丙型肝炎病毒蛋白酶抑制剂高通量筛选模型的建立及应用 被引量：4

1

作者 李健蕊 武燕彬 +3 位作者 司书毅 陈鸿珊 蒋建东 彭宗根 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期98-101,共4页

目的应用荧光共振能量转移(FRET)法检测丙型肝炎病毒(HCV)丝氨酸蛋白水解酶(NS3-4A)活性,建立HCV蛋白酶抑制剂筛选模型。方法将质粒pMAL-c2/NS3-4A转化到大肠杆菌K12TB1中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,亲和层析柱纯化得... 目的应用荧光共振能量转移(FRET)法检测丙型肝炎病毒(HCV)丝氨酸蛋白水解酶(NS3-4A)活性,建立HCV蛋白酶抑制剂筛选模型。方法将质粒pMAL-c2/NS3-4A转化到大肠杆菌K12TB1中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,亲和层析柱纯化得到麦芽糖结合的NS3-4A融合蛋白,用FRET法测定蛋白水解酶活性,建立特异性蛋白酶抑制剂筛选模型,优化反应体系,评价模型的可靠性。结果建立了HCV蛋白酶抑制剂高通量筛选模型,经优化确定了酶及底物用量。在模型可靠性评价中,Z因子高达0.80,变异系数为1.91%。蛋白酶的Km值为4.74μmol/L,测得已知HCV蛋白酶抑制剂BILN 2061的Ki值为0.30 nmol/L。结论建立的HCV丝氨酸蛋白酶抑制剂FRET法筛选模型稳定可靠,适用于高通量筛选。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 丝氨酸蛋白水解酶 高通量筛选模型 荧光共振能量转移

在线阅读 下载PDF 职称材料

人二型大麻受体激动剂高通量筛选模型的建立 被引量：4

2

作者 刘媛 董志 +3 位作者 肖晓秋 唐红 王乐乐 程玉洁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期194-196,共3页

目的:基于二型大麻受体(CB2)的信号传递通路,建立体外高通量筛选CB2受体激动剂的药物模型。方法:将目的基因质粒pIRES2-EGFP-CB2、报告基因质粒pGL4.29[luc2P/CRE/Hygro]、内参质粒PRL-TK共转染CHO细胞,通过检测双荧光素酶报告基因的表... 目的:基于二型大麻受体(CB2)的信号传递通路,建立体外高通量筛选CB2受体激动剂的药物模型。方法:将目的基因质粒pIRES2-EGFP-CB2、报告基因质粒pGL4.29[luc2P/CRE/Hygro]、内参质粒PRL-TK共转染CHO细胞,通过检测双荧光素酶报告基因的表达水平变化来筛选人CB2受体的激动剂。并对加入激动剂的浓度和作用时间进行优化及考察模型的稳定性。结果:给予10μmol/L JWH-015 6 h后能取得最大相对诱导率。成功建立CB2受体激动剂的高通量筛选模型,筛选模型Z'因子为0.81,表现为良好的稳定性。结论:成功地建立了CB2受体激动剂的筛选模型,为从中药中高通量筛选有效物质奠定了良好的基础。 展开更多

关键词 CB2受体 报告基因 高通量筛选模型

在线阅读 下载PDF 职称材料

以大肠埃希氏菌肽脱甲酰基酶为靶点的高通量筛选模型的建立(英文) 被引量：4

3

作者 唐先兵 司书毅 张月琴 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期621-626,共6页

本文用 PCR法从大肠埃希氏菌 K-12中克隆出肽脱甲酰基酶 (peptide deformylase,PDF)基因 ,通过测序确证与文献报道的 pdf基因序列完全一致。将 p df连接到原核蛋白表达载体 p ET-3 0 -a(+ )上 ,并转化到大肠埃希氏菌 BL 2 1(DE3 )菌株中... 本文用 PCR法从大肠埃希氏菌 K-12中克隆出肽脱甲酰基酶 (peptide deformylase,PDF)基因 ,通过测序确证与文献报道的 pdf基因序列完全一致。将 p df连接到原核蛋白表达载体 p ET-3 0 -a(+ )上 ,并转化到大肠埃希氏菌 BL 2 1(DE3 )菌株中 ,IPTG诱导表达。过量表达的 PDF酶用 Q Sepharose HP离子交换柱和 Superdex 75纯化得到高纯度 Ni-PDF。应用荧光测试仪Polar Fluostar检测 PDF对底物 For-Met-Ala-Ser的水解活性 ,PDF酶的已知抑制剂放线酰胺素 (actinonin)为阳性对照 ,通过优化酶反应条件 ,建立了以 展开更多

