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免疫磁珠富集水中鲤春病毒血症病毒的初步研究
1
作者 景宏丽 孔玉方 +7 位作者 斯烈钢 王建平 葛明峰 徐胜威 黄呈炜 高隆英 张旻 吴绍强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期641-644,共4页
为建立一种富集水中鲤春病毒血症病毒(SVCV)的技术,本研究利用SVCV多克隆抗体制备免疫磁珠,通过对磁珠耦联抗体量的优化,确定该免疫磁珠有效富集SVCV的最低浓度,建立一种富集SVCV的免疫磁珠分离技术,并联合荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)技术... 为建立一种富集水中鲤春病毒血症病毒(SVCV)的技术,本研究利用SVCV多克隆抗体制备免疫磁珠,通过对磁珠耦联抗体量的优化,确定该免疫磁珠有效富集SVCV的最低浓度,建立一种富集SVCV的免疫磁珠分离技术,并联合荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)技术对水中SVCV进行检测。结果显示,1 mg磁珠与75μg SVCV多克隆抗体耦联时,耦联的抗体量最大,耦联率为98.48%;耦联后的免疫磁珠对SVCV(200μL,浓度为1.54×10^(6)拷贝/μL)的富集效率最高为91.56%。以该多克隆抗体量制备的免疫磁珠富集10倍倍比稀释的SVCV(3.54×10^(6)拷贝/μL~3.54×10^(3)拷贝/μL),以确定其有效富集SVCV的最低浓度。结果显示,1 mg免疫磁珠能够使200μL病毒液(3.54×10^(3)拷贝/μL)富集率达到61.58%。表明该免疫磁珠能够有效富集SVCV。在免疫磁珠分离技术联合RT-qPCR技术检测水样品中SVCV(浓度约为1.16×10^(4)拷贝/μL)的结果显示,免疫磁珠组富集SVCV核酸量是裸磁珠组富集SVCV核酸量的1.77×10^(3)倍,是未处理组富集SVCV核酸量的1.68×10^(3)倍,免疫磁珠组富集SVCV均极显著高于裸磁珠组和未处理组(P<0.01),裸磁珠组富集的SVCV与未处理组则无显著差异(P>0.05)。本研究首次建立了一种能够有效富集水中SVCV的方法,为SVCV的监测提供了技术手段。 展开更多
关键词 免疫磁珠 鲤春病毒血症病毒 水样品
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一株鲤春病毒血症病毒SVCV-shlj4全基因组序列分析 被引量：2
2
作者 林婧楠 徐黎明 +2 位作者 赵景壮 任广明 卢彤岩 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期707-713,共7页
为了分析中国北方地区现行的一株鲤春病毒血症病毒(Spring Virernia of Carp Virus,SVCV)SVCV-shlj4全基因组序列,根据GenBank收录的SVCV参考毒株(SVCV-A2,DQ491000.1)基因序列设计了3对重叠引物,对SVCV-shlj4毒株基因组编码区进行扩增... 为了分析中国北方地区现行的一株鲤春病毒血症病毒(Spring Virernia of Carp Virus,SVCV)SVCV-shlj4全基因组序列,根据GenBank收录的SVCV参考毒株(SVCV-A2,DQ491000.1)基因序列设计了3对重叠引物,对SVCV-shlj4毒株基因组编码区进行扩增,利用RACE试剂盒对该基因组5′和3′非编码区(Untranslated region,UTR)进行扩增,并利用DNAstar软件对测得的序列进行拼接,获得完整的SVCV-shlj4全基因组,结合Lasergene及MEGA 5.1生物信息学软件对该病毒基因组及其编码的核蛋白、糖蛋白和磷蛋白基因序列进行系统进化分析。