期刊文献+
共找到161篇文章
< 1 2 9 >
每页显示 20 50 100
湖州市某三甲医院住院患者艰难梭菌毒素基因检测及其分子流行病学分析
1
作者 郑莉莉 强鑫华 嵇龙飞 《中国抗生素杂志》 北大核心 2025年第2期129-136,共8页
目的研究地市级医院住院患者艰难梭菌感染的发生情况,并分析艰难梭菌的分子流行病学特征。方法收集湖州市第一人民医院2023年11月—2023年12月住院腹泻患者粪便标本,培养分离艰难梭菌后,采用核酸扩增技术检测毒素基因,菌株经全基因测序... 目的研究地市级医院住院患者艰难梭菌感染的发生情况,并分析艰难梭菌的分子流行病学特征。方法收集湖州市第一人民医院2023年11月—2023年12月住院腹泻患者粪便标本,培养分离艰难梭菌后,采用核酸扩增技术检测毒素基因,菌株经全基因测序后(Whole Genome Sequencing,WGS)进行分子流行病学分析。结果从500份住院患者腹泻样本中分离得到49株艰难梭菌,其中产毒型艰难梭菌40株,艰难梭菌感染(Clostridium difficile infections,CDI)阳性率为8.00%;PCR检测的毒素基因主要为tcdA(+)/tcdB(+),双毒素基因阴性(A+B+CDT-),占97.50%(39/40),1株携带双毒素基因(A+B+CDT+);CDI阳性率最高的科室是消化内科,其次为ICU;MLST分型中,共有13种ST型别,其中ST2型为优势型别,占30.00%;结合WGS数据分析,未发现艰难梭菌菌株在研究期间发生流行和传播。结论本院CDI在住院腹泻患者中的发生率较低,未发生院内感染传播和暴发流行现象,但不排除存在未知感染源可能性,应重点关注重点科室,如ICU患者发生CDI情况。 展开更多
关键词 住院患者 腹泻 艰难 毒素基因 分子分型
在线阅读 下载PDF
黑山羊魏氏梭菌的分离及毒素基因鉴定
2
作者 杨莉 徐景峨 +5 位作者 李刚 潘永 李婷 杨昌艳 杨彩琼 李道敏 《上海畜牧兽医通讯》 2024年第5期39-43,共5页
贵州地区黑山羊出现腹部鼓胀和突然死亡,笔者采集病死黑山羊肝、肾和肠内容物进行病原分离培养、生化试验、毒素基因PCR鉴定和测序,结果显示:共分离出4株魏氏梭菌,分离株中含有α、ε毒素基因,血清型属A和D型。羊发生死亡的原因是由魏... 贵州地区黑山羊出现腹部鼓胀和突然死亡,笔者采集病死黑山羊肝、肾和肠内容物进行病原分离培养、生化试验、毒素基因PCR鉴定和测序,结果显示:共分离出4株魏氏梭菌,分离株中含有α、ε毒素基因,血清型属A和D型。羊发生死亡的原因是由魏氏梭菌引起的羊快疫和羊肠毒血症等疾病。 展开更多
关键词 黑山羊 魏氏 基因 鉴定
在线阅读 下载PDF
犊牛腹泻产气荚膜梭菌的毒素基因分型与耐药性分析——以山东省某规模奶牛场为例
3
作者 刘芝美 《中国乳业》 2025年第8期54-60,共7页
[目的]为查明山东省某规模化奶牛场腹泻犊牛病因及病原体耐药性,研究采集病料进行病原学鉴定和耐药性分析。[方法]无菌采集病死犊牛肠系膜、肺脏、脾脏等组织病料装入采样袋,共18份,通过细菌分离培养及生化试验,细菌16S rRNA进行PCR扩... [目的]为查明山东省某规模化奶牛场腹泻犊牛病因及病原体耐药性,研究采集病料进行病原学鉴定和耐药性分析。[方法]无菌采集病死犊牛肠系膜、肺脏、脾脏等组织病料装入采样袋,共18份,通过细菌分离培养及生化试验,细菌16S rRNA进行PCR扩增和毒素分型鉴定,运用K-B琼脂扩散纸法对分离菌株耐药性试验,PCR电泳检测14种耐药基因。[结果]结果显示,5株C型产气荚膜梭菌被检出,检出率为27.8%。分离菌对多种抗生素表现耐药性,β-内酰胺类、氨基糖苷类、磺胺类和氯霉素类耐药基因均有检出。[结论]研究结果表明,C型产气荚膜梭菌是引起奶牛场腹泻犊牛发病的致病菌,且对部分抗生素表现耐药性。该研究结果为奶牛场产气荚膜梭菌防控提供参考。 展开更多
