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一种农杆菌介导的糜子高效遗传转化方法
1
作者 夏启玉 降彦苗 +5 位作者 刘亚男 李海权 程汝宏 郭安平 刘国庆 赵辉 《热带作物学报》 北大核心 2025年第1期44-50,共7页
糜子(Panicum miliaceum L.)是我国传统的粮食作物,截至目前,针对糜子遗传转化方法的研究仍较少,本研究旨在建立农杆菌介导的糜子高效遗传转化方法。以糜子品种冀黍5号的成熟种子为外植体,在CIM和MSD诱导培养基上分别诱导糜子的胚性愈伤... 糜子(Panicum miliaceum L.)是我国传统的粮食作物,截至目前,针对糜子遗传转化方法的研究仍较少,本研究旨在建立农杆菌介导的糜子高效遗传转化方法。以糜子品种冀黍5号的成熟种子为外植体,在CIM和MSD诱导培养基上分别诱导糜子的胚性愈伤,以其作为转化受体材料,用含植物表达载体的农杆菌侵染60min并共培养6d,转接至含0.025g/L潮霉素的筛选培养基上筛选出抗性愈伤,接着在含0.015g/L潮霉素的分化培养基上分化,最后在含0.015g/L潮霉素的生根培养基上生根成苗,用载体特异性引物对再生植株进行PCR检测,鉴定其是否为阳性转基因植株。根据多个批次的转化实验统计糜子的抗性再生植株的筛选效率和转化效率。结果表明:CIM和MSD诱导培养基均能诱导出糜子胚性愈伤,但CIM培养基诱导的糜子胚性愈伤效果更好;糜子胚性愈伤在被农杆菌侵染及与农杆菌共培养后,经在含潮霉素的培养基上筛选、分化和生根后获得多株抗性再生糜子植株,3次试验获得的糜子抗性再生植株的PCR鉴定阳性率为100%,平均转化效率为30%以上。本研究成功建立了农杆菌介导的糜子遗传转化方法,操作简单,转化效率高,成本低廉,且转化不受季节限制,能规模化开展,为糜子的遗传改良提供有效的技术手段。 展开更多
关键词 糜子 农杆菌 遗传转化 转化效率
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农杆菌介导微型月季遗传转化中抗生素的优化
2
作者 李燕 黄婧 +1 位作者 张启香 张敏 《江苏林业科技》 2025年第2期1-9,共9页
通过对3种抗生素的筛选,确立最适抑制农杆菌过度生长、促进微型月季愈伤组织生长与分化的抗生素及其浓度,从而建立稳定而有效的微型月季遗传转化体系。结果表明:微型月季叶片培养于150 mg/L头孢噻肟钠培养基可抑制农杆菌生长且利于材料... 通过对3种抗生素的筛选,确立最适抑制农杆菌过度生长、促进微型月季愈伤组织生长与分化的抗生素及其浓度,从而建立稳定而有效的微型月季遗传转化体系。结果表明:微型月季叶片培养于150 mg/L头孢噻肟钠培养基可抑制农杆菌生长且利于材料生长分化。侵染最佳条件为:侵染菌液OD_(600)为0.5—0.6,侵染5—10 min,共培养2 d。‘荷仙姑’‘彩虹’和‘笑脸’微型月季阳性愈伤的PCR阳性率分别为26.4%,18.4%和31.2%。该研究结果为微型月季农杆菌遗传转化的抗生素选择和培育条件的优化提供一定参考。 展开更多
关键词 微型月季 遗传转化 抗生素 培养 农杆菌
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发根农杆菌介导的蓝莓遗传转化体系的建立
3
作者 邬婷婷 刘凉琴 +5 位作者 姜燕琴 葛春峰 田亮亮 刘梦溪 曾其龙 於虹 《果树学报》 北大核心 2025年第8期1897-1904,共8页
【目的】建立蓝莓(Vaccinium corymbosum)简单、快速、经济的发根农杆菌转化体系。【方法】以蓝美1号蓝莓地栽植株当年生绿枝的茎段为外植体,使用携带GFP过表达质粒的发根农杆菌K599,在不同菌液浓度及不同添加剂组合(乙酰丁香酮和表面... 【目的】建立蓝莓(Vaccinium corymbosum)简单、快速、经济的发根农杆菌转化体系。【方法】以蓝美1号蓝莓地栽植株当年生绿枝的茎段为外植体,使用携带GFP过表达质粒的发根农杆菌K599,在不同菌液浓度及不同添加剂组合(乙酰丁香酮和表面活性剂)的筛选条件下,通过注射蓝莓茎段的芽点及两端切口进行侵染,利用GFP荧光检测和DNA检测进行转基因株系验证。