结果表明:SVCV-shlj4毒株基因组全长为11029 bp,共编码5种结构蛋白(3′端-5′端),分别为核蛋白(Nuclear protein,N)、磷蛋白(Phosphoprotein,P)、基质蛋白(Matrix protein,M)、糖蛋白(Glycoprotein,G)和RNA聚合酶(RNA polymerase,L);基因组序列系统进化分析显示,SVCV-shlj4毒株与中国株SVCV-A2的核苷酸序列一致性最高(99.0%),与欧洲株VR-1390核苷酸序列一致性最低(93.0%);编码M蛋白、G蛋白和P蛋白的基因序列进化分析结果显示,SVCV-shlj4毒株在进化上处于亚洲分支,属于Ⅰa基因型,Ⅰaii基因亚型;SVCV-shlj4毒株各基因变异位点分析显示,与中国株SVCV-A1相比,SVCV-shlj4毒株在N基因编码区第1357、1364和1376 nt位点分别缺失1个碱基,在G基因3′端非编码区4630 nt位点和4639 nt位点分别缺失两段基因序列(44 bp和31 bp),与欧洲株VR-1390相比,SVCV-shlj4毒株在G基因3′端非编码区(4637 nt位点)插入10 bp的基因片段,与中国株BJ0505-2相比,SVCV-shlj4毒株在L基因编码区(5822 nt位点)缺失18 bp碱基。本研究系统地分析了中国北方地区现行SVCV分离株的分子特征,为SVCV分子进化研究提供了数据支撑。 展开更多
关键词 弹状病毒 鲤春病毒血症病毒 基因组 基因型
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鲤春病毒(SVCV)糖蛋白基因的原核表达 被引量：1
3
作者 吕慧娇 康路路 +5 位作者 张萌 闫娜娜 张经纬 高文昌 徐坤 张智英 《家畜生态学报》 北大核心 2018年第9期12-17,共6页
通过将鲤春病毒血症病毒(Spring Viremia of Carp Virus,SVCV)糖蛋白(Glycoprotein,G)基因截短后构建重组表达载体,实现体外高效表达G蛋白,为有关原核诱导蛋白提供参考。以质粒pEGFP-G为模板设计引物,分别扩增G基因的不同片段,与密码子... 通过将鲤春病毒血症病毒(Spring Viremia of Carp Virus,SVCV)糖蛋白(Glycoprotein,G)基因截短后构建重组表达载体,实现体外高效表达G蛋白,为有关原核诱导蛋白提供参考。以质粒pEGFP-G为模板设计引物,分别扩增G基因的不同片段,与密码子优化后的G基因分别插入pET-32a表达载体,构建重组表达载体pET-32a-GX和pET-32a-OG。经过鉴定后,将重组质粒分别转入大肠杆菌BL21(DE3),通过适宜条件的诱导表达,获得诱导产物并进行SDS-PAGE和Western blotting检测。构建了重组表达载体pET-32a-GX与含密码子优化后G基因的重组表达载体pET-32a-OG;经适宜条件诱导表达了G蛋白后的SDS-PAGE和Western Blotting检测,表明G蛋白成功表达,且含截短片段的重组载体pET-32a-G2的蛋白表达量最高,与原G序列有相同的免疫原性。成功构建截短后的原核表达载体pET-32aGX与密码子优化后的重组表达载体pET-32a-GX,并实现体外大量诱导SVCV的G蛋白。 展开更多
关键词 鲤春病毒血症病毒 原核表达 截短表答
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重组酶聚合酶扩增技术快速检测鲤春病毒血症病毒(SVCV)方法的建立 被引量：12
4
作者 梁君妮 尹伟力 +3 位作者 谢爽 刘宁 段效辉 林森 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1037-1040,共4页
为建立鲤春病毒血症病毒(SVCV)的快速检测方法,本研究根据SVCV的G基因保守序列设计特异性引物,通过条件优化初步建立了基于重组酶聚合酶扩增技术(RPA)的SVCV检测方法。该RPA方法最优扩增温度为30℃,恒温反应20 min内即可完成。特异性试... 为建立鲤春病毒血症病毒(SVCV)的快速检测方法,本研究根据SVCV的G基因保守序列设计特异性引物,通过条件优化初步建立了基于重组酶聚合酶扩增技术(RPA)的SVCV检测方法。该RPA方法最优扩增温度为30℃,恒温反应20 min内即可完成。特异性试验结果显示,该方法与其它常见鱼类感染病毒无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法对SVCV质粒标准品的最低检出限为89.2拷贝/μL,高于传统的RT-PCR方法;利用已建立的RPA方法和RT-PCR方法对市场购买的80份临床样品进行检测,结果显示,RPA方法与RT-PCR方法检测结果一致,且RPA方法能够有效检出RT-PCR方法的弱阳性样品,表明RPA方法可以用于临床检测。本研究建立的检测SVCV的RPA方法具有快速、简便、特异性强、灵敏度高的特点,适合基层实验室及现地检测。 展开更多