关键词 腹泻犊牛 产气荚膜 毒素基因分型 耐药性
在线阅读 下载PDF
产气荚膜梭菌α-毒素基因数字PCR方法的建立及其在标准物质研制方面的应用 被引量:2
4
作者 张铭洋 张喜悦 +7 位作者 赵格 曲志娜 高宏伟 孙敏 程慧敏 徐佳微 王君玮 邹明 《山东农业科学》 北大核心 2024年第1期156-163,共8页
产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)是一种重要的人兽共患病原菌,α-毒素是其分子生物学检测的主要靶标。试验选取Clper引物及探针建立微滴式数字PCR(droplet digtial PCR,ddPCR)方法,最佳引物浓度0.85μmol/L,探针浓度为0.3μmol/L... 产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)是一种重要的人兽共患病原菌,α-毒素是其分子生物学检测的主要靶标。试验选取Clper引物及探针建立微滴式数字PCR(droplet digtial PCR,ddPCR)方法,最佳引物浓度0.85μmol/L,探针浓度为0.3μmol/L,退火温度为60℃。利用建立的ddPCR方法检测单核细胞增生李斯特菌、沙门氏菌、大肠杆菌、肠球菌、金黄色葡萄球菌、弯曲杆菌的DNA,结果均为阴性,表明该方法具有较好的特异性。合成产气荚膜梭菌α-毒素基因,制成DNA标准品,选取3个稀释梯度的标准品进行重复试验,组内和组间变异系数均小于5%,证明该方法具有较好的重复性。采用7个稀释梯度的标准品进行重复检测,计算出该方法的检测限为12.39 copies/μL,定量限为33.97 copies/μL。通过对68份临床样品进行检测,证实该方法可用于临床,且用于检测质粒DNA时无明显的基质效应。应用ddPCR方法对标准品进行均匀性和稳定性检验,并联合9家实验室进行定值,最终获得了国家市场监督管理总局颁发的标准物质证书(GBW(E)091237)。α-毒素基因ddPCR方法的建立和DNA标准物的研制,为产气荚膜梭菌分子生物学检测试剂的标准化奠定了基础。 展开更多
关键词 产气荚膜 ddPCR α-毒素基因 标准物质 特异性 灵敏度 可重复性 定值
在线阅读 下载PDF
魏氏梭菌α-毒素基因探针的制备及应用 被引量:1
5
作者 王开功 周碧君 +3 位作者 王琛 方英 李海阔 文明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期198-201,共4页
以A型魏氏梭菌贵州分离株为材料,提取染色体DNA,经PCR扩增和酚:氯仿抽提回收得到242bp的α 毒素基因部分片段,用地高辛标记制备了α 毒素基因探针。该探针不与埃希氏大肠杆菌、都柏林沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、猪丹毒杆菌、蜡样芽胞杆... 以A型魏氏梭菌贵州分离株为材料,提取染色体DNA,经PCR扩增和酚:氯仿抽提回收得到242bp的α 毒素基因部分片段,用地高辛标记制备了α 毒素基因探针。该探针不与埃希氏大肠杆菌、都柏林沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、猪丹毒杆菌、蜡样芽胞杆菌及多杀性巴氏杆菌等细菌的DNA样品发生反应,只与魏氏梭菌DNA样品呈阳性反应,能检出300pg的DNA样品;应用探针对40株魏氏梭菌进行了Dot Blotting检测,结果与生化试验鉴定的符合率达到90%,表明该探针具有较高的特异性和灵敏度,可应用于临床上魏氏梭菌的检测。 展开更多