【结果】GFP荧光检测发现茎段芽点及下端切口处分别产生表达荧光信号的侧芽及毛状根;在菌液OD600值为0.5~1.5的浓度区间,OD600值为1.0时诱导率最高达42.31%;不同添加剂组合对诱导率具有较大影响,200μmol·L-1乙酰丁香酮加0.05%表面活性剂的添加剂组合中诱导率最高达42.50%;最早在培养45 d时取材鉴定蓝莓遗传转化株系,从20个随机样本中测得14株转化植株,预期最高转化率为29.75%。【结论】建立了简单、快速的发根农杆菌介导的蓝美1号蓝莓遗传转化体系,为蓝莓的基因功能研究和良种选育提供技术支持。 展开更多
关键词 蓝美1号 遗传转化 发根农杆菌
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农杆菌介导的建兰品种市长红遗传转化体系的建立
4
作者 周彬 曹桦 +3 位作者 陆琳 张钰莹 李涵 李东徽 《云南农业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第4期111-119,共9页
【目的】探究农杆菌介导的建兰遗传转化体系。【方法】以建兰品种市长红(Cymbidium ensifolium‘Shizhanghong’)单龙根扩繁得到的根状茎作为试验材料,筛选影响其遗传转化的农杆菌菌株、乙酰丁香酮浓度和抗生素质量浓度,研究影响农杆菌... 【目的】探究农杆菌介导的建兰遗传转化体系。【方法】以建兰品种市长红(Cymbidium ensifolium‘Shizhanghong’)单龙根扩繁得到的根状茎作为试验材料,筛选影响其遗传转化的农杆菌菌株、乙酰丁香酮浓度和抗生素质量浓度,研究影响农杆菌介导建兰遗传转化效率和再生效率的主要因素。【结果】市长红遗传转化的最佳菌株为EHA105,乙酰丁香酮最适浓度为200μmol/L,潮霉素最佳质量浓度为40 mg/L。为保证高转化率和高再生率,市长红的最佳侵染体系为:预培养10 d后,在OD600值为0.4~0.6的农杆菌侵染液中振荡20 min,最后在黑暗条件下共培养3 d。通过筛选的最佳遗传转化条件,经绿色荧光蛋白鉴定、抗生素筛选、PCR和qRT-PCR检测,最终在180个市长红的根状茎中得到17株转基因阳性植株,转化率为9.44%。【结论】本研究建立了农杆菌介导的建兰品种市长红遗传转化体系,为其转基因育种奠定了基础。 展开更多
关键词 建兰品种市长红 根状茎 农杆菌侵染 遗传转化 绿色荧光蛋白(GFP)
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农杆菌介导的植物非组培遗传转化技术研究进展
5
作者 李娇娇 王晓光 +2 位作者 白梦岚 侯小改 郭丽丽 《浙江农林大学学报》 北大核心 2025年第5期888-897,共10页
植物遗传转化技术是现代植物基因功能研究以及分子育种方面的关键手段。然而,运用传统方法开展遗传转化对植物组织培养的依赖性极强,另外还存在明显的基因型限制等问题。农杆菌Agrobacterium介导的非组培遗传转化技术,因操作简便易行、... 植物遗传转化技术是现代植物基因功能研究以及分子育种方面的关键手段。然而,运用传统方法开展遗传转化对植物组织培养的依赖性极强,另外还存在明显的基因型限制等问题。农杆菌Agrobacterium介导的非组培遗传转化技术,因操作简便易行、不需要经历脱分化及再生等优势渐渐在多种植物中应用。本研究较为系统地梳理了农杆菌介导遗传转化的基本原理及非组培转化的各种方法,包含了种子介导法、花器官转化法、活体注射递送法、切割-浸渍-出芽法、电穿孔法、病毒递送法等;还总结了其他非组培遗传转化方法,如纳米载体辅助递送法、发育调控因子辅助转化法、花粉管介导法、病毒载体介导法。通过对不同方法的应用实例、转化效率、优缺点以及适用植物进行比较,较为清晰地展现非组培转化体系在提升遗传转化效率、拓宽物种适用范围、降低转化技术要求等方面所拥有的潜力,以期为建立高效、稳定且普适性强的植物非组培遗传转化体系提供理论参考及技术支持。 展开更多
关键词 非组培 根癌农杆菌 遗传转化 综述