关键词 肽脱甲酰基酶 高通量筛选模型 放线酰胺素

在线阅读 下载PDF 职称材料

微生物来源的α-葡萄糖苷酶抑制剂高通量筛选模型的建立和初步应用 被引量：2

4

作者 于彩云 赵莉莉 +1 位作者 张晶晶 魏涛 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期916-921,共6页

本研究用昆明种小鼠十二指肠上段提取的α-葡萄糖苷酶,以4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷为反应底物,建立α-葡萄糖苷酶抑制剂高通量筛选模型。用该模型对1276株放线菌和132株细菌等共计2224个发酵液粗提物样品进行筛选。初筛得到抑制率超过... 本研究用昆明种小鼠十二指肠上段提取的α-葡萄糖苷酶,以4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷为反应底物,建立α-葡萄糖苷酶抑制剂高通量筛选模型。用该模型对1276株放线菌和132株细菌等共计2224个发酵液粗提物样品进行筛选。初筛得到抑制率超过50%的阳性样品23个,初筛阳性率为1.03%。将阳性菌株再次进行发酵提取,得到新发酵液的阳性样品数为17,复筛阳性率为0.74%。其中细菌3株,放线菌13株。3个阳性样品经α-葡萄糖苷酶验证后的抑制率均在75%以上。本研究建立的α-糖苷酶抑制剂高通量筛选模型具有很强的实用价值,可用于新型糖尿病药物的开发。 展开更多

关键词 Α-葡萄糖苷酶抑制剂 高通量筛选模型 微生物发酵液粗提物 糖尿病

在线阅读 下载PDF 职称材料

产脂肪酶微生物高通量筛选模型的初步研究

5

作者 郑建永 潘虹 汪钊 《浙江工业大学学报》 CAS 2012年第1期39-41,共3页

利用荧光检测技术以外消旋帕罗西汀中间体为底物,乙烯乙酸酯为酰基供体,建立脂肪酶酯化活性的高通量筛选模型,以筛选获得具有较高酯化活性的微生物.实验中荧光激发波长为485nm,荧光吸收波长为538nm,建立了筛选模型的工作曲线Y=10 685X+1... 利用荧光检测技术以外消旋帕罗西汀中间体为底物,乙烯乙酸酯为酰基供体,建立脂肪酶酯化活性的高通量筛选模型,以筛选获得具有较高酯化活性的微生物.实验中荧光激发波长为485nm,荧光吸收波长为538nm,建立了筛选模型的工作曲线Y=10 685X+176.15,具有良好的线性关系,相关系数R2=0.997 2. 展开更多

关键词 脂肪酶 高通量筛选模型 帕罗西汀中间体

在线阅读 下载PDF 职称材料

作用于gp41的HIV融合抑制剂高通量筛选方法的研究 被引量：9

6

作者 刘叔文 姜世勃 +5 位作者 刘北一 吴志华 吕琳 张嘉杰 富宁 吴曙光 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期507-511,共5页

目的　对作用于gp4 1的HIV融合抑制剂筛选方法进行研究和改进 ,使其成为更加简便的高通量药物筛选模型。方法　采用夹心ELISA方法 ,检测HIVgp4 1六股α 螺旋束的形成。结果　以特异性识别HIVgp4 1六股α 螺旋束的单克隆和多克隆抗体为... 目的　对作用于gp4 1的HIV融合抑制剂筛选方法进行研究和改进 ,使其成为更加简便的高通量药物筛选模型。方法　采用夹心ELISA方法 ,检测HIVgp4 1六股α 螺旋束的形成。结果　以特异性识别HIVgp4 1六股α 螺旋束的单克隆和多克隆抗体为基础建立的改良夹心ELISA方法 ,特异性好 ,准确性高 ,更为简便和经济 ,能稳定有效地检测样品对 gp4 1六股α 螺旋束形成的抑制作用。 结论　本研究建立的改良方法可作为高通量药物筛选方法 ,用于从中草药库、噬菌体肽库和微生物发酵液等复杂组分样品中筛选作用于 gp4 1的HIV融合抑制剂 。 展开更多

关键词 HIV GP41 高通量筛选模型 HIV融合抑制剂 抗HIV药物 夹心ELISA方法 艾滋病

在线阅读 下载PDF 职称材料

基于CaCC的TRPV4调节剂高通量筛选细胞模型的建立 被引量：1

7

作者 肖云萍 解宇浩 +3 位作者 张嘉琪 洪啟元 郝峰 王国庆 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1032-1039,共8页