关键词 魏氏 α-毒素基因探针 制备技术 染色体DNA PCR扩增
在线阅读 下载PDF
魏氏梭菌贵州分离株α-毒素基因的克隆与表达
6
作者 王开功 周碧君 +1 位作者 李海阔 文明 《山地农业生物学报》 2003年第6期499-504,共6页
提取已鉴定的A型魏氏梭菌Clostridiumwelchii贵州分离株的染色体DNA,经酶切回收分子长2~4kb的DNA片段混合物,将其插入质粒载体pUC19中,并转化至E.coliJM109,通过Amp抗药性和显色反应的选择,再提取阳性重组细菌质粒进行探针检测、酶切... 提取已鉴定的A型魏氏梭菌Clostridiumwelchii贵州分离株的染色体DNA,经酶切回收分子长2~4kb的DNA片段混合物,将其插入质粒载体pUC19中,并转化至E.coliJM109,通过Amp抗药性和显色反应的选择,再提取阳性重组细菌质粒进行探针检测、酶切分析和PCR鉴定,筛选出含魏氏梭菌α-毒素基因的重组大肠杆菌;经溶血与溶血抑制试验及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳证实,重组E.coli的表达产物符合α-毒素的生物学特性。 展开更多
关键词 克隆 基因表达 重组 魏氏 α-毒素基因 肠毒血症 坏死性肠炎
在线阅读 下载PDF
基于艰难梭菌tcd C基因的新型LAMP检测方法的研发及临床诊断效能评估
7
作者 肖园园 段菊屏 +5 位作者 周景翔 黄琴 卿琰 王海波 吴安华 李春辉 《中国感染控制杂志》 北大核心 2025年第4期451-459,共9页
目的研发一项快速鉴定艰难梭菌并能明确高产毒株的检测方法,开展临床评估。方法利用环介导等温扩增(LAMP)法,基于tcd C、tcd A、tcd B基因来鉴定艰难梭菌,并评估该检测技术的灵敏度、特异度和总体一致性。结果共完成499例疑似艰难梭菌... 目的研发一项快速鉴定艰难梭菌并能明确高产毒株的检测方法,开展临床评估。方法利用环介导等温扩增(LAMP)法,基于tcd C、tcd A、tcd B基因来鉴定艰难梭菌,并评估该检测技术的灵敏度、特异度和总体一致性。结果共完成499例疑似艰难梭菌感染腹泻住院患者粪便标本检测,艰难梭菌检出率为12.8%(64/499),其中产毒艰难梭菌的检出率为10.8%(54/499)。本检测方法针对tcd A的灵敏度为87.2%,特异度为98.9%,阳性预测值为89.1%,阴性预测值为98.6%;对tcd B的灵敏度为88.2%,特异度为99.6%,阳性预测值为90.0%,阴性预测值为98.7%。不同菌株总毒素量各有不同,但A+B+菌株平均产毒量(1.79μg/mL)高于A-B+菌株(0.72μg/mL)和A-B-菌株(<0.10μg/mL)。结论本便携式高通量LAMP检测方法能快速、高效鉴定艰难梭菌并且明确高毒株。 展开更多
关键词 艰难 艰难感染 分子诊断 毒素基因 毒力调节基因 tcd C
在线阅读 下载PDF
A型魏氏梭菌α毒素Asp-56基因定点突变与结构分析 被引量:4
8
作者 宫语晨 许崇利 +1 位作者 钱爱东 许崇波 《中国兽药杂志》 2014年第6期1-7,共7页
为探索A型魏氏梭菌α毒素第56位天冬氨酸(Asp-56)对其生物学活性的影响,将α毒素Asp-56密码子(GAT)定点突变成甘氨酸(Gly-56)密码子(GGT),构建了含α毒素D56G突变基因表达质粒的重组菌株BL21(DE3)(pM-D56G),该突变体蛋白表达量约为22.48... 为探索A型魏氏梭菌α毒素第56位天冬氨酸(Asp-56)对其生物学活性的影响,将α毒素Asp-56密码子(GAT)定点突变成甘氨酸(Gly-56)密码子(GGT),构建了含α毒素D56G突变基因表达质粒的重组菌株BL21(DE3)(pM-D56G),该突变体蛋白表达量约为22.48%。α毒素和α毒素D56G突变体蛋白的二级结构主要由α螺旋和无规则卷曲组成,两者的圆二色(CD)光谱检测有微小变化。生物学活性检测结果表明,α毒素D56G突变体蛋白失去了α毒素的磷脂酶C活性,且α毒素D56G突变体蛋白免疫的小鼠能够保护1MLD的A型魏氏梭菌标准株C57-1毒素攻击。此研究为进一步研究α毒素分子结构与生物学功能的关系奠定了基础。 展开更多