关键词 重组酶聚合酶扩增技术 快速检测 鲤春病毒血症病毒
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鲤春病毒血症病毒(SVCV)人工感染锦鲤攻毒试验
5
作者 花麒 欧阳敏 +2 位作者 田飞焱 刘文珍 徐节华 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第9期86-89,I0007,共5页
为了研究鲤科鱼类感染鲤春病毒血症病毒(Spring viremia of carp virus,SVCV)后的病理变化,试验通过使用本中心实验室采集和保藏的鲤春病毒血症病毒株(JX14-012)对养殖的锦鲤(Cyprinus carpio koi)进行人工感染试验,然后对对照组和试验... 为了研究鲤科鱼类感染鲤春病毒血症病毒(Spring viremia of carp virus,SVCV)后的病理变化,试验通过使用本中心实验室采集和保藏的鲤春病毒血症病毒株(JX14-012)对养殖的锦鲤(Cyprinus carpio koi)进行人工感染试验,然后对对照组和试验组锦鲤进行鲤春病毒血症病毒检测,结果显示,试验组呈阳性,即已感染鲤春病毒血症病毒,对照组呈阴性;对试验组进行生化指标检测发现肝胰脏、肾脏受到严重损害导致功能不全;组织病理切片观察结果发现,脑、鳃、肝胰脏、脾脏、肾脏、肌肉各组织均出现不同程度的变性坏死。表明JX14-012病毒株对锦鲤进行攻毒能够使试验组锦鲤致病,该毒株感染锦鲤后可在其体内复制、增殖,且对锦鲤有一定的致病力。其表现出来的症状对进一步掌握鲤春病毒血症病毒病,及时诊断其危害具有重大的现实意义。 展开更多
关键词 人工感染 鲤春病毒血症病毒病 锦鲤
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鲤春病毒血症病毒糖蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备 被引量：8
6
作者 张家林 李强 +1 位作者 叶仕根 李华 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期454-458,共5页
利用原核表达系统表达纯化鲤春病毒血症病毒(SVCV)G蛋白,制备特异性单克隆抗体,扩增出鲤春病毒0504分离株G基因片段,并将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,经诱导表达、裂解离心包涵体,包涵体经His Bind亲和层析柱纯化及尿素浓度梯度... 利用原核表达系统表达纯化鲤春病毒血症病毒(SVCV)G蛋白,制备特异性单克隆抗体,扩增出鲤春病毒0504分离株G基因片段,并将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,经诱导表达、裂解离心包涵体,包涵体经His Bind亲和层析柱纯化及尿素浓度梯度复性后,作为抗原免疫Balb/c小鼠,制备单克隆抗体。结果表明:成功筛选出2株稳定分泌G蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为1C5、2D5,经Western-Blot检测表明,制备的单克隆抗体具有良好的特异性。本研究中成功制备的抗G蛋白单克隆抗体,可为建立新型鲤春病毒检测方法提供工具。 展开更多
关键词 鲤春病毒血症病毒(svcv) G蛋白 原核表达 单克隆抗体
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用RT-PCR法快速检测鲤春病毒血症病毒基因 被引量：30
7
作者 高隆英 史秀杰 +1 位作者 刘荭 江育林 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期452-456,共5页