目的构建基于钙激活氯离子通道(CaCC)的瞬时受体电位香草酸亚型4(TRPV4)调节剂的高通量筛选细胞模型。方法采用RT-PCR检测Fischer大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞中内源性表达的TRPV4,所得PCR产物切胶回收后测序;采用Western blotting检测... 目的构建基于钙激活氯离子通道(CaCC)的瞬时受体电位香草酸亚型4(TRPV4)调节剂的高通量筛选细胞模型。方法采用RT-PCR检测Fischer大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞中内源性表达的TRPV4,所得PCR产物切胶回收后测序;采用Western blotting检测FRT细胞中TRPV4蛋白的表达情况。应用脂质体转染法构建共表达钙激活氯离子通道蛋白1(ANO1)和YFP-H148Q/I152L的FRT细胞模型,倒置荧光显微镜下观察ANO1和YFP-H148Q/I152L在细胞中的表达情况,应用荧光淬灭动力学实验测定细胞模型的有效性。加入TRPV4激活剂和抑制剂,应用荧光淬灭动力学实验检测模型能否筛选TRPV4调节剂;加入TRPV4激活剂,应用Fura-2荧光探针法检测细胞内的Ca2+浓度;通过Z'因子评估细胞模型是否适用于高通量筛选。结果RT-PCR和Western blotting检测结果显示,FRT细胞内源性表达TRPV4。倒置荧光显微镜下清晰可见ANO1表达在FRT细胞膜上,YFP-H148Q/I152L表达在FRT细胞质中,即成功构建了共表达ANO1和YFP-H148Q/I152L的FRT细胞模型。荧光淬灭动力学实验结果显示,该模型可以筛选TRPV4调节剂,斜率(Slope)值与TRPV4调节剂的浓度呈剂量依赖关系;该模型可敏感检测细胞内Ca2+的浓度变化,通过Slope值可反映细胞内Ca2+浓度的高低;Z'因子为0.728,表明该模型可高通量筛选TRPV4调节剂。结论成功构建了一种可以敏感高效筛选TRPV4调节剂的高通量筛选细胞模型。 展开更多

关键词 瞬时受体电位香草酸亚型4 钙激活氯离子通道 YFP-H148Q/I152L 高通量筛选细胞模型

在线阅读 下载PDF 职称材料

国家新药高通量筛选体系建成

8

《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期116-116,共1页

关键词 国家新药高通量筛选体系建成 高通量分子筛选模型 筛选服务 基质金属蛋白酶系列 甲硫氨酰氨肽酶系列

在线阅读 下载PDF 职称材料

白细胞介素1受体拮抗剂筛选模型研究 被引量：1

9

作者 李全文 边昕 +1 位作者 张洋 李元 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期330-332,共3页

以链霉菌表达的重组 hs IL- 1R 为靶位 ,建立了基于受体配基竞争性结合为原理、白细胞介素 1受体拮抗剂筛选模型 ,对 5 0 0株微生物发酵产物进行了筛选 ,复筛阳性率为 4%～ 5 % ,该模型具有新颖性和实用性。

关键词 重组白细胞介素1受体 拮抗剂 高通量筛选模型

在线阅读 下载PDF 职称材料

流感病毒RNA聚合酶PA亚基:潜在抗流感药物靶点 被引量：7

10

作者 连雯雯 刘艾林 杜冠华 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期297-302,共6页

流感是世界范围内的严重传染性疾病,目前抗流感药物面临的主要问题是病毒耐药性和对高致病性流感病毒的效价低。流感病毒RNA聚合酶是病毒在宿主细胞内完成复制和转录过程的关键性酶,其中PA亚基通过内切酶活性为流感病毒的转录过程提供引... 流感是世界范围内的严重传染性疾病,目前抗流感药物面临的主要问题是病毒耐药性和对高致病性流感病毒的效价低。流感病毒RNA聚合酶是病毒在宿主细胞内完成复制和转录过程的关键性酶,其中PA亚基通过内切酶活性为流感病毒的转录过程提供引物,成为潜在抗流感药物靶点。该文对PA亚基的结构、功能及内切酶抑制剂类抗流感药物研究进展进行概述,为PA亚基的深入研究及针对此靶点的抗流感药物发现提供信息指导。 展开更多