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发根农杆菌介导的桑遗传转化体系的优化
6
作者 吴敏 廖扬振 +3 位作者 皮继岚 刘尚煜 魏渊 欧阳臻 《山东农业科学》 北大核心 2025年第3期27-36,共10页
本研究在已有桑遗传转化体系的基础上对其进行优化,以提高转化效率,为后续桑基因功能研究及分子育种奠定基础。首先分别从发根农杆菌种类、外植体类型、预培养时间、侵染时间和共培养时间五个方面对农杆菌介导的桑遗传转化体系进行优化... 本研究在已有桑遗传转化体系的基础上对其进行优化,以提高转化效率,为后续桑基因功能研究及分子育种奠定基础。首先分别从发根农杆菌种类、外植体类型、预培养时间、侵染时间和共培养时间五个方面对农杆菌介导的桑遗传转化体系进行优化,再构建MaCYP90A-pBI121质粒转入农杆菌诱导发根以验证优化体系的稳定性。结果表明,优化后的桑遗传转化条件为:采用OD_(600)为0.6的农杆菌LBA9402菌液侵染预培养2 d的无菌桑苗真叶10 min,共培养时间为2 d。在此优化条件下,毛状根诱导率可达到84.51%。同时利用该体系将重组质粒MaCYP90A-pBI121转化至桑叶中,经荧光定量PCR分析,阳性转基因毛状根中MaCYP90A基因表达量为空白对照的39.97倍。综上,本研究成功对已有桑遗传转化体系进行了优化,毛状根诱导率相比优化前(30.21%)提高了1.8倍,可为后续桑基因功能研究、次生代谢物合成途径解析以及分子育种提供技术支撑。 展开更多
关键词 桑 遗传转化体系 发根农杆菌 毛状根诱导 转基因
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发根农杆菌介导的水角遗传转化体系的建立
7
作者 周荟森 谭德冠 +4 位作者 王英 付莉莉 于颖 孙雪飘 张家明 《热带生物学报(中英文)》 2025年第5期755-764,共10页
水角(Hydrocera triflora)是重要的濒危水生植物,耐旱性差是导致其濒危的重要因素。本研究拟建立水角遗传转化体系,并对其进行遗传改良,以期减轻其濒危程度。首次建立并优化了发根农杆菌介导的水角遗传转化体系。在优化该转化体系研究中... 水角(Hydrocera triflora)是重要的濒危水生植物,耐旱性差是导致其濒危的重要因素。本研究拟建立水角遗传转化体系,并对其进行遗传改良,以期减轻其濒危程度。首次建立并优化了发根农杆菌介导的水角遗传转化体系。在优化该转化体系研究中,发现水培扦插转化法较优,菌株K599转化率最高,带顶芽插穗作侵染外植体转化效果较优。优化的转化体系转化率高达63.3%。构建了过表达海藻糖合成酶MeTPS6基因的载体并获得其转基因植株。3%(m/m)polyethylene glycol-6000(PEG-6000)溶液处理3 d,发现转基因植株生长正常,而对照叶片出现萎蔫。经检测转基因植株毛状根的海藻糖含量显著高于对照。这些结果表明过表达MeTPS6转基因水角的耐旱能力得到显著改善。本研究结果为水角的性状改良和基因功能验证提供基础,也为其他水生植物高效转化体系的建立提供技术借鉴。 展开更多
关键词 水角 发根农杆菌 遗传转化 转基因复合植株 耐旱
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农杆菌介导的稻瘟病菌遗传转化体系的建立及优化
8
作者 李爽 张淑梅 +3 位作者 田缘 潘钰 刘伟 闫更轩 《湖北农业科学》 2025年第3期182-189,共8页
以稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)为试验材料,通过PCR获得GFP基因,构建pBarg-GFP-BARAmp重组载体,使用农杆菌转化法获得能够稳定遗传的含GFP基因的稻瘟病菌菌株,采用单因素与响应面法优化转化条件。稻瘟病菌遗传转化体系的最佳转化条件:O... 以稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)为试验材料,通过PCR获得GFP基因,构建pBarg-GFP-BARAmp重组载体,使用农杆菌转化法获得能够稳定遗传的含GFP基因的稻瘟病菌菌株,采用单因素与响应面法优化转化条件。稻瘟病菌遗传转化体系的最佳转化条件:OD_(600 nm)为0.38(农杆菌菌液浓度)、共培养温度为28.2℃、共培养时间为2.12 d,转化效率为280.00×10~(-5)。PCR鉴定和荧光显微镜观察发现,转化的稻瘟病菌GFP基因能够正常表达,和野生型稻瘟病菌的致病性无显著差异。 展开更多