用逆转录多聚酶链式反应 (RT PCR)方法快速、灵敏、特异地检测鲤春病毒血症病毒(SVCV) ,根据SVC病毒糖蛋白基因序列设计的引物经过RT PCR和半嵌套PCR(semi nested PCR)可扩增出SVC病毒核酸中的 71 4bp和 60 6bp片段。与其他弹状病毒IHNV... 用逆转录多聚酶链式反应 (RT PCR)方法快速、灵敏、特异地检测鲤春病毒血症病毒(SVCV) ,根据SVC病毒糖蛋白基因序列设计的引物经过RT PCR和半嵌套PCR(semi nested PCR)可扩增出SVC病毒核酸中的 71 4bp和 60 6bp片段。与其他弹状病毒IHNV、VHSV、PFRV没有交叉 ,具有特异性。灵敏度检测 ,表明不小于 1 0 0 0个病毒就可检测出阳性结果。本文还对复性温度 ,引物 ,Mg2 +,Tag酶以及反转录酶的浓度对检测结果的影响进行了探讨。 展开更多
关键词 RT-PCR法 快速检测 鲤春病毒血症 病毒基因 鱼病
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鲤春病毒血症病毒SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法的建立 被引量：7
8
作者 安伟 肖雨 +2 位作者 张明辉 高晓华 何正侃 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期699-702,共4页
为建立鲤春病毒血症病毒(SVCV)的荧光定量RT-PCR检测方法,本研究根据Gen Bank中登录的SVCV N蛋白基因的保守性序列设计并合成特异性引物,建立了该病毒的SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测方法。结果表明,以重组质粒标准品构建的标准曲线... 为建立鲤春病毒血症病毒(SVCV)的荧光定量RT-PCR检测方法,本研究根据Gen Bank中登录的SVCV N蛋白基因的保守性序列设计并合成特异性引物,建立了该病毒的SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测方法。结果表明,以重组质粒标准品构建的标准曲线的相关系数为0.99,在102拷贝/μL^109拷贝/μL范围内具有良好的线性关系。该方法对传染性脾肾坏死病毒、草鱼呼肠孤病毒、传染性皮下及组织坏死病毒和白斑综合征病毒其他水生动物病毒核酸扩增结果均为阴性,特异性强;该方法对SVCV检测下限为100.76 TCID50/m L,比常规PCR灵敏100倍;批内和批间的变异系数均小于7.6%,重复性好。本研究建立的荧光定量RT-PCR方法灵敏度高、特异性强、重复性好,对SVCV的快速检测及定量检测具有重要意义。 展开更多
关键词 鲤春病毒血症病毒 SYBR Green I 荧光定量RT-PCR N基因
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鲤春病毒血症病毒糖蛋白基因的克隆及其在毕赤酵母中的初步表达 被引量：13
9
作者 付峰 刘荭 +2 位作者 范万红 江育林 黄倢 《海洋水产研究》 CSCD 北大核心 2007年第4期72-76,共5页
根据SVCV糖蛋白基因序列设计引物,在5’引物和3’引物中分别引入酶切位点。以病毒核酸为模板用RT-PCR方法扩增该段糖蛋白基因,将所得的基因片段(517和521)克隆至穿梭载体pGAPZαA/B之GAP启动子下游位点,构建含α信号肽的重组表达载体。... 根据SVCV糖蛋白基因序列设计引物,在5’引物和3’引物中分别引入酶切位点。以病毒核酸为模板用RT-PCR方法扩增该段糖蛋白基因,将所得的基因片段(517和521)克隆至穿梭载体pGAPZαA/B之GAP启动子下游位点,构建含α信号肽的重组表达载体。获得的重组质粒pGAPZαA-517和pGAPZαB-521经线性化后,电击法转化毕赤酵母SMD1168菌株,构建分泌型表达SVCV糖蛋白的重组酵母菌株。酵母菌落PCR法检测表明,已成功构建分泌表达SVCV糖蛋白的酵母基因工程菌株,斑点印迹法进一步分析表明有目的蛋白的成功表达。 展开更多
关键词 鲤春病毒血症病毒 糖蛋白 克隆 毕赤酵母 分泌表达
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鲤春病毒血症病毒Shlj1株糖蛋白空间结构及其B细胞抗原表位的预测 被引量：6
