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人高迁移率族蛋白组A1基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定 被引量:6
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作者 金志良 孙新臣 +2 位作者 成红艳 魏青 何少忠 《医学研究生学报》 CAS 2008年第5期468-471,I0002,共5页
目的:构建和鉴定人高迁移率族蛋白组A1(HMGA1)基因RNA干扰慢病毒表达载体。方法:针对已经筛选确定的HMGA1基因RNA干扰有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ酶切后的pGCL-GFP载体(含U6启动子和绿色荧光蛋... 目的:构建和鉴定人高迁移率族蛋白组A1(HMGA1)基因RNA干扰慢病毒表达载体。方法:针对已经筛选确定的HMGA1基因RNA干扰有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ酶切后的pGCL-GFP载体(含U6启动子和绿色荧光蛋白)连接产生LV-sh HMGA1慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用LV-sh HMGA1慢病毒载体、pHelper 1.0和pHelper 2.0等3种质粒共转染包装293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度。结果:PCR和测序证实,成功构建LV-shHMGA1的慢病毒载体,病毒滴度达5×107TU/ml。结论:人HMGA1基因RNA干扰慢病毒载体的成功构建为进一步应用RNAi技术研究HMGA1基因的功能打下了基础。 展开更多
关键词 RNA干扰 迁移蛋白a1 慢病毒
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黏蛋白5B上调高迁移率族蛋白组A1促进乳腺癌细胞侵袭转移 被引量:6
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作者 陈永胜 曾珊珊 +1 位作者 郑文英 贾小婷 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第1期6-10,共5页
目的探讨黏蛋白5B(mucin 5B,MUC5B)抑制乳腺癌细胞侵袭转移的作用及可能的分子机制。方法在多个数据库中统计MUC5B在乳腺癌组织中的表达量,qRT-PCR方法检测MUC5B在正常乳腺上皮细胞和多种乳腺癌细胞中的表达量。在乳腺癌细胞中过表达和... 目的探讨黏蛋白5B(mucin 5B,MUC5B)抑制乳腺癌细胞侵袭转移的作用及可能的分子机制。方法在多个数据库中统计MUC5B在乳腺癌组织中的表达量,qRT-PCR方法检测MUC5B在正常乳腺上皮细胞和多种乳腺癌细胞中的表达量。在乳腺癌细胞中过表达和敲低MUC5B,transwell实验检测上述细胞的侵袭能力。生物信息学预测结合实验验证MUC5B对高迁移率族蛋白组A1(human high mobilitygroup A1,HMGA1)的调控作用。在乳腺癌细胞中干预MUC5B,同时干预MUC5B和HMGA1,transwell实验检测上述细胞的侵袭能力。结果UALCAN结合The human Protein Altas在线数据库证实MUC5B在乳腺癌组织中的表达量显著高于其在正常组织中的表达量。qRT-PCR结果显示MUC5B在乳腺癌中的表达量远高于其在正常上皮细胞MCF-10A中的表达量。在乳腺癌细胞MCF-7中过表达MUC5B,transwell实验发现MUC5B可明显增加该细胞的侵袭能力;在乳腺癌细胞MDA-MB-231中敲低MUC5B,则该细胞的侵袭能力大大降低。最后,生物信息学结合qRT-PCR和WB实验证实MUC5B可显著上调HMGA1的表达。在MCF-7细胞中,敲低HMGA1可逆转该细胞因MUC5B而增加的侵袭能力;相似的,在MDA-MB-231细胞中,过表达HMGA1可逆转该细胞因敲低MUC5B而减弱的侵袭能力。结论MUC5B通过上调HMGA1促进乳腺癌细胞侵袭。 展开更多
关键词 蛋白5B(MUC5B) 迁移蛋白a1(HMGa1) 乳腺癌 侵袭
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circLRP6调节miR-31-5p/HMGA1轴对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响
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作者 许峥嵘 任卫东 +3 位作者 谷君 张志英 邓文娟 左丽娟 《中国医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第3期246-251,共6页