关键词 流感病毒 PA亚基氨基端 PA亚基羧基端 内切酶 金属离子结合位点 高通量筛选模型

在线阅读 下载PDF 职称材料

96种中药单体抑制血管生成的活性研究 被引量：2

11

作者 花慧 张敏 陶永辉 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1612-1617,共6页

采用内皮细胞高通量筛选模型和鸡胚尿囊膜(CAM)实验筛选技术,分析96种中药单体的抑制血管生成的活性。筛选结果表明有11种中药单体对Eahy-926细胞的增殖有一定的抑制作用且呈剂量依赖关系,有10种中药单体具有抑制CAM血管形成的作用。秦... 采用内皮细胞高通量筛选模型和鸡胚尿囊膜(CAM)实验筛选技术,分析96种中药单体的抑制血管生成的活性。筛选结果表明有11种中药单体对Eahy-926细胞的增殖有一定的抑制作用且呈剂量依赖关系,有10种中药单体具有抑制CAM血管形成的作用。秦皮素、汉防己甲素、和厚朴酚、蝙蝠葛碱、鲁斯可皂苷元、高粱姜素、染料木素、隐绿原酸、齐墩果酸和α-倒捻子素,这10种单体化合物值得进一步研究。 展开更多

关键词 中药单体 高通量筛选模型 Eahy 926细胞

在线阅读 下载PDF 职称材料

桑叶中对PPARγ有激活作用的组分分离和活性鉴定 被引量：1

12

作者 宋如鋆 耿明星 +2 位作者 吕正兵 钱坤 舒建洪 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期511-517,共7页

过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPARγ)是调节脂肪细胞基因表达和分化的重要因子,也称作胰岛素增敏剂受体,一些脂肪酸对PPARγ有激活作用。桑叶中含有多种脂肪酸,以其为材料,利用构建的COS-7细胞高通量筛选模型筛选具有PPARγ配体活性... 过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPARγ)是调节脂肪细胞基因表达和分化的重要因子,也称作胰岛素增敏剂受体,一些脂肪酸对PPARγ有激活作用。桑叶中含有多种脂肪酸,以其为材料,利用构建的COS-7细胞高通量筛选模型筛选具有PPARγ配体活性的组分及单体。桑叶粉通过正己烷提取和石油醚萃取后,石油醚萃取组分(Fr.P)对PPARγ的激活倍数可达到阴性对照DMSO的3.34倍。经气相色谱-质谱(GC-MS)分析,从桑叶正己烷提取物(Fr.H)和Fr.P组分中共获得19种脂肪酸,其中Fr.H中的亚麻酸质量分数为1.91%,亚油酸为0.94%,十四酸为0.11%。高通量细胞筛选模型分析显示,与阴性对照DMSO比较,100μmol/L十四酸对PPARγ的激活倍数为1.51,50μmol/L十五酸对PPARγ的激活倍数为2.12,150μmol/L亚麻酸对PPARγ的激活倍数为2.48,100μmol/L亚油酸对PPARγ的激活倍数为2.21,而其他脂肪酸均无PPARγ配体活性。通过十四酸、亚麻酸和亚油酸的协同PPARγ激活效应分析,推测桑叶中可能含有非脂肪酸的PPARγ激动剂成分。研究结果提示有望从桑叶中寻找到新的天然胰岛素增敏剂。 展开更多

关键词 过氧化物酶体增殖物激活受体-Γ COS-7细胞高通量筛选模型 桑叶 脂肪酸

在线阅读 下载PDF 职称材料

作者·读者·编者

13

作者 柳军 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1559-1559,共1页

中国药理学通报：您好.我对贵刊已发表的论文《聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1抑制剂高通量筛选模型》一文的实验数据产生疑问（附件为其文章）,其文章在Fig 3中显示PARP-1的标准曲线,横坐标为PARP的浓度,纵坐标为RFU,随着PARP含量增加,NAD... 中国药理学通报：您好.我对贵刊已发表的论文《聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1抑制剂高通量筛选模型》一文的实验数据产生疑问（附件为其文章）,其文章在Fig 3中显示PARP-1的标准曲线,横坐标为PARP的浓度,纵坐标为RFU,随着PARP含量增加,NAD含量应是降低,荧光值应当是降低,但是论文中RFU是上升,我对这篇文章的真实性产生疑问,请给予回复解释此事,谢谢! 展开更多

关键词 聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1 PARP-1 高通量筛选模型 编者 读者 作者 中国药理学 实验数据

在线阅读 下载PDF 职称材料