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鲑鱼甲病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法研究
被引量：
1
1
作者
刘艳华
任彤
+1 位作者
谈艳苗
张利峰
《中国动物检疫》
CAS
2018年第10期99-103,共5页
鲑鱼甲病毒(Salmonid alphavirus,SAV)是鲑鱼胰脏病(Salmon pancreas disease,PD)病原,主要感染鲑科鱼类,目前在我国尚未分离到。为提高出入境鱼类中的SAV检测效率,根据SAV nsP1基因片段,设计3对特异性引物,建立了检测SAV的逆转录环介...
鲑鱼甲病毒(Salmonid alphavirus,SAV)是鲑鱼胰脏病(Salmon pancreas disease,PD)病原,主要感染鲑科鱼类,目前在我国尚未分离到。为提高出入境鱼类中的SAV检测效率,根据SAV nsP1基因片段,设计3对特异性引物,建立了检测SAV的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。该方法使用25μL反应体系,经优化后的反应温度为65℃,反应时间为1 h,检测限可达10个拷贝数的病毒核酸,且不与传染性鲑鱼贫血病毒、病毒性出血性败血症病毒、传染性造血器官坏死病毒、病毒性神经坏死病病毒、草鱼呼肠孤病毒和鲤春病毒血症病毒的RNA产生交叉反应。在反应体系中加入染料后,反应结果肉眼直接可见。本研究建立的RTLAMP方法是一种特异性强、方便快捷的SAV检测方法,适合SAV的现场初筛和核酸检测。
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关键词
鲑鱼甲病毒
逆转录环介导等温扩增检测方法
检测限
特异性
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职称材料
鲑鱼甲病毒E1基因高保守区融合表达及免疫特性的分析
2
作者
蒋烨
杜航
+7 位作者
唐丽杰
乔薪瑗
王丽
管雪婷
姜艳平
崔文
李一经
刘敏
《淡水渔业》
CSCD
北大核心
2016年第4期49-53,共5页
根据Gen Bank中公布的鲑鱼甲病毒(salmonid alphavirus,SAV)SAV 1、SAV 2和SAV3三个基因型中E1基因,选择高保守序列702 bp(436-1137)合成基因,命名为SAV E1,将其克隆到原核表达载体p Cold TF中构建重组质粒。然后将重组质粒转化到大肠...
根据Gen Bank中公布的鲑鱼甲病毒(salmonid alphavirus,SAV)SAV 1、SAV 2和SAV3三个基因型中E1基因,选择高保守序列702 bp(436-1137)合成基因,命名为SAV E1,将其克隆到原核表达载体p Cold TF中构建重组质粒。然后将重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞BL21中,经终浓度为1.0 mmol/L的IPTG诱导表达,SDSPAGE和Western blot鉴定,重组蛋白均获得了表达,表达E1重组蛋白约95 k D。用镍离子亲和层析柱纯化重组蛋白,制备抗血清。间接ELISA结果显示,鼠抗重组蛋白E1血清效价为1∶25 600;间接免疫荧光结果显示,鼠抗重组E1蛋白血清可与SAV发生特异反应,由此表明表达的E1重组蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性,为SAV检测方法的建立提供理论依据。
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关键词
鲑鱼甲病毒
(salmonid
alphavirus
SAV)
E1高保守蛋白
原核表达
免疫特性
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职称材料
题名
鲑鱼甲病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法研究
被引量：
1
1
作者
刘艳华
任彤
谈艳苗
张利峰
机构
北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心
出处
《中国动物检疫》
CAS
2018年第10期99-103,共5页
基金
国家质量监督检验检疫总局科技计划项目(2016IK013)
文摘
鲑鱼甲病毒(Salmonid alphavirus,SAV)是鲑鱼胰脏病(Salmon pancreas disease,PD)病原,主要感染鲑科鱼类,目前在我国尚未分离到。为提高出入境鱼类中的SAV检测效率,根据SAV nsP1基因片段,设计3对特异性引物,建立了检测SAV的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。该方法使用25μL反应体系,经优化后的反应温度为65℃,反应时间为1 h,检测限可达10个拷贝数的病毒核酸,且不与传染性鲑鱼贫血病毒、病毒性出血性败血症病毒、传染性造血器官坏死病毒、病毒性神经坏死病病毒、草鱼呼肠孤病毒和鲤春病毒血症病毒的RNA产生交叉反应。在反应体系中加入染料后,反应结果肉眼直接可见。本研究建立的RTLAMP方法是一种特异性强、方便快捷的SAV检测方法,适合SAV的现场初筛和核酸检测。
关键词
鲑鱼甲病毒
逆转录环介导等温扩增检测方法
检测限
特异性
Keywords
salmonid alphavirus
RT-LAMP
detection limit
specificity
分类号
S941.419 [农业科学—水产养殖]
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职称材料
题名
鲑鱼甲病毒E1基因高保守区融合表达及免疫特性的分析
2
作者
蒋烨
杜航
唐丽杰
乔薪瑗
王丽
管雪婷
姜艳平
崔文
李一经
刘敏
机构
东北农业大学动物科学与技术学院
东北农业大学动物医学学院
出处
《淡水渔业》
CSCD
北大核心
2016年第4期49-53,共5页
基金
国家科技支撑计划(2013BAD12B02)
文摘
根据Gen Bank中公布的鲑鱼甲病毒(salmonid alphavirus,SAV)SAV 1、SAV 2和SAV3三个基因型中E1基因,选择高保守序列702 bp(436-1137)合成基因,命名为SAV E1,将其克隆到原核表达载体p Cold TF中构建重组质粒。然后将重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞BL21中,经终浓度为1.0 mmol/L的IPTG诱导表达,SDSPAGE和Western blot鉴定,重组蛋白均获得了表达,表达E1重组蛋白约95 k D。用镍离子亲和层析柱纯化重组蛋白,制备抗血清。间接ELISA结果显示,鼠抗重组蛋白E1血清效价为1∶25 600;间接免疫荧光结果显示,鼠抗重组E1蛋白血清可与SAV发生特异反应,由此表明表达的E1重组蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性,为SAV检测方法的建立提供理论依据。
关键词
鲑鱼甲病毒
(salmonid
alphavirus
SAV)
E1高保守蛋白
原核表达
免疫特性
Keywords
salmonid alphavirus
highly conserved E1 protein
prokaryotic expression
immunogenicity
分类号
S941.41 [农业科学—水产养殖]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鲑鱼甲病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法研究
刘艳华
任彤
谈艳苗
张利峰
《中国动物检疫》
CAS
2018
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
鲑鱼甲病毒E1基因高保守区融合表达及免疫特性的分析
蒋烨
杜航
唐丽杰
乔薪瑗
王丽
管雪婷
姜艳平
崔文
李一经
刘敏
《淡水渔业》
CSCD
北大核心
2016
0
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职称材料
已选择
0
条
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参考文献
引证文献
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