关键词 A型魏氏 Α毒素 基因定点突变 磷脂酶C活性 圆二色光谱
在线阅读 下载PDF
一例牦牛魏氏梭菌病的诊治体会
9
作者 陈玮 《中国畜牧业》 2025年第10期99-100,共2页
魏氏梭菌又称为产气荚膜梭菌,属于革兰氏阳性粗大杆菌,有荚膜,毒力较强,根据其产生的毒素类型分为A、B、C、D、E五型。牦牛感染以C型(致α、β毒素)和D型(致α、ε毒素)为主。该菌芽孢抵抗力强,可在土壤中存活数年,遇适宜条件(如肠道缺... 魏氏梭菌又称为产气荚膜梭菌,属于革兰氏阳性粗大杆菌,有荚膜,毒力较强,根据其产生的毒素类型分为A、B、C、D、E五型。牦牛感染以C型(致α、β毒素)和D型(致α、ε毒素)为主。该菌芽孢抵抗力强,可在土壤中存活数年,遇适宜条件(如肠道缺氧环境)迅速繁殖并释放毒素。病原菌感染后在牦牛肠道中缓慢增殖,产生毒素较少时毒素可随肠道蠕动排出体外,但受到外界不良环境刺激时机体抵抗力降低,胃肠蠕动缓慢,大量毒素会随着血液循环到达全身,引起毒血症,进而导致休克或死亡。 展开更多
关键词 牦牛 Α毒素 Β毒素 魏氏
在线阅读 下载PDF
中国部分地区艰难梭菌PCR-核糖体分型及毒素基因多态性研究 被引量:10
10
作者 王晶 李春辉 +6 位作者 杜鹏程 曹波 陈晨 卢金星 李中杰 余宏杰 程颖 《中国感染控制杂志》 CAS 2014年第1期1-7,共7页
目的了解中国部分地区艰难梭菌聚合酶链反应(PCR)-核糖体型别分布及其A、B毒素基因多态性,为建立适宜中国的艰难梭菌分子检测和分子分型技术提供基础数据,同时在基因水平上为艰难梭菌感染导致的复杂临床表现提供依据。方法对中国3个城市... 目的了解中国部分地区艰难梭菌聚合酶链反应(PCR)-核糖体型别分布及其A、B毒素基因多态性,为建立适宜中国的艰难梭菌分子检测和分子分型技术提供基础数据,同时在基因水平上为艰难梭菌感染导致的复杂临床表现提供依据。方法对中国3个城市(北京、广州、济南)分离的64株艰难梭菌临床株进行PCR-核糖体分型,并对不同型别的26株代表菌株的A、B毒素基因进行扩增测序。结果 64株艰难梭菌中,毒素基因型以A+B+型(45株,70.31%)为主,A-B+型19株(29.69%)。共存在9种PCR-核糖体型别,以017型(21株,32.81%)为主要型别,其次为001型(13株,20.31%)、012型(11株,17.19%)。A-B+菌株中,14株(73.68%)是017型,1株是001型。A、B毒素基因呈现一定的多态性,其中有7种A毒素序列型别(TSTA),6种B毒素序列型别(TSTB),8种A、B毒素序列型别组合(TSTG)。结论我国部分地区的艰难梭菌可能以PCR-核糖体017型为主,A、B毒素基因在菌株间存在多态性,且核糖体型别与毒素基因多态性间存在相对应的关联。应进一步扩大菌株数量和范围,探寻适合我国的分子检测和分子分型方法,从而帮助医院更好地预防和控制艰难梭菌感染。 展开更多
关键词 艰难 艰难状芽孢杆 假膜性肠炎 核糖体分型 A毒素基因 B毒素基因 抗生素相关腹泻 医院感染
在线阅读 下载PDF
产气荚膜梭菌β-毒素基因的克隆及CPB-ST融合基因的构建 被引量:2
11
作者 王玉炯 许崇波 +2 位作者 冯书章 朱平 殷震 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期372-378,共7页