关键词 稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae) 农杆菌介导 遗传转化 GFP基因 建立 优化
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农杆菌介导的苎麻遗传转化体系优化研究
9
作者 何鹏亮 伍旭东 +3 位作者 朱宁静 蒋美艳 邢虎成 揭雨成 《现代农业科技》 2025年第7期150-155,共6页
为优化苎麻遗传转化体系,以中苎1号无菌苗的叶盘为外植体,研究了卡那霉素、头孢霉素、农杆菌的浓度以及共培养和侵染的时间对苎麻遗传转化的影响。结果表明:在愈伤诱导阶段,卡那霉素最佳浓度为50 mg/L;在生根阶段,卡那霉素最佳浓度为30 ... 为优化苎麻遗传转化体系,以中苎1号无菌苗的叶盘为外植体,研究了卡那霉素、头孢霉素、农杆菌的浓度以及共培养和侵染的时间对苎麻遗传转化的影响。结果表明:在愈伤诱导阶段,卡那霉素最佳浓度为50 mg/L;在生根阶段,卡那霉素最佳浓度为30 mg/L,头孢霉素最佳浓度为500 mg/L;农杆菌最佳浓度为OD_(600)=0.6,最佳侵染时间为10 min,最佳共培养时间为36 h。最终得到3株转化植株,根据PCR检测,证实Bt抗虫基因已经成功整合到1株苎麻中。综上所述,本研究优化了苎麻遗传转化体系,可以为今后利用基因工程技术对苎麻进行遗传改良提供参考。 展开更多
关键词 苎麻 外植体 叶盘 农杆菌侵染 BT抗虫基因 遗传转化
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农杆菌介导的水稻遗传转化的优化研究
10
作者 周晓佟 《北方水稻》 2025年第5期18-23,共6页
目的:对农杆菌介导的水稻遗传转化实施优化。方法:以籼稻品种9311成熟胚、明恢86以及粳稻品种日本晴为水稻遗传转化优化的研究材料。试验中使用的农杆菌菌株为LBA4404,采用的质粒为pCAMBIA1301A-At MYB44。配制多种溶液后,制备农杆菌感... 目的:对农杆菌介导的水稻遗传转化实施优化。方法:以籼稻品种9311成熟胚、明恢86以及粳稻品种日本晴为水稻遗传转化优化的研究材料。试验中使用的农杆菌菌株为LBA4404,采用的质粒为pCAMBIA1301A-At MYB44。配制多种溶液后,制备农杆菌感受态细胞。使用制备好的农杆菌感受态细胞将质粒pCAMBIA1301A-At MYB44导入农杆菌菌株LBA4404中。应用导入后的菌液对三种水稻实施侵染,实现其遗传转化。提取遗传转化后水稻植株的DNA分子并实施PCR检测。结果:优化后DNA提取量、DNA纯度、DNA完整性均更高。优化后对于籼稻品种的遗传转化效果更好。优化后PCR条带更加清晰,同时其出现非特异性条带的情况不明显PCR检测阳性率更高。结论:在研究中成功实现了对于农杆菌介导的水稻遗传转化的优化,具有重大现实意义。 展开更多
关键词 农杆菌 质粒 水稻遗传转化 DNA分子提取 PCR检测
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根癌农杆菌介导的紫花苜蓿遗传转化体系的优化 被引量：2
11
作者 王之杰 李明序 张万军 《草地学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1665-1671,共7页
