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基于CaCC的TRPV4调节剂高通量筛选细胞模型的建立
被引量：
1
1
作者
肖云萍
解宇浩
+3 位作者
张嘉琪
洪啟元
郝峰
王国庆
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第10期1032-1039,共8页
目的构建基于钙激活氯离子通道(CaCC)的瞬时受体电位香草酸亚型4(TRPV4)调节剂的高通量筛选细胞模型。方法采用RT-PCR检测Fischer大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞中内源性表达的TRPV4,所得PCR产物切胶回收后测序;采用Western blotting检测...
目的构建基于钙激活氯离子通道(CaCC)的瞬时受体电位香草酸亚型4(TRPV4)调节剂的高通量筛选细胞模型。方法采用RT-PCR检测Fischer大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞中内源性表达的TRPV4,所得PCR产物切胶回收后测序;采用Western blotting检测FRT细胞中TRPV4蛋白的表达情况。应用脂质体转染法构建共表达钙激活氯离子通道蛋白1(ANO1)和YFP-H148Q/I152L的FRT细胞模型,倒置荧光显微镜下观察ANO1和YFP-H148Q/I152L在细胞中的表达情况,应用荧光淬灭动力学实验测定细胞模型的有效性。加入TRPV4激活剂和抑制剂,应用荧光淬灭动力学实验检测模型能否筛选TRPV4调节剂;加入TRPV4激活剂,应用Fura-2荧光探针法检测细胞内的Ca2+浓度;通过Z'因子评估细胞模型是否适用于高通量筛选。结果RT-PCR和Western blotting检测结果显示,FRT细胞内源性表达TRPV4。倒置荧光显微镜下清晰可见ANO1表达在FRT细胞膜上,YFP-H148Q/I152L表达在FRT细胞质中,即成功构建了共表达ANO1和YFP-H148Q/I152L的FRT细胞模型。荧光淬灭动力学实验结果显示,该模型可以筛选TRPV4调节剂,斜率(Slope)值与TRPV4调节剂的浓度呈剂量依赖关系;该模型可敏感检测细胞内Ca2+的浓度变化,通过Slope值可反映细胞内Ca2+浓度的高低;Z'因子为0.728,表明该模型可高通量筛选TRPV4调节剂。结论成功构建了一种可以敏感高效筛选TRPV4调节剂的高通量筛选细胞模型。
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关键词
瞬时受体电位香草酸亚型4
钙激活氯离子通道
YFP-H148Q/I152L
高通量筛选细胞模型
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职称材料
桑叶中对PPARγ有激活作用的组分分离和活性鉴定
被引量：
1
2
作者
宋如鋆
耿明星
+2 位作者
吕正兵
钱坤
舒建洪
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第3期511-517,共7页
过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPARγ)是调节脂肪细胞基因表达和分化的重要因子,也称作胰岛素增敏剂受体,一些脂肪酸对PPARγ有激活作用。桑叶中含有多种脂肪酸,以其为材料,利用构建的COS-7细胞高通量筛选模型筛选具有PPARγ配体活性...
过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPARγ)是调节脂肪细胞基因表达和分化的重要因子,也称作胰岛素增敏剂受体,一些脂肪酸对PPARγ有激活作用。桑叶中含有多种脂肪酸,以其为材料,利用构建的COS-7细胞高通量筛选模型筛选具有PPARγ配体活性的组分及单体。桑叶粉通过正己烷提取和石油醚萃取后,石油醚萃取组分(Fr.P)对PPARγ的激活倍数可达到阴性对照DMSO的3.34倍。经气相色谱-质谱(GC-MS)分析,从桑叶正己烷提取物(Fr.H)和Fr.P组分中共获得19种脂肪酸,其中Fr.H中的亚麻酸质量分数为1.91%,亚油酸为0.94%,十四酸为0.11%。高通量细胞筛选模型分析显示,与阴性对照DMSO比较,100μmol/L十四酸对PPARγ的激活倍数为1.51,50μmol/L十五酸对PPARγ的激活倍数为2.12,150μmol/L亚麻酸对PPARγ的激活倍数为2.48,100μmol/L亚油酸对PPARγ的激活倍数为2.21,而其他脂肪酸均无PPARγ配体活性。通过十四酸、亚麻酸和亚油酸的协同PPARγ激活效应分析,推测桑叶中可能含有非脂肪酸的PPARγ激动剂成分。研究结果提示有望从桑叶中寻找到新的天然胰岛素增敏剂。
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关键词
过氧化物酶体增殖物激活受体-Γ
COS-7
细胞
高通量
筛选
模型
桑叶
脂肪酸
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职称材料
题名
基于CaCC的TRPV4调节剂高通量筛选细胞模型的建立
被引量：
1
1
作者
肖云萍
解宇浩
张嘉琪
洪啟元
郝峰
王国庆
机构
吉林医药学院检验学院
北华大学医学技术学院
吉林医药学院公共卫生学院
出处
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第10期1032-1039,共8页
基金
国家自然科学基金(81601234)
吉林省教育厅基金(JJKH20170418KJ,JJKH20191056KJ)