10
作者 纪锋 徐黎明 +4 位作者 赵景壮 刘淼 卢彤岩 贺文斌 尹家胜 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期440-446,共7页
为预测鲤春病毒血症病毒(Spring Viremia of Carp Virus,SVCV)Shlj1株糖蛋白(Glycoprotein,G)的空间结构及B细胞抗原表位,采用RT-PCR法从接种SVCV的鲤上皮细胞悬液提取的病毒总RNA中扩增糖蛋白基因,并通过序列测定获得Shlj1株糖蛋白基... 为预测鲤春病毒血症病毒(Spring Viremia of Carp Virus,SVCV)Shlj1株糖蛋白(Glycoprotein,G)的空间结构及B细胞抗原表位,采用RT-PCR法从接种SVCV的鲤上皮细胞悬液提取的病毒总RNA中扩增糖蛋白基因,并通过序列测定获得Shlj1株糖蛋白基因的核苷酸序列及氨基酸序列,利用Phyre2对Shlj1分离株的糖蛋白空间结构进行预测,使用DNAStar软件综合分析糖蛋白的柔性区域、亲水性、表面可能性和抗原指数参数。结果表明:获得的SVCV Shlj1株糖蛋白核苷酸序列长1527 bp,推导出其氨基酸序列为509aa;空间结构预测显示,SVCV Shlj1株糖蛋白存在一定数量的α-螺旋、β-折叠、β-转角及大量无规则卷曲结构,空间构象较规则;抗原指数及抗原表位指数分析显示,糖蛋白中存在许多抗原指数较高的区域,该区域平均抗原指数为1.025,最大值达1.250,其中5个区域(4~26、145~157、293~302、315~327、407~491氨基酸区段)可能是B细胞抗原表位的主要分布区域。本研究结果为SVCV糖蛋白表位疫苗的设计及单克隆抗体的制备奠定了理论基础。 展开更多
关键词 鲤春病毒血症病毒 糖蛋白 空间结构 B细胞抗原表位
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鲤春病毒血症病毒单克隆抗体制备及鉴定 被引量：4
11
作者 李月红 葛晨霞 +2 位作者 王龙涛 张培军 张林波 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期242-244,共3页
为制备鲤春病毒血症病毒(SVCV)单克隆抗体(MAb),本研究用纯化的SVCV免疫BALB/c鼠,通过杂交瘤细胞技术,制备2株抗SVCV的MAb,分别命名为2A3和3H7。经间接ELISA检测腹水效价为1:10240和1:12150。亚类鉴定证实,这2株亚类均为IgG1型。经非竞... 为制备鲤春病毒血症病毒(SVCV)单克隆抗体(MAb),本研究用纯化的SVCV免疫BALB/c鼠,通过杂交瘤细胞技术,制备2株抗SVCV的MAb,分别命名为2A3和3H7。经间接ELISA检测腹水效价为1:10240和1:12150。亚类鉴定证实,这2株亚类均为IgG1型。经非竞争酶免疫试验测定2A3和3H7的抗体亲和力常数分别为4.86×108L/mol和1.86×109L/mol,3H7相对亲和力高于2A3。MAb 2A3和3H7的饱和度均为1:400,叠加试验所得增值指数为63.2%,大于50%。抗体反应增值结果表明:两株MAb分别针对不同抗原位点。免疫印迹分析检测表明,两株纯化的MAb均可与SVCV抗原发生特异反应。 展开更多
关键词 鲤春病毒血症病毒 单克隆抗体 制备 鉴定
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一株鲤春病毒血症病毒的初步分离及鉴定 被引量：2
12
作者 安伟 肖雨 +2 位作者 张崇文 张明辉 何正侃 《水产科技情报》 北大核心 2014年第1期32-34,38,共4页