目的分析circLRP6调节miR-31-5p/高迁移率族蛋白A1(HMGA1)轴对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响。方法体外培养人肾小管上皮HK-2细胞,分为对照组、高糖组、高糖+si-NC组、高糖+si-circLRP6组、高糖+si-circLRP6+miR-NC组、高糖+si-ci... 目的分析circLRP6调节miR-31-5p/高迁移率族蛋白A1(HMGA1)轴对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响。方法体外培养人肾小管上皮HK-2细胞,分为对照组、高糖组、高糖+si-NC组、高糖+si-circLRP6组、高糖+si-circLRP6+miR-NC组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+si-NC组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+si-HMGA1组,对照组置于含5.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基内培养,其余各组置于含25 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基内培养,并通过Lipofectamine 2000将相应质粒转染至HK-2细胞内,实时定量PCR测定细胞circLRP6、miR-31-5p、HMGA1 mRNA水平,试剂盒测定细胞上清液白细胞介素-6(IL-6)水平、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平、乳酸脱氢酶(LDH)活性以及丙二醛(MDA)含量;流式细胞仪观察细胞凋亡;Western blotting测定细胞HMGA1、Bax、Bcl-2蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验分析miR-31-5p与circLRP6、HMGA1的靶向关系。结果与对照组相比,高糖组HK-2细胞circLRP6水平升高,细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(均P<0.05);与高糖组相比,高糖+si-circLRP6组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(均P<0.05);与高糖+si-circLRP6组相比,高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(均P<0.05);与高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组相比,高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+si-HMGA1组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(均P<0.05)。miR-31-5p与circLRP6、HMGA1均具有靶向关系。结论沉默circLRP6可能通过上调miR-31-5p,抑制HMGA1表达,对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤发挥保护作用。 展开更多
关键词 肾小管 circLRP6 miR-31-5p 高迁移率族蛋白a1
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HMGA1对肝细胞癌的增殖、迁移和细胞周期的作用影响 被引量:3
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作者 应函妤 邢家恒 +3 位作者 孙江川 钱颖 胡林峰 田男 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期232-243,共12页
目的:探究HMGA1对肝癌细胞增殖、迁移及细胞周期的影响。方法:通过生物信息学、qRT-PCR、蛋白质印迹法分析HMGA1在正常肝组织与肝癌组织、正常肝细胞与肝癌细胞中的表达及其表达量与患者生存期的关系;通过GO和KEGG通路分析HMGA1及其相... 目的:探究HMGA1对肝癌细胞增殖、迁移及细胞周期的影响。方法:通过生物信息学、qRT-PCR、蛋白质印迹法分析HMGA1在正常肝组织与肝癌组织、正常肝细胞与肝癌细胞中的表达及其表达量与患者生存期的关系;通过GO和KEGG通路分析HMGA1及其相关基因在肝癌细胞生理活动中可能发挥的作用;MTT、克隆形成、Transwell实验及流式细胞术用于分析下调HMGA1对肝细胞癌的增殖、迁移、凋亡和细胞周期的影响。结果:与正常肝组织比较,肝癌组织HMGA1表达上调,且表达水平与患者生存期呈负相关;筛选得出451个正相关基因和398个负相关基因在TCGA-LIHC和GSE15765两个数据集中都具有统计学意义,KEGG和GO分析结果表明HMGA1及其相关基因参与组成细胞组分,并主要影响肿瘤细胞的分裂增殖、转录调控、氧化还原过程和代谢过程等;下调HMGA1抑制肝癌细胞的细胞活力、迁移,诱导细胞凋亡并阻滞细胞周期;敲低HMGA1使肿瘤体积缩小、重量减轻。结论:HMGA1可能作为原癌基因促进肝癌细胞的生长。 展开更多