为进一步提高根癌农杆菌介导的紫花苜蓿遗传转化效率,本试验以紫花苜蓿(Medicago sativa L.)品种‘中苜1号’为试验材料,通过筛选高效再生的植株,以筛选出的植株叶片为外植体,并通过调节培养基激素配比,在农杆菌侵染过程中添加谷氨酰胺... 为进一步提高根癌农杆菌介导的紫花苜蓿遗传转化效率,本试验以紫花苜蓿(Medicago sativa L.)品种‘中苜1号’为试验材料,通过筛选高效再生的植株,以筛选出的植株叶片为外植体,并通过调节培养基激素配比,在农杆菌侵染过程中添加谷氨酰胺、进行冷处理等措施优化苜蓿由农杆菌介导的遗传转化体系。试验结果表明:转化过程中以嫩叶作为外植体,菌液和重悬液中添加150μmol·L^(-1)乙酰丁香酮,侵染过程中使用300μmol·L^(-1)的谷氨酰胺将瞬时转化效率从32%提高至92%,转化效率提高到31%。研究紫花苜蓿的遗传转化体系可为紫花苜蓿高效遗传改良及基因功能研究提供了技术支持。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 根癌农杆菌 遗传转化 体系优化
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糜子高频胚胎发生品种遗传转化体系的建立
12
作者 张欢欢 穆晓娅 +5 位作者 周静宜 吕高培 肖楠 李敏 郝曜山 吴慎杰 《生物技术通报》 北大核心 2025年第10期164-174,共11页
【目的】以具有高频胚胎发生能力的糜子品种为受体,建立高效的糜子遗传转化体系,为糜子分子育种和基因功能研究提供技术支撑。【方法】以最适合糜子诱导胚性愈伤组织的SI培养基,从39份糜子品种中筛选具有高频胚胎发生能力的材料,比较成... 【目的】以具有高频胚胎发生能力的糜子品种为受体,建立高效的糜子遗传转化体系,为糜子分子育种和基因功能研究提供技术支撑。【方法】以最适合糜子诱导胚性愈伤组织的SI培养基,从39份糜子品种中筛选具有高频胚胎发生能力的材料,比较成熟胚的茎尖、中胚轴、根的诱导胚性愈伤组织的能力差异;以最优材料为受体,分析比较不同菌株、愈伤处理方式、乙酰丁香酮(AS)浓度、菌液浓度、共培养时间等条件对农杆菌侵染效率的影响,构建基于nptII选择标记的遗传转化体系。【结果】筛选出适合糜子诱导胚性愈伤组织的SI培养基,并从39份糜子品种中,鉴定出3份高频胚胎发生品种(系),其中赤黍2号胚性愈伤组织诱导率最高(77.7%)。以赤黍2号成熟胚诱导的胚性愈伤组织为受体,优化了农杆菌侵染条件,明确了LBA4404菌株、OD600为0.2的菌液浓度、100μmol/L的乙酰丁香酮浓度、42℃热激处理5 min及48 h共培养时间为农杆菌侵染的最佳转化条件。建立了nptII为选择标记基因的遗传转化体系,转化效率达到4.94%。【结论】筛选出具有高频胚胎发生能力的糜子品种赤黍2号,并建立了农杆菌介导的糜子遗传转化体系。 展开更多
关键词 糜子 赤黍2号 胚性愈伤组织 农杆菌 遗传转化 胚胎发生 茎尖 再生
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农杆菌介导的黄瓜遗传转化体系优化研究 被引量：2
13
作者 陈梅 陈露倩 +2 位作者 陈思 杜长霞 樊怀福 《四川农业大学学报》 CSCD 北大核心 2024年第3期540-545,571,共7页
【目的】筛选适用于农杆菌介导的黄瓜遗传转化体系,为通过生物技术进行黄瓜新品种培育奠定基础。【方法】以华北型黄瓜品种‘9930’子叶为试材,探讨卡那霉素浓度(kanamycin, Kan)、预培养时间、预培养基添加乙酰丁香酮(acetosyringone, ... 【目的】筛选适用于农杆菌介导的黄瓜遗传转化体系,为通过生物技术进行黄瓜新品种培育奠定基础。【方法】以华北型黄瓜品种‘9930’子叶为试材,探讨卡那霉素浓度(kanamycin, Kan)、预培养时间、预培养基添加乙酰丁香酮(acetosyringone, AS)、分化培养基pH及生根培养基中添加不同外源物质对黄瓜遗传转化的影响。【结果】不定芽分化、生根阶段的Kan临界浓度为150 mg/L;不进行预培养的黄瓜不定芽诱导率最高,为77.17%;当分化培养基pH为5.6时不定芽诱导率最高,为75.26%;外植体在添加0.5 mg/L的IBA生根培养基上生根率达100%,根长也显著增加。【结论】在以黄瓜品种‘9930’子叶节为外植体的遗传转化体系中,150 mg/L Kan可作为不定芽分化和生根阶段的筛选选择压;不进行预培养更有利于其抗性芽诱导;适合不定芽诱导的分化培养基pH为5.6;0.5 mg/L的IBA为诱导外植体生根最佳激素浓度。 展开更多