为了检测上海市某鲤鱼养殖场的疑似患病鲤鱼是否携带鲤春病毒血症病毒(SVCV),采用鲤鱼表皮瘤细胞系(EPC)进行病毒分离和分子PCR方法对SVCV的糖蛋白基因保守区域进行扩增。试验结果:被病毒感染的EPC细胞呈现细胞圆缩、颗粒增多、大量脱... 为了检测上海市某鲤鱼养殖场的疑似患病鲤鱼是否携带鲤春病毒血症病毒(SVCV),采用鲤鱼表皮瘤细胞系(EPC)进行病毒分离和分子PCR方法对SVCV的糖蛋白基因保守区域进行扩增。试验结果:被病毒感染的EPC细胞呈现细胞圆缩、颗粒增多、大量脱落等病变特征,且该株病毒毒力较强,其病毒滴度TCID50/0.1 mL为105.76。分子方法扩增出714 bp和606 bp的SVCV的保守片段。试验采用细胞培养技术和分子PCR方法检测样品是否携带病毒性病原,建立了一种较为简捷高效的检测方法。该方法适合在短时间内完成大量样品的病原学诊断及检疫任务,具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 鲤春病毒血症病毒(svcv) 细胞分离 PCR检测 鲤
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鲤春病毒血症病毒糖蛋白的高效表达和纯化 被引量：7
13
作者 兰文升 刘荭 +4 位作者 高隆英 史秀杰 郑晓聪 何俊强 卢体康 《中国动物传染病学报》 CAS 2010年第2期18-22,共5页
本研究从鲤春病毒血症病毒（Spring viremia of carp virus，SVCV）SVCV-741毒株克隆鲤春病毒血症病毒糖蛋白基因（sue—g），将svc-g亚克隆到原核表达载体pET-28a，转化大肠杆菌E．coli BL-21（DE3）后，用IPTG诱导培养，获得菌体总蛋... 本研究从鲤春病毒血症病毒（Spring viremia of carp virus，SVCV）SVCV-741毒株克隆鲤春病毒血症病毒糖蛋白基因（sue—g），将svc-g亚克隆到原核表达载体pET-28a，转化大肠杆菌E．coli BL-21（DE3）后，用IPTG诱导培养，获得菌体总蛋白。用SVCV毒株免疫山羊所得到的抗血清作为一抗进行免疫印迹实验，结果在硝酸纤维素滤膜上检测到50～71 kDa之间的特异性免疫条带，与SVCV糖蛋白预测分子量一致，研究证明了工程茵表达获得的重组蛋白具有与SVCV毒株相同的免疫原性，也证明了该蛋白的糖基化对其免疫表位是非必需的。本研究进一步通过发酵基因工程菌和蛋白质纯化过程，获得大量的鲤春病毒血症病毒糖蛋白，为后期免疫动物获得抗血清储备了原料，也为SVCV的免疫学检测方法的建立奠定了物质基础。 展开更多
关键词 糖蛋白 表达 鲤春病毒血症病毒
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鲤春病毒血症病毒单克隆抗体的制备及其特性鉴定 被引量：4
14
作者 张朋 刘荭 +10 位作者 陈孝煊 吴志新 余剑敏 杜娟 兰文升 史秀杰 郑晓聪 何俊强 贾鹏 申斯思 朱家增 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期305-308,共4页
为获得针对鲤春病毒血症病毒(SVCV)特异性的单克隆抗体(MAb),以纯化的SVCV为抗原,免疫BALB/c小鼠。将免疫鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用间接ELISA法筛选获得4个能稳定分泌抗SVCV MAb的杂交瘤细胞株;4个杂交瘤细胞制备腹水的MAb... 为获得针对鲤春病毒血症病毒(SVCV)特异性的单克隆抗体(MAb),以纯化的SVCV为抗原,免疫BALB/c小鼠。将免疫鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用间接ELISA法筛选获得4个能稳定分泌抗SVCV MAb的杂交瘤细胞株;4个杂交瘤细胞制备腹水的MAb效价为1∶160000～1∶640000。亚型鉴定结果表明,这些MAb分属2个亚型(1F1、3E1,IgG2a;3F5、4F9,IgG1),轻链均为Κ链。Western blot分析显示,MAb1F1、3F5、4F9能特异性地识别SVCV的N蛋白(47ku),3E1能特异性地识别SVCV的G蛋白(69ku)。采用相加ELISA法对抗原表位分析结果显示,1F1、3F5、4F9可能识别相同的表位,3E1则识别不同的表位。间接免疫荧光试验结果显示4株MAb均能对染毒病灶产生特异性的荧光染色。这些MAb的制备为SVCV免疫学检测方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 鲤春病毒血症病毒 单克隆抗体 N蛋白