用聚合酶链式反应 (PCR)技术 ,从B型产气荚膜梭菌染色体基因组中扩增了 930bp的 β -毒素基因。用限制性核酸内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ对PCR产物进行双酶切处理 ,然后 ,通过T4DNA连接酶将其定向连接于事先经同样的双酶切处理的载体质粒 pET ... 用聚合酶链式反应 (PCR)技术 ,从B型产气荚膜梭菌染色体基因组中扩增了 930bp的 β -毒素基因。用限制性核酸内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ对PCR产物进行双酶切处理 ,然后 ,通过T4DNA连接酶将其定向连接于事先经同样的双酶切处理的载体质粒 pET - 2 8C(+)的多克隆位点 ,转化至受体菌BL2 1(DE3)中。经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切分析和PCR扩增检测。证明重组质粒 pECB2中含有产气荚膜梭菌的 β -毒素基因。经核苷酸序列分析 ,明确了克隆的 β -毒素基因在重组质粒中的连接向位和阅读框架是正确的。利用已构建的另一重组质粒pXST1(带有肠毒素性大肠杆菌的耐热性肠毒素ST基因 ) ,通过EcoRⅠ和SalⅠ双酶切处理 ,将切下的ST基因片段定向连接到 pECB2重组质粒中CPB基因的下游。经特定酶切分析鉴定 ,得到了理想重组子质粒pECB -ST1,CPB -ST融合基因在重组质粒 pECB 展开更多
关键词 产气荚膜 β-毒素基因 ST基因 融合基因
在线阅读 下载PDF
应用Dot-ELISA检测家兔魏氏梭菌抗毒素的研究 被引量:3
12
作者 王云峰 王翠兰 +2 位作者 王英厚 崔尚金 王西川 《中国畜禽传染病》 CSCD 1995年第6期34-37,共4页
将A型魏氏梭菌培养液经蔡氏滤器过滤,硫酸铵沉淀,再经Sephadex G-200柱层析,收集毒素峰洗脱液,浓缩后制备A型魏氏梭菌毒素纯化抗原。用混合纤维素酯微孔滤膜为固相载体,制备检测兔魏氏梭菌抗毒素的快速诊断膜。用Dot-ELISA检查6只魏氏... 将A型魏氏梭菌培养液经蔡氏滤器过滤,硫酸铵沉淀,再经Sephadex G-200柱层析,收集毒素峰洗脱液,浓缩后制备A型魏氏梭菌毒素纯化抗原。用混合纤维素酯微孔滤膜为固相载体,制备检测兔魏氏梭菌抗毒素的快速诊断膜。用Dot-ELISA检查6只魏氏梭菌高免兔的血清均呈阳性反应,对13只兔轮状病毒(LaRV)阳性血清、13只兔大肠杆菌(E.Coli)阳性血清、15只兔巴氏菌感染兔、16只波氏菌感染兔、9只葡萄球菌感染兔及27份健康兔血清检查均为阴性。A型魏氏梭菌阳性血清均可被特异性抗原所阻断。Dot-ELISA与SPA-ELISA对比差异不显著(P>0.05),两者阴、阳性符合率为89.06%。试验结果证明,本方法特异性强、敏感性高、操作简便、快速。为该病的监测净化提供了一种准确检验方法。 展开更多
关键词 兔病 家兔 魏氏 毒素 DOT-ELISA
在线阅读 下载PDF
从A型产气荚膜梭菌C57-1中发现β2毒素基因 被引量:3
13
作者 陈小云 万建青 +2 位作者 程君生 关孚时 张存帅 《中国兽药杂志》 2005年第5期6-9,共4页
为了进一步研究A型产气荚膜梭菌C571株的遗传学背景,应用聚合酶链式反应(PCR)技术,从该菌株中扩增出大小为726bp的β2毒素基因(cpb2基因)的部分序列,并将其克隆入pMD18-T载体中。转化至受体菌DH5α后,经Amp/IPTG/X-Gal选择培养,提取质粒... 为了进一步研究A型产气荚膜梭菌C571株的遗传学背景,应用聚合酶链式反应(PCR)技术,从该菌株中扩增出大小为726bp的β2毒素基因(cpb2基因)的部分序列,并将其克隆入pMD18-T载体中。转化至受体菌DH5α后,经Amp/IPTG/X-Gal选择培养,提取质粒,筛选阳性重组克隆。核苷酸序列分析证实,该基因片段与文献报道的β2毒素基因序列一致。 展开更多