关键词 根癌农杆菌 黄瓜 遗传转化
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根癌农杆菌介导彩色马蹄莲遗传转化体系的建立及优化 被引量：1
14
作者 李菲 曹永琼 +3 位作者 王纲 郭彦兵 李紫薇 吴红芝 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1692-1699,共8页
【目的】建立及优化根癌农杆菌介导的彩色马蹄莲(Zantedeschia hybrida)遗传转化体系,为提高彩色马蹄莲遗传转化效率及培育彩色马蹄莲抗性品种提供理论参考依据。【方法】将不同外植体(茎基、叶、不定芽)和不同浓度噻苯隆(TDZ)(0.001、0... 【目的】建立及优化根癌农杆菌介导的彩色马蹄莲(Zantedeschia hybrida)遗传转化体系,为提高彩色马蹄莲遗传转化效率及培育彩色马蹄莲抗性品种提供理论参考依据。【方法】将不同外植体(茎基、叶、不定芽)和不同浓度噻苯隆(TDZ)(0.001、0.002和0.005 g/L)进行正交试验筛选外植体和丛生芽增殖培养基;液氮冻融法将pCAM BIA2301和pBI121质粒转入农杆菌LBA4404感受态细胞。以β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因作为农杆菌介导转化测定的报告基因,对彩色马蹄莲的丛生芽进行遗传转化,阳性苗经PCR扩增验证转化结果。通过不同硫酸卡那霉素(Kan)浓度(50、100和150 mg/L)、侵染时间(25、30和40 min)及共培养时间(2和3 d)3因素正交试验筛选最佳转化条件。【结果】外植体为不定芽的丛生芽诱导率极显著高于茎基和叶(P<0.01),当不定芽为外植体、TDZ浓度为0.002 mg/L时,丛生芽增殖倍数(5.12倍)显著高于0.001和0.005 mg/L TDZ处理(P<0.05),筛选出M6培养基+0.002 mg/L TDZ+30 g/L蔗糖+6.25 g/L琼脂为丛生芽增殖培养基;影响阳性频率因素排序为:侵染时间>Kan浓度>共培养时间。当Kan浓度为50 mg/L、侵染时间25 min及共培养时间为3 d为最优侵染条件,此时,GUS+丛生芽出芽频率和PCR阳性频率最高,分别为54.0%和15.27%。【结论】成功优化彩色马蹄莲遗传转化体系,最佳外植体为不定芽,转化体系最佳组合为Kan浓度为50 mg/L、侵染时间为25 min及共培养时间为3 d。 展开更多
关键词 彩色马蹄莲 根癌农杆菌 遗传转化 优化
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农杆菌介导的芋遗传转化体系的构建 被引量：1
15
作者 桂艳玲 张玉凤 +4 位作者 何逸宁 王延芝 朱强龙 黄英金 肖遥 《江西农业大学学报》 CSCD 北大核心 2024年第6期1445-1455,共11页
【目的】芋是典型的无性繁殖作物,遗传背景狭窄,突破性新品种选育困难。构建芋稳定遗传转化体系,可实现其性状的快速、精准改良,推动芋由传统育种向生物育种转变。【方法】以4份我国生产上种植面积广泛的多子芋品种为试材,首先剥取茎尖... 【目的】芋是典型的无性繁殖作物,遗传背景狭窄,突破性新品种选育困难。构建芋稳定遗传转化体系,可实现其性状的快速、精准改良,推动芋由传统育种向生物育种转变。【方法】以4份我国生产上种植面积广泛的多子芋品种为试材,首先剥取茎尖,在茎尖生长培养基上培养30 d,然后转移至愈伤诱导培养基,筛选出容易诱导出愈伤的品种,进一步优化激素配比,提高愈伤诱导率、增殖率、出芽率;在此基础上,通过抽真空处理和黑暗处理分析其对转化率的影响。【结果】筛选出‘赣芋2号’容易诱导出胚性愈伤组织,诱导培养基和增殖培养基为MS+蔗糖30 g/L+琼脂粉6.5 g/L+NAA 0.1 mg/L+TDZ 2.0 mg/L,胚性愈伤诱导率为66.7%,增殖系数为4.6;分化培养基和成苗培养基为MS+蔗糖30 g/L+琼脂粉6.5 g/L+NAA 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L,出芽率为72.2%;在-0.1 MPa真空下处理15 min及黑暗条件下培养7~15 d,芋蔗糖转运蛋白CeSUC3基因阳性率达到65.2%,阳性转化率达到5.0%。【结论】通过品种筛选,培养基优化、侵染条件和培养条件的改变,建立了一套基于农杆菌介导的稳定的多子芋遗传转化体系,为芋的生物育种提供依据。 展开更多