关键词 肝癌 迁移蛋白a1(HMGa1) 细胞周期阻滞 增殖 凋亡
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乳腺癌病灶及血清中HMGA1含量与肿瘤病理特征的相关性 被引量:2
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作者 赵丽娟 徐卫云 +4 位作者 张晓红 张靖 张珍 唐卓葳 龙丽 《海南医学院学报》 CAS 2018年第10期1034-1037,共4页
目的:研究乳腺癌病灶及血清中HMGA1含量与肿瘤病理特征的相关性。方法:选择2014年8月~2017年10月期间在绵阳市中心医院手术治疗的乳腺癌患者及乳腺良性肿瘤患者,分别作为研究的恶性组和对照组;采集血清并测定HMGA1的含量,采集乳腺癌病... 目的:研究乳腺癌病灶及血清中HMGA1含量与肿瘤病理特征的相关性。方法:选择2014年8月~2017年10月期间在绵阳市中心医院手术治疗的乳腺癌患者及乳腺良性肿瘤患者,分别作为研究的恶性组和对照组;采集血清并测定HMGA1的含量,采集乳腺癌病灶及乳腺良性肿瘤病灶并测定HMGA1的含量及增殖基因、侵袭基因的表达量。结果:恶性组患者乳腺癌病灶内HMGA1的含量以及血清中HMGA1的含量均显著高于对照组且乳腺癌病灶内HMGA1的含量与血清中HMGA1的含量呈正相关;恶性组患者乳腺癌病灶内CCN5、MMRN2、TCEAL7的mRNA表达量显著低于对照组患者乳腺肿瘤病灶,HPK1、Ki67、Sema4D、RhoA、Gab2、ARK5、SGK3、MMP9的mRNA表达量显著高于对照组患者乳腺肿瘤病灶;高HMGA1含量的恶性组患者乳腺癌病灶内CCN5、MMRN2、TCEAL7的mRNA表达量显著低于低HMGA1含量的恶性组患者,HPK1、Ki67、Sema4D、RhoA、Gab2、ARK5、SGK3、MMP9的mRNA表达量显著高于低HMGA1含量的恶性组患者。结论:乳腺癌病灶及血清中HMGA1的含量异常升高;异常升高的HMGA1能够对肿瘤增殖及侵袭的病理特征做出评估。 展开更多
关键词 乳腺癌 高迁移率族蛋白a1 增殖 侵袭
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HMGA1在乳腺癌中的表达及临床意义 被引量:1
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作者 周锐 董慧明 +5 位作者 丁淑琴 李楠 姚廷敬 彭德峰 朱正志 卢燕红 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2017年第11期1690-1693,共4页
目的探讨高迁移率族蛋白A1(HMGA1)在乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法应用实时定量荧光聚合酶链反应检测65例乳腺癌组织及配对的癌旁正常乳腺组织和40例乳腺纤维腺瘤组织中HMGA1 mRNA的表达情况;应用免疫组织化学法检测石蜡包埋的12... 目的探讨高迁移率族蛋白A1(HMGA1)在乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法应用实时定量荧光聚合酶链反应检测65例乳腺癌组织及配对的癌旁正常乳腺组织和40例乳腺纤维腺瘤组织中HMGA1 mRNA的表达情况;应用免疫组织化学法检测石蜡包埋的120例乳腺癌组织、46例乳腺纤维腺瘤组织和43例乳腺腺病组织中HMGA1的蛋白表达水平。结果乳腺癌组织中HMGA1 mRNA的表达显著高于癌旁正常乳腺组织及乳腺纤维腺瘤组织(P<0.01);乳腺癌组织中HMGA1蛋白的阳性表达率显著高于乳腺纤维腺瘤组织(P<0.01)和乳腺腺病组织(P<0.05),乳腺癌组织中HMGA1蛋白的表达与患者的年龄、淋巴结是否转移及TNM分期有关(P<0.01,P<0.05),三阴性乳腺癌HMGA1蛋白的阳性表达率明显更高(P<0.05)。结论HMGA1在乳腺癌组织中表达较癌旁正常组织和良性疾病组织明显升高,并与临床分期有关,有望成为乳腺癌诊治中的一个新的靶点。 展开更多
关键词 高迁移率族蛋白a1 乳腺癌 转录调控
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TGF-β1通过调节HMGA1表达抑制人滋养层HTR-8/SVneo细胞侵袭 被引量:6
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作者 刘昕 李鹏云 +4 位作者 高峻峻 李爱萍 冷茂东 张琳琳 张展 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第10期1584-1589,共6页
