gh+vp28 毕赤酵母 生长 抗病毒
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银鲫和建鲤血液外源生长激素代谢动力学 被引量:2
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作者 肖东 陈松林 +2 位作者 严安生 陈细华 邓文涛 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1998年第S1期85-89,共5页
采用草鱼生长激素夹心式酶联免疫吸附测定法(ELISA),研究了重组鲤鱼生长激素(rcGH)在银鲫和建鲤血液中的代谢规律.银鲫每g体质量腹腔注射rcGH1μg后,血清GH水平迅速升高,2h时达峰值,8d后血清GH水平仍... 采用草鱼生长激素夹心式酶联免疫吸附测定法(ELISA),研究了重组鲤鱼生长激素(rcGH)在银鲫和建鲤血液中的代谢规律.银鲫每g体质量腹腔注射rcGH1μg后,血清GH水平迅速升高,2h时达峰值,8d后血清GH水平仍未恢复正常值.而每g体质量腹腔注射rcGH0.2μg后,银鲫血清GH却较为缓慢升高,6h后才达峰值,8d后血清GH水平已恢复正常值.银鲫每g体质量腹腔注射rcGH0.2,1,5μg后,仅0.2μg组在2d后血清GH水平恢复正常值,其余两剂量组在8d后仍未恢复正常值.建鲤每g体质量腹腔注射rcGH0.5,1,5μg后,血清GH水平分别在第3,5。 展开更多
关键词 银鲫 建鲤 重组鲤鱼生长激素(rcGH) 代谢动力学
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动物遗传工程
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作者 孙国凤 《生物技术通报》 CAS CSCD 1996年第3期93-93,共1页
961148 鲤鱼生长激素基因的改造及其在大肠杆菌中的表达[中]/赵晓祥…//生物技术.-1995,5(5).-11~15 用聚合酶链式反应(PCR)改造了鲤鱼生长激素基因,扩增出编码鲤鱼生长激素成熟肽的序列,并将此序列克隆到pBluescriptⅡKS质粒中,序列... 961148 鲤鱼生长激素基因的改造及其在大肠杆菌中的表达[中]/赵晓祥…//生物技术.-1995,5(5).-11~15 用聚合酶链式反应(PCR)改造了鲤鱼生长激素基因,扩增出编码鲤鱼生长激素成熟肽的序列,并将此序列克隆到pBluescriptⅡKS质粒中,序列分析后, 展开更多
关键词 鲤鱼生长激素基因 聚合酶链式反应 受精卵 序列分析 肠杆菌 遗传工程 生物技术 注射操作 卵裂率 体外培养
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