关键词 芋 遗传转化体系 农杆菌介导 生物育种
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花生小叶外植体植株再生及农杆菌介导的基因遗传转化 被引量：48
16
作者 方小平 许泽永 +4 位作者 张宗义 晏立英 陈坤荣 贾士荣 张长青 《中国油料》 CSCD 北大核心 1996年第4期52-56,共5页
鄂花四号、中花四号和豫花一号萌动４ｄ的小叶作外植体，通过器官再生在ＭＳ培养基加３ｍｇ／ＬＢＡＰ和１ｍｇ／ＬＮＡＡ上诱导芽分化，转至ＭＳ加５ｍｇ／ＬＢＡＰ上诱导芽伸长，再生植株。芽诱导率为８６％～１００％，每个外植体平... 鄂花四号、中花四号和豫花一号萌动４ｄ的小叶作外植体，通过器官再生在ＭＳ培养基加３ｍｇ／ＬＢＡＰ和１ｍｇ／ＬＮＡＡ上诱导芽分化，转至ＭＳ加５ｍｇ／ＬＢＡＰ上诱导芽伸长，再生植株。芽诱导率为８６％～１００％，每个外植体平均再生５个植株。在培养基中加入１ｍｇ／ＬＡｇＮＯ３和５００ｍｇ／Ｌ羧苄青霉素能有效抑制愈伤褐化和死亡，并能提高植株再生率。萌动４ｄ的小叶与农杆菌ＡＧＬ１分别共培养２ｄ，通过在再生培养基中加卡那霉素筛选，获得转基因再生植株，转基因植株生根后，移栽网室生长，并已开花结荚。外源基因的表达通过卡那霉素抗性和Ｇｕｓ活性组织化学检测得到证实。 展开更多
关键词 花生 小叶 农杆菌 遗传转化 植株再生
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农杆菌介导白三叶草高效遗传转化和转基因植株再生 被引量：23
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作者 谷俊涛 赵红梅 +1 位作者 刘祝玲 肖凯 《草业学报》 CSCD 2007年第2期84-89,共6页
利用子叶下胚轴为外植体，通过农杆菌Ti质粒介导途径，建立了白三叶草高效遗传转化及转基因植株高频率再生体系。PCR检测及Southern印迹鉴定结果表明，外源T—DNA片段已整合到转基因植株的基因组中，且多以1～2个少数拷贝存在。Northem... 利用子叶下胚轴为外植体，通过农杆菌Ti质粒介导途径，建立了白三叶草高效遗传转化及转基因植株高频率再生体系。PCR检测及Southern印迹鉴定结果表明，外源T—DNA片段已整合到转基因植株的基因组中，且多以1～2个少数拷贝存在。Northem印迹结果和对报告基因GusA编码蛋白的活性检测结果表明，目的基因在部分转基因植株中高水平表达。适宜条件下外植体遗传转化后的植株再生比例达58．23％～62．12％。与对照相比，转基因植株在外部形态上没有发生改变。 展开更多
关键词 三叶草 农杆菌 遗传转化 植株再生
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农杆菌介导抗虫CpTI基因的花生遗传转化及转基因植株的再生 被引量：23
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作者 徐平丽 单雷 +4 位作者 柳展基 王芳 张斌 毕玉平 张传坤 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期5-8,共4页