关键词 A型产气荚膜 毒素基因 聚合酶链式反应 核苷酸序列分析 IPTG 重组克隆 基因序列 文献报道 基因片段 遗传学 T载体 受体 Gal Amp
在线阅读 下载PDF
产气荚膜梭菌B型C58-1株β1毒素基因的克隆表达 被引量:1
14
作者 林初文 张松林 +4 位作者 刘磊 马永彪 韩文瑜 汪洋 沈志强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第2期324-330,共7页
利用PCR技术,从B型产气荚膜梭菌中国标准株C58-1株扩增出β1毒素基因,连接pMD18-T载体筛选阳性克隆,然后用限制性核酸内切酶BamHⅠ和SalⅠ对其进行酶切,回收927bp的β1毒素基因片段,将其定向克隆到载体pET-32a中,获得重组质粒pETβ927。... 利用PCR技术,从B型产气荚膜梭菌中国标准株C58-1株扩增出β1毒素基因,连接pMD18-T载体筛选阳性克隆,然后用限制性核酸内切酶BamHⅠ和SalⅠ对其进行酶切,回收927bp的β1毒素基因片段,将其定向克隆到载体pET-32a中,获得重组质粒pETβ927。将pETβ927转化至受体菌BL21(DE3)中,其表达产物经His-Trap FF预装柱纯化、SDS-PAGE检测目的蛋白大小和分布及Western blotting检测其反应原性。结果表明,完整的β1毒素基因大小为1 011bp,与GenBank发表的B型和C型产气荚膜梭菌β1毒素蛋白序列同源性达99.4%以上;SDS-PAGE结果显示重组目的蛋白在大肠杆菌中成功表达,融合蛋白大小为54ku,在超声波裂解上清和包涵体中均有分布,但以包涵体为主。Western blotting检测结果显示表达的重组蛋白可与特异性血清抗体发生免疫反应,表明β1毒素蛋白具有较好的反应原性。 展开更多
关键词 B型产气荚膜中国标准株C58—1株 β1毒素基因 克隆表达
在线阅读 下载PDF
B型产气荚膜梭菌C58-1株ε毒素基因序列分析与可溶性表达
15
作者 林初文 张松林 +3 位作者 刘磊 马永彪 沈志强 韩文瑜 《动物医学进展》 北大核心 2015年第5期29-32,共4页
利用PCR技术从B型产气荚膜梭菌扩增出ε毒素基因,然后用限制性核酸内切酶BamHⅠ和SalⅠ对其进行酶切,回收984bp的ε毒素基因片段,将其定向克隆在载体PET-32a中,获得重组质粒pETε984。将pETε984转化至受体菌BL21(DE3)中。重组菌株经IPT... 利用PCR技术从B型产气荚膜梭菌扩增出ε毒素基因,然后用限制性核酸内切酶BamHⅠ和SalⅠ对其进行酶切,回收984bp的ε毒素基因片段,将其定向克隆在载体PET-32a中,获得重组质粒pETε984。将pETε984转化至受体菌BL21(DE3)中。重组菌株经IPTG诱导后,其表达产物经SDS-PACE分析。结果表明,重组目的蛋白在大肠埃希菌成功表达,融合蛋白大小为51ku,存在于细菌培养上清中,可溶性蛋白占菌体总蛋白相对含量的67.8%。序列分析表明C58-1株ε毒素蛋白序列与目前公布的所有B型和D型产气荚膜梭菌同源性均在99.7%以上,但ε毒素蛋白序列第321位出现了S→Y突变。研究结果为ε毒素蛋白的亚单位疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 产气荚膜B型C58-1株 ε毒素基因 表达 序列分析
在线阅读 下载PDF
A型产气荚膜梭菌α毒素Thr-272基因定点突变与结构分析 被引量:3
16