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数字RT-PCR检测鲤春病毒血症的方法建立与应用 被引量：12
15
作者 吴斌 申翠翠 +3 位作者 张晨曦 胡德聪 肇慧君 张琳 《中国动物检疫》 CAS 2015年第7期72-76,共5页
[目的]通过实时定量RT-PCR和数字RT-PCR两种方法的比对试验,建立快速检测鲤春病毒血症的数字RT-PCR方法。[方法]利用同一对引物和探针,以梯度稀释的方法测定两种方法针对SVCV的灵敏性、特异性及重现性。[结果]两种方法均能够检测出104... [目的]通过实时定量RT-PCR和数字RT-PCR两种方法的比对试验,建立快速检测鲤春病毒血症的数字RT-PCR方法。[方法]利用同一对引物和探针,以梯度稀释的方法测定两种方法针对SVCV的灵敏性、特异性及重现性。[结果]两种方法均能够检测出104倍稀释的SVCV,而数字RT-PCR可以检测出单个微滴中的SVCV,其灵敏度性高于实时定量RT-PCR。同时,两种方法的特异性都很强,对其他病毒,如传染性胰腺坏死病毒(IPNV)、传染性造血器官坏死病毒(IHNV)、病毒性出血败血病毒(VHSV)均未有扩增反应。两种方法的重现性也较好。[结论]数字RT-PCR方法比实时定量RT-PCR具有更高的灵敏度,在鲤春病毒血症的早期快速诊断方面具有重要作用。 展开更多
关键词 鲤春病毒血症(SVC) 数字RT-PCR 实时定量RT-PCR 灵敏性 特异性 重现性
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草鱼(Ctenopharyngodon idellus)性腺细胞系(GCO)特性和对鲤春病毒的敏感性 被引量：3
16
作者 王津津 刘莹 +7 位作者 于力 贾鹏 陈兵 史秀杰 郑晓聪 兰文升 何俊强 刘荭 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2016年第6期56-61,共6页
草鱼(Ctenopharyngodon idellus)性腺细胞系(GCO)是中国科学院水生生物研究所在20世纪70年代开展草鱼出血病研究时建立的一株细胞系,迄今已传至300多代,在中国鱼类病毒学研究领域发挥了重要作用。本研究采用形态学观察、细胞生长曲线测... 草鱼(Ctenopharyngodon idellus)性腺细胞系(GCO)是中国科学院水生生物研究所在20世纪70年代开展草鱼出血病研究时建立的一株细胞系,迄今已传至300多代,在中国鱼类病毒学研究领域发挥了重要作用。本研究采用形态学观察、细胞生长曲线测定、细胞周期测定、细胞核型分析、细胞凋亡检测、电镜观察等方法,对GCO的生长特性及鲤春病毒血症病毒(SVCV)在该细胞中的增殖特性等进行了研究。结果显示,GCO细胞的最适生长温度为25℃,在M199和MEM等细胞培养液中均能较好地生长,培养液中最适的胎牛血清浓度为10%。测定了GCO细胞系对SVCV病毒的敏感性,发现与鲤(Cyprinus carpio)上皮瘤细胞系(EPC)、肥头鲤(Pimephales promelas)细胞系(FHM)、大鳞大麻哈鱼(Oncorhynchus tshawytscha)胚胎细胞系(CHSE-214)等世界动物卫生组织(OIE)推荐和各检测实验室常用的鱼类细胞系相比,GCO细胞系对SVCV表现出非常高的敏感性。生长曲线、电镜观察和凋亡实验显示,SVCV能引起GCO细胞系出现明显而稳定的细胞病变,引起GCO细胞系出现凋亡,并在细胞质中大量增殖。结果表明,GCO细胞系适用于SVCV病毒的分离、检测以及病毒致病性的有关研究。GCO细胞的适宜生长温度为15–28℃,这一特点将使它可以广泛地用于多种水生动物病毒的分离。 展开更多
关键词 草鱼性腺细胞系 生物学特性 易感性 鲤春病毒血症病毒
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鲤春病毒血症病毒糖蛋白基因在毕赤酵母中的分泌表达 被引量：3
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作者 王树云 李江宇 +8 位作者 高志强 谷强 蒲静 任彤 张伟 张旻 江育林 武勇 张利峰 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2015年第4期31-35,共5页