通过农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)Ti质粒介导途径,将抗虫CpTI基因转入花生,经过诱导分化获得转基因再生植株。PCR检测及Southern杂交鉴定结果表明,外源CpTI基因已整合到大部分再生花生植株的基因组中。通过抗虫性检测试验,转基因... 通过农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)Ti质粒介导途径,将抗虫CpTI基因转入花生,经过诱导分化获得转基因再生植株。PCR检测及Southern杂交鉴定结果表明,外源CpTI基因已整合到大部分再生花生植株的基因组中。通过抗虫性检测试验,转基因花生具有一定的抗虫性。 展开更多
关键词 花生 遗传转化 农杆菌介导 抗虫CpTI基因 转基因植株 植株再生 抗虫性 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因
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根癌农杆菌介导的甘薯遗传转化及转基因植株的再生 被引量：28
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作者 高峰 龚一富 +1 位作者 林忠平 王小佳 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期751-756,共6页
以甘薯优良品种“新大紫”的茎尖培养再生植株为试材 ,经根癌农杆菌介导将甘薯块根贮藏蛋白启动子 (Sporamin promoter)调控下的 10 k D玉米醇溶蛋白基因导入到“新大紫”中 ,并获得了转化植株。甘薯品种“新大紫”再生植株的茎切段 ,... 以甘薯优良品种“新大紫”的茎尖培养再生植株为试材 ,经根癌农杆菌介导将甘薯块根贮藏蛋白启动子 (Sporamin promoter)调控下的 10 k D玉米醇溶蛋白基因导入到“新大紫”中 ,并获得了转化植株。甘薯品种“新大紫”再生植株的茎切段 ,与携带有表达载体质粒 p SP10 Z的根癌农杆菌菌株 LBA4 4 0 4共培养后 ,在含 75 mg/ L 卡那霉素 (Kan)的筛选培养基上可产生抗性芽 ,最高频率达 6.2 %。其中 ,32 .1%的抗性芽可在含 10 0 mg/ L Kan的培养基上生根 ,从而形成转化植株。PCR和 PCR-Southern检测证实 ,10 k D玉米醇溶蛋白基因已导入并整合到甘薯品种“新大紫”的基因组中。 展开更多
关键词 玉米醇溶蛋白基因 根癌农杆菌 转化 甘薯 转基因植株 再生
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发根农杆菌介导的茶树发根高频诱导与遗传转化 被引量：31
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作者 张广辉 梁月荣 陆建良 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期1-10,共10页
以两种野生型发根农杆菌菌株、三种共培养培养基和六种外植体为试材，建立了茶树发根高频诱导体系，最高发根诱导频率达30％以上。最佳发根诱导体系为：OD600为0．5-0．8的发根农杆菌菌液侵染已培养60-70d苗龄无菌苗茎段10-50min，在添... 以两种野生型发根农杆菌菌株、三种共培养培养基和六种外植体为试材，建立了茶树发根高频诱导体系，最高发根诱导频率达30％以上。最佳发根诱导体系为：OD600为0．5-0．8的发根农杆菌菌液侵染已培养60-70d苗龄无菌苗茎段10-50min，在添加100mmol／L乙酰丁香酮的YMB固体培养基上共培养2d，在含500mg／L头胞噻肟钠的MS培养基上诱导发根。发根在不含激素的LG0培养基上生长迅速，产生大量侧枝和根毛。PCR证实，发根农杆菌Ri质粒T．DNA的rolA、rolB和roIC基因已经插入到发根基因组DNA中。应用此发根诱导体系，以含携带Bt基因的双元载体质粒pCAMBIA2301的发根农杆菌15834，侵染茶树外植体诱导出发根，PCR和GUS组织化学染色证实外源基因已经插入到基因组DNA中并获得表达。 展开更多
关键词 茶树 发根农杆菌 发根培养 遗传转化
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