作者 樛跃 许崇波 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期186-192,共7页
利用定点突变技术,将A型产气荚膜梭菌α毒素(CPA)第272位苏氨酸(ACA)定点突变成脯氨酸(CCG),构建了含CPA突变基因表达质粒的重组菌株BL21(DE3)(pMCPA-T272P)。经酶切鉴定和序列测定证实,构建的重组质粒pMCPA-T272P含有CPA-Thr272Pro突... 利用定点突变技术,将A型产气荚膜梭菌α毒素(CPA)第272位苏氨酸(ACA)定点突变成脯氨酸(CCG),构建了含CPA突变基因表达质粒的重组菌株BL21(DE3)(pMCPA-T272P)。经酶切鉴定和序列测定证实,构建的重组质粒pMCPA-T272P含有CPA-Thr272Pro突变基因,且基因序列和阅读框架正确。重组菌株BL21(DE3)(pMCPA-T272P)表达产物经SDS-PAGE分析,其表达量占菌体总蛋白相对含量的18.34%。应用ExPASy服务器上的SOPMA法对CPA和CPA-Thr272Pro突变体分子进行二级结构预测,同时模拟了其3D结构。结果显示,CPA和CPA-Thr272Pro突变体蛋白的二级结构主要是由α-螺旋和无规则卷曲组成,3D结构非常相似。CPA和CPA-Thr272Pro突变体蛋白的圆二色(CD)光谱分析发现二者的CD光谱有一些微小变化。磷脂酶C活性检测结果表明,CPA-Thr272Pro突变体蛋白失去了α毒素的磷脂酶C活性。免疫试验结果表明,用CPA-Thr272Pro突变体蛋白免疫的小鼠可以抵抗1MLD的A型产气荚膜梭菌标准株C57-1毒素攻击。 展开更多
关键词 产气荚膜 Α毒素基因 定点突变 基因表达 圆二色光谱
在线阅读 下载PDF
C型产气荚膜梭菌α、β_1、β_2毒素基因融合及免疫原性研究 被引量:6
17
作者 许崇波 陈向东 +2 位作者 许崇利 逄越 高凤山 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期379-384,共6页
为了构建具有良好免疫原性的α-β1-β2融合蛋白,利用PCR技术,从含C型产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆质粒pETXA1中扩增出0.95 kbα毒素基因,将其连接到经NcoⅠ单酶切并用碱性磷酸酶处理的含1.65 kbβ1-β2融合基因的重组质粒pETXB1B2上,... 为了构建具有良好免疫原性的α-β1-β2融合蛋白,利用PCR技术,从含C型产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆质粒pETXA1中扩增出0.95 kbα毒素基因,将其连接到经NcoⅠ单酶切并用碱性磷酸酶处理的含1.65 kbβ1-β2融合基因的重组质粒pETXB1B2上,构建含2.6 kbα-β1-β2融合基因的表达质粒重组菌株BL21(DE3)(pETXAB1B2).经酶切鉴定和序列测定证实,构建的重组质粒pETXAB1B2含有α-β1-β2融合基因,且基因序列和阅读框架正确.经ELISA检测,重组菌株表达的α-β1-β2融合蛋白能够被α、β1和β2毒素抗体识别.表达优化结果表明,以IPTG为诱导剂诱导α-β1-β2融合基因表达的优化条件是:培养基pH 7.5,培养温度37℃,IPTG浓度0.4 mmol?L-1,菌体生长密度OD600达到1.0时加入IPTG,诱导时间5 h,此时α-β1-β2融合蛋白表达量为31.2%.免疫试验结果表明,α-β1-β2融合蛋白免疫的小鼠可以抵抗1MLD(最小致死量,minimum lethal dose)C型产气荚膜梭菌标准株C59-44毒素攻击,表明构建的重组菌株可以作为预防仔猪红痢基因工程亚单位苗的候选菌株. 展开更多
