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弱化抗性标记筛选高表达CHO细胞株的方法建立
被引量：
3
1
作者
刘苏
田浤
+1 位作者
王驰
姚文兵
《中国药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第5期617-622,共6页
为了优化中国仓鼠卵巢细胞(CHO)表达体系,建立高表达CHO细胞株筛选方法,将外源基因表达载体上抗性筛选基因表达的新霉素磷酸转移酶(NPT)的261位氨基酸天冬氨酸突变成甘氨酸。经G418筛选,转染含突变型NPT表达载体的细胞存活率显著低于转...
为了优化中国仓鼠卵巢细胞(CHO)表达体系,建立高表达CHO细胞株筛选方法,将外源基因表达载体上抗性筛选基因表达的新霉素磷酸转移酶(NPT)的261位氨基酸天冬氨酸突变成甘氨酸。经G418筛选,转染含突变型NPT表达载体的细胞存活率显著低于转染含野生型NPT表达载体的细胞存活率。以绿色荧光蛋白-抗体Ig G1 Fc结构域融合蛋白为报告基因,验证了突变后新霉素磷酸转移酶对抗生素G418抗性减弱。经G418持续加压培养3周后,转染含突变型NPT表达载体的细胞中EGFP的表达量显著高于转染含野生型NPT表达载体的细胞,表明其具有筛选出高表达单克隆细胞株的潜力。
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关键词
中国仓鼠卵巢细胞
新霉素磷酸转移酶
增强型绿色荧光蛋白
高表达系统
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职称材料
题名
弱化抗性标记筛选高表达CHO细胞株的方法建立
被引量：
3
1
作者
刘苏
田浤
王驰
姚文兵
机构
中国药科大学生命科学与技术学院
出处
《中国药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第5期617-622,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.81430082)~~
文摘
为了优化中国仓鼠卵巢细胞(CHO)表达体系,建立高表达CHO细胞株筛选方法,将外源基因表达载体上抗性筛选基因表达的新霉素磷酸转移酶(NPT)的261位氨基酸天冬氨酸突变成甘氨酸。经G418筛选,转染含突变型NPT表达载体的细胞存活率显著低于转染含野生型NPT表达载体的细胞存活率。以绿色荧光蛋白-抗体Ig G1 Fc结构域融合蛋白为报告基因,验证了突变后新霉素磷酸转移酶对抗生素G418抗性减弱。经G418持续加压培养3周后,转染含突变型NPT表达载体的细胞中EGFP的表达量显著高于转染含野生型NPT表达载体的细胞,表明其具有筛选出高表达单克隆细胞株的潜力。
关键词
中国仓鼠卵巢细胞
新霉素磷酸转移酶
增强型绿色荧光蛋白
高表达系统
Keywords
Chinese hamster ovary cell
neomycin-phosphotransferase
enhanced green fluorescent protein
high expression system
分类号
R96 [医药卫生—药理学]
Q813 [生物学—生物工程]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
弱化抗性标记筛选高表达CHO细胞株的方法建立
刘苏
田浤
王驰
姚文兵
《中国药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
3
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