根据Gen Bank中鲤春病毒血症病毒(SVCV)糖蛋白全基因序列设计特异性引物,以SVCV欧洲株病毒核酸为模板,通过RT-PCR方法获得欧洲株SVCV-G基因,克隆至p PICZαA,构建p PICZαASVCV1540表达质粒。以限制性内切酶Sac I线性化p PICZαASVCV154... 根据Gen Bank中鲤春病毒血症病毒(SVCV)糖蛋白全基因序列设计特异性引物,以SVCV欧洲株病毒核酸为模板,通过RT-PCR方法获得欧洲株SVCV-G基因,克隆至p PICZαA,构建p PICZαASVCV1540表达质粒。以限制性内切酶Sac I线性化p PICZαASVCV1540后通过化学法转化毕赤酵母感受态细胞X33和GS115,添加1%甲醇进行诱导表达,SDS-PAGE电泳分析表达产物显示其分子质量为70 ku。Western Blot分析显示该蛋白可以被SVCV山羊多抗识别,表明目的蛋白具有反应原性。 展开更多
关键词 鲤春病毒血症病毒 糖蛋白 毕赤酵母
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鲤春病毒糖蛋白(G)基因的分离及同源性比较 被引量：3
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作者 耿波 孙效文 +2 位作者 牟振波 梁利群 欧阳红生 《生物技术通报》 CAS CSCD 2006年第C00期450-454,共5页
通过RT—PCR和巢氏PCR方法从疑似鲤春病毒（SVCV）侵染的镜鲤肝组织中获得了鲤眷病毒糖蛋白（G）基因。通过序列测定与分析，所获得的鲤春病毒糖蛋白（G）基因由606个核苷酸组成。编码一个由202个氨基酸组成的糖蛋白。通过NCBI blast与... 通过RT—PCR和巢氏PCR方法从疑似鲤春病毒（SVCV）侵染的镜鲤肝组织中获得了鲤眷病毒糖蛋白（G）基因。通过序列测定与分析，所获得的鲤春病毒糖蛋白（G）基因由606个核苷酸组成。编码一个由202个氨基酸组成的糖蛋白。通过NCBI blast与9个来自不同国家或地区的鲤春病毒糖蛋白（G）基因序列比对分析，发现获得的鲤鱼春季病毒糖蛋白G基因DNA序列与美国分离的AY527273株同源性最高为99．8％，与中国分离的AY842485株同源性次高为98．7％，与英国分离的两个序列SVI538065和SVI538066株的同源性为98．2％，而与其它国家的分离株如SVUI8101、SVI318079、SVI538061、SVI538062、SVI538063的同源性最差，仅为89．4％-90．0％。氨基酸同源性分析结果与DNA同源性分析结果一致，所获得的鲤春病毒糖蛋白G基因氨基酸推导序列与其它9个分离株的氨基酸同源性在89．6％-99．5％之间。对SVCV不同分离株遗传变异和进化关系的分析为下一步开展SVCV快速诊断方法的研究和疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 鲤春病毒病 糖蛋白 序列同源性 分离株
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鲤春病毒单克隆抗体的制备 被引量：7
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作者 邴国霞 张利峰 +3 位作者 张鹤晓 吴清民 江育林 高隆英 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2007年第3期56-58,共3页
关键词 鲤春病毒血症 单克隆抗体 国际动物卫生组织 制备 北卡罗来纳州 威斯康星州 实验室鉴定 中国株
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鲤春病毒病(SVC)的发病特点及防治方法 被引量：7
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作者 许杰 王玉佩 朱彤玲 《中国水产》 北大核心 2004年第7期51-52,共2页
关键词 鲤春病毒病 发病特点 病原 症状 诊断 防治
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