关键词 C型产气荚膜 Α毒素基因 β1毒素基因 β2毒素基因 融合蛋白 免疫原性
在线阅读 下载PDF
魏氏梭菌α毒素基因的克隆表达及其间接ELISA方法的建立
18
作者 宋宇 黄勇 《四川畜牧兽医》 2012年第6期31-35,共5页
对GenBank上发表的魏氏梭菌α毒素基因的氨基酸序列进行了二级结构、疏水性、抗原决定簇、跨膜区以及抗原性分析,在此基础上,对α毒素基因130~966nt位的837bp长的适合原核表达的区域进行PCR扩增、克隆、核酸序列测定和生物信息学分析... 对GenBank上发表的魏氏梭菌α毒素基因的氨基酸序列进行了二级结构、疏水性、抗原决定簇、跨膜区以及抗原性分析,在此基础上,对α毒素基因130~966nt位的837bp长的适合原核表达的区域进行PCR扩增、克隆、核酸序列测定和生物信息学分析。同时,建立了检测魏氏梭菌α毒素抗体的间接ELISA方法。 展开更多
关键词 魏氏 Α毒素 原核表达 重组蛋白 间接ELISA
在线阅读 下载PDF
C型产气荚膜梭菌β毒素基因克隆与核苷酸序列分析 被引量:8
19
作者 许崇波 王玉炯 +5 位作者 卫广森 王卓 冯书章 王文成 马成国 李尚波 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第2期111-114,共4页
用PCR技术,从含C型产气荚膜梭菌β毒素基因质粒pB12中扩增出了0.95Kb的β毒素基因,然后用限制性核酸内切酶BamHI和EcoRI对其进行双酶切处理,最后将其定向连接在事先经同样内切酶处理的载体pET-28c(... 用PCR技术,从含C型产气荚膜梭菌β毒素基因质粒pB12中扩增出了0.95Kb的β毒素基因,然后用限制性核酸内切酶BamHI和EcoRI对其进行双酶切处理,最后将其定向连接在事先经同样内切酶处理的载体pET-28c(+)中的相应位点上,转化至受体菌BL21(DE3)中。经BamHI和EcoRI双酶切分析和核苷酸序列分析,证明重组质粒pXETB2含有产气荚膜梭菌β毒素基因,确定了其全部的核苷酸序列。 展开更多
关键词 产气荚膜 β毒素基因 基因克隆 核苷酸序列
在线阅读 下载PDF
产气荚膜梭菌α-β融合基因的高效表达 被引量:4
20
作者 许崇波 赵宝华 +2 位作者 卫广森 王卓 王文成 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期356-359,共4页
用PCR从含产气荚膜梭菌α毒素基因的质粒pXETA1中扩增出α毒素基因 ,用NcoI和BamHI双酶切该α毒素基因 ,回收 0 .95kb的α毒素基因片段 ,再用NcoI和BamHI双酶切含产气荚膜梭菌 β毒素基因质粒pXCPAB2 ,与上述回收的α毒素基因片段连接 ... 用PCR从含产气荚膜梭菌α毒素基因的质粒pXETA1中扩增出α毒素基因 ,用NcoI和BamHI双酶切该α毒素基因 ,回收 0 .95kb的α毒素基因片段 ,再用NcoI和BamHI双酶切含产气荚膜梭菌 β毒素基因质粒pXCPAB2 ,与上述回收的α毒素基因片段连接 ,转化至受体菌BL2 1(DE3)中。经NcoI、BamHI、NcoI酶切反应鉴定和核苷酸序列分析证实 ,获得了理想重组质粒pXCPAB2 ,该重组质粒含有α β融合基因。重组菌株BL2 1(DE3) (pXCPAB2 )经IPTG诱导后 ,其表达产物经ELISA检测和SDS_PAGE分析 ,结果表明重组菌株可以高效表达α β融合蛋白 ,该融合蛋白占菌体总蛋白的 2 2 .14%。 展开更多
关键词 产气荚膜 Α毒素 Β毒素 融合基因 基因表达
在线阅读 下载PDF
上一页 1 2 9 下一页 到第
使用帮助 返回顶部