+1 种基金
吉林省卫生与健康技术创新项目(2018J113)
吉林省大学生创新创业训练计划(201913706071)。
文摘
目的构建基于钙激活氯离子通道(CaCC)的瞬时受体电位香草酸亚型4(TRPV4)调节剂的高通量筛选细胞模型。方法采用RT-PCR检测Fischer大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞中内源性表达的TRPV4,所得PCR产物切胶回收后测序;采用Western blotting检测FRT细胞中TRPV4蛋白的表达情况。应用脂质体转染法构建共表达钙激活氯离子通道蛋白1(ANO1)和YFP-H148Q/I152L的FRT细胞模型,倒置荧光显微镜下观察ANO1和YFP-H148Q/I152L在细胞中的表达情况,应用荧光淬灭动力学实验测定细胞模型的有效性。加入TRPV4激活剂和抑制剂,应用荧光淬灭动力学实验检测模型能否筛选TRPV4调节剂;加入TRPV4激活剂,应用Fura-2荧光探针法检测细胞内的Ca2+浓度;通过Z'因子评估细胞模型是否适用于高通量筛选。结果RT-PCR和Western blotting检测结果显示,FRT细胞内源性表达TRPV4。倒置荧光显微镜下清晰可见ANO1表达在FRT细胞膜上,YFP-H148Q/I152L表达在FRT细胞质中,即成功构建了共表达ANO1和YFP-H148Q/I152L的FRT细胞模型。荧光淬灭动力学实验结果显示,该模型可以筛选TRPV4调节剂,斜率(Slope)值与TRPV4调节剂的浓度呈剂量依赖关系;该模型可敏感检测细胞内Ca2+的浓度变化,通过Slope值可反映细胞内Ca2+浓度的高低;Z'因子为0.728,表明该模型可高通量筛选TRPV4调节剂。结论成功构建了一种可以敏感高效筛选TRPV4调节剂的高通量筛选细胞模型。
关键词
瞬时受体电位香草酸亚型4
钙激活氯离子通道
YFP-H148Q/I152L
高通量筛选细胞模型
Keywords
transient receptor potential vanilloid 4
calcium-activated chloride channels
YFP-H148Q/I152L
highthroughput screening cell model
分类号
R915 [医药卫生—微生物与生化药学]
R311 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
桑叶中对PPARγ有激活作用的组分分离和活性鉴定
被引量：
1
2
作者
宋如鋆
耿明星
吕正兵
钱坤
舒建洪
机构
浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所
湖州师范学院生命科学学院
出处
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第3期511-517,共7页
基金
"重大新药创制"科技重大专项(No.2012ZX09102301)
国家高技术研究发展计划"863"项目(No.2011AA100603)
文摘
过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPARγ)是调节脂肪细胞基因表达和分化的重要因子,也称作胰岛素增敏剂受体,一些脂肪酸对PPARγ有激活作用。桑叶中含有多种脂肪酸,以其为材料,利用构建的COS-7细胞高通量筛选模型筛选具有PPARγ配体活性的组分及单体。桑叶粉通过正己烷提取和石油醚萃取后,石油醚萃取组分(Fr.P)对PPARγ的激活倍数可达到阴性对照DMSO的3.34倍。经气相色谱-质谱(GC-MS)分析,从桑叶正己烷提取物(Fr.H)和Fr.P组分中共获得19种脂肪酸,其中Fr.H中的亚麻酸质量分数为1.91%,亚油酸为0.94%,十四酸为0.11%。高通量细胞筛选模型分析显示,与阴性对照DMSO比较,100μmol/L十四酸对PPARγ的激活倍数为1.51,50μmol/L十五酸对PPARγ的激活倍数为2.12,150μmol/L亚麻酸对PPARγ的激活倍数为2.48,100μmol/L亚油酸对PPARγ的激活倍数为2.21,而其他脂肪酸均无PPARγ配体活性。通过十四酸、亚麻酸和亚油酸的协同PPARγ激活效应分析,推测桑叶中可能含有非脂肪酸的PPARγ激动剂成分。研究结果提示有望从桑叶中寻找到新的天然胰岛素增敏剂。
关键词
过氧化物酶体增殖物激活受体-Γ
COS-7
细胞
高通量
筛选
模型
桑叶
脂肪酸
Keywords
Peroxisome proliferators-activated receptor ,γ （PPARγ）
COS-7 cellular high-throughput screening model
Mulberry leaf
Fatty acid
分类号
Q946 [生物学—植物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于CaCC的TRPV4调节剂高通量筛选细胞模型的建立
肖云萍
解宇浩
张嘉琪
洪啟元
郝峰
王国庆
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
桑叶中对PPARγ有激活作用的组分分离和活性鉴定
宋如鋆
耿明星
吕正兵
钱坤
舒建洪
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2015
1
在线阅读
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职称材料
已选择
0
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