目的研究HMGA1在转化生长因子β1(TGF-β1)抑制人滋养层HTR-8/SVneo细胞侵袭过程中的作用。方法①培养HTR-8/SVneo细胞株,以5 ng/ml TGF-β1作用0、6、12、24、36 h,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)及Western blot法检测HMGA1的表... 目的研究HMGA1在转化生长因子β1(TGF-β1)抑制人滋养层HTR-8/SVneo细胞侵袭过程中的作用。方法①培养HTR-8/SVneo细胞株,以5 ng/ml TGF-β1作用0、6、12、24、36 h,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)及Western blot法检测HMGA1的表达情况。②培养HTR-8/SVneo细胞株,先经PI3K/AKT信号通路抑制剂Wortmannin(0.1μmol/L)预处理或不处理1 h,再用5 ng/ml TGF-β1处理或不处理24 h,采用Real-time PCR及Western blot法检测HMGA1、P-Akt、Akt的表达情况。③培养HTR-8/SVneo细胞株,按分组转染沉默HMGA1的siRNA和TGF-β1 5 ng/ml处理或不处理24 h,使用Transwell侵袭实验检测各组侵袭力的变化。结果各时间点5 ng/ml浓度的TGF-β1均能够促进HTR-8/SVneo细胞表达HMGA1,而处理24 h后HMGA1的表达量最高。5 ng/ml的TGF-β1处理HTR-8/SVneo细胞24 h后,TGF-β1明显上调了Akt、P-Akt、HMGA1的蛋白表达水平,而加入PI3K/AKT通路抑制剂Wortmannin(0.1μmol/L)后,TGF-β1对Akt、P-Akt、HMGA1蛋白表达水平的上调作用受到抑制(P<0.05)。Transwell实验结果表明,与TGF-β1 5 ng/ml处理组比较,TGF-β1 5 ng/ml+siHMGA1组侵袭细胞数明显增多(P<0.05)。结论TGF-β1上调HTR-8/SVneo细胞中HMGA1表达,可能通过PI3K/AKT信号通路。TGF-β1通过调节HMGA1表达抑制人滋养层HTR-8/SVneo细胞侵袭。 展开更多
关键词 高迁移率族蛋白a1 HTR-8/SVneo TGF-Β1
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miR-4465通过靶向下调HMGA1的表达抑制肝细胞癌Hep3B细胞的恶性生物学行为 被引量:2
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作者 张博超 马思源 +5 位作者 朱萍 赵晓晓 王成 刘静文 蒋平 浦春 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CSCD 北大核心 2023年第12期1066-1073,共8页
目的:探讨miR-4465靶向高迁移率族蛋白A1(HMGA1)对肝细胞癌Hep3B细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:收集2020年5月至2021年9月在皖南医学院第一附属医院确诊为肝细胞癌患者的16对癌组织和癌旁组织样本,采用qPCR分析miR-4465在肝细... 目的:探讨miR-4465靶向高迁移率族蛋白A1(HMGA1)对肝细胞癌Hep3B细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:收集2020年5月至2021年9月在皖南医学院第一附属医院确诊为肝细胞癌患者的16对癌组织和癌旁组织样本,采用qPCR分析miR-4465在肝细胞癌组织和Hep3B、Huh7细胞中的表达情况,双荧光素酶报告基因实验验证miR-4465与HMGA1的调控关系。按转染物的不同将Hep3B细胞分为mimics-NC组、miR-4465-mimics组、inhibitor-NC组、miR-4465 inhibitor组、si-NC组、si-HMGA1组;另外分组转染mimics-NC+pcDNA-NC、miR-4465 mimics+pcDNA-NC和miR-4465 mimics+pcDNAHMGA1进行回复实验。采用qPCR和WB法检测各组细胞中HMGA1 mRNA和蛋白水平的变化,CCK-8法检测各组细胞增殖能力的变化,划痕实验检测各组细胞迁移能力的变化,Transwell实验检测各组细胞侵袭能力的变化。结果:miR-4465在肝细胞癌组织和细胞中的表达水平显著低于癌旁组织和正常肝细胞(P<0.05或P<0.001)。转染48 h后,过表达miR-4465的Hep3B细胞增殖、迁移和侵袭能力均显著下降(P<0.05、P<0.01或P<0.001);敲低miR-4465后细胞的增殖、迁移和侵袭能力均明显升高(P<0.05、P<0.01或P<0.001)。双荧光素酶报告实验验证了HMGA1-3’UTR与miR-4465的靶向结合关系,miR-4465可以靶向下调HMGA1mRNA和蛋白质的表达(均P<0.01)。过表达HMGA1能部分逆转过表达miR-4465对细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用及HMGA1表达的抑制作用(均P<0.05)。结论:miR-4465通过靶向下调HMGA1在肝细胞癌Hep3B细胞中的表达,从而抑制Hep3B细胞的恶性生物学行为。 展开更多
关键词 miR-4465 高迁移率族蛋白a1 肝细胞癌 HEP3B细胞 增殖 迁移 侵袭
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