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拟穴青蟹(Scylla paramamosain)两种Ⅰ型高血糖激素基因全长cDNA的克隆及组织表达分析 被引量:4
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作者 舒妙安 张龙韬 +3 位作者 周宇芳 胡杭娇 徐宾朋 郭晓令 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期695-701,共7页
采用RT-PCR及RACE技术,从拟穴青蟹眼柄组织中克隆了两种Ⅰ型高血糖激素CHH基因(分别命名为C1与C2)cDNA全序列。序列分析结果表明:C1基因全长1859bp,开放阅读框长420bp,编码139个氨基酸,分子量为15.326kDa,等电点为5.540;C2基因全长1739... 采用RT-PCR及RACE技术,从拟穴青蟹眼柄组织中克隆了两种Ⅰ型高血糖激素CHH基因(分别命名为C1与C2)cDNA全序列。序列分析结果表明:C1基因全长1859bp,开放阅读框长420bp,编码139个氨基酸,分子量为15.326kDa,等电点为5.540;C2基因全长1739bp,开放阅读框长426bp,编码141个氨基酸,分子量为15.621kDa,等电点为7.618。与其它物种CHH氨基酸序列进行同源性比较分析显示,拟穴青蟹CHH基因与榄绿青蟹CHH基因同源性最高(92%),依次为日本鲟(80%)、三疣梭子蟹(78%)。聚类分析表明,拟穴青蟹CHH氨基酸序列与榄绿青蟹和日本鲟紧密聚为一支。经荧光定量检测,拟穴青蟹CHH基因在眼柄、肝胰腺、心脏、肠中表达量较高,鳃、胃中表达量很少,肌肉中表达极少。盐度骤变试验结果表明:盐度胁迫24h后,C2的表达量是C1的30倍以上;C2基因盐度5时与对照组的表达量差异不显著(P>0.05),盐度15时差异显著(P<0.05),盐度22、25、30时差异极显著(P<0.01);盐度变化越大,C2的表达量越大。上述结果为进一步深入研究CHH基因的功能及调控机理奠定基础。 展开更多
关键词 拟穴青蟹 高血糖激素CHH 基因克隆 表达分析
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口虾蛄高血糖激素基因全长cDNA的克隆及表达分析 被引量:1
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作者 刘海映 张秀芹 +6 位作者 隋宥珍 李宏俊 邢坤 姜玉声 杨贵福 陈雷 张娜 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期98-109,共12页
本文首次采用RACE技术获得口虾蛄(Oratosquilla oratoria)眼柄部高血糖激素(crustacean hyperglycemic hormone,CHH)基因cDNA全长序列,共2 421bp,5′UTR长度为180bp,3′UTR为1 821bp,开放阅读框(ORF)长420bp,编码139个氨基酸。预测蛋白... 本文首次采用RACE技术获得口虾蛄(Oratosquilla oratoria)眼柄部高血糖激素(crustacean hyperglycemic hormone,CHH)基因cDNA全长序列,共2 421bp,5′UTR长度为180bp,3′UTR为1 821bp,开放阅读框(ORF)长420bp,编码139个氨基酸。预测蛋白二级结构α-螺旋23.74%,延伸链占23.02%,无规则卷曲占53.24%,预测分子量为15.47kD,等电点(pI)为7.049。CHH成熟肽包含6个CHH家族中位置保守的Cys残基,C端为GK,推断为ES型CHH基因。聚类分析表明:口虾蛄CHH和十足目CHH聚为同一个分支的两亚群,具有较近的亲缘关系。荧光定量PCR分析结果表明,CHH基因在肠中表达量最高,在眼柄、触角中有较高的表达量,在肌肉中表达量相对较低,在卵巢中表达最低,而在精巢中不表达。 展开更多
关键词 口虾蛄 高血糖激素CHH 分子克隆 荧光定量PCR 表达分析
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日本蟳高血糖激素基因的克隆与表达分析 被引量:1
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作者 汤洁 朱冬发 +2 位作者 崔晓雨 谢熙 邱锡尔 《生物学杂志》 CAS CSCD 2014年第4期10-14,共5页
通过RACE技术克隆获得日本蟳Charybdis japonica高血糖激素基因(CjCHH)全长cDNA序列;运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法分析该基因的组织差异性表达;利用原核表达技术获得CjCHH重组蛋白。序列分析表明:CjCHH cDNA全长1754 bp,包含1... 通过RACE技术克隆获得日本蟳Charybdis japonica高血糖激素基因(CjCHH)全长cDNA序列;运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法分析该基因的组织差异性表达;利用原核表达技术获得CjCHH重组蛋白。序列分析表明:CjCHH cDNA全长1754 bp,包含111bp的5’末端非编码区(UTR),423 bp的开放阅读框(ORF),以及1236 bp的3’UTR,该基因可编码140个氨基酸。序列比对结果显示:CjCHH的成熟肽序列与其它甲壳动物CHH的一致性为41%~88%。系统进化树显示:CjCHH与其它梭子蟹科的CHH聚在一起,这与日本蟳所处的分类地位一致。组织差异性表达研究显示:CjCHH在检测的10个组织中均有表达,其中眼柄中表达量最高,肠和Y-器次之,其余组织表达量较低。成功构建了CjCHH重组表达质粒pET-CHH,并在大肠杆菌(Escherichia coli)中获得了高效表达,重组蛋白的相对分子量约11 kDa,与预测的相对分子质量大小相一致,表达水平在5 h的IPTG诱导过程中呈现上升趋势。 展开更多
关键词 日本蟳 高血糖激素 CDNA克隆 组织表达 原核表达
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斑节对虾2种高血糖激素家族基因的基因组序列分析和表达研究 被引量:3
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作者 吴勉之 杨丽诗 +4 位作者 周发林 黄建华 姜松 杨其彬 江世贵 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期27-36,共10页
在斑节对虾(Penaeus monodon)体内新发现了2种高血糖激素(crustacean hyperglycemic hormone,CHH)家族基因Pm CHH和Pm HHLPP。基因组分析结果显示,其均具有CHH-Ⅰ型基因基本的"信号肽-CPRPKR/ER/RR-成熟肽"结构,且与已报道的C... 在斑节对虾(Penaeus monodon)体内新发现了2种高血糖激素(crustacean hyperglycemic hormone,CHH)家族基因Pm CHH和Pm HHLPP。基因组分析结果显示,其均具有CHH-Ⅰ型基因基本的"信号肽-CPRPKR/ER/RR-成熟肽"结构,且与已报道的CHHs基因的基因组结构相似;聚类分析结果显示,尽管Pm CHH和Pm HHLPP与多个CHHs基因序列相似性超过50%(最高达99%),但与其聚为一支的基因均不是CHH-Ⅰ型基因;生物信息学分析结果显示,Pm CHH和Pm HHLPP的转录起始位点"A"及其核心启动子区域分别位于开放阅读框(ORF)上游的99 bp和190 bp,同时在预测其空间结构后发现,两者的三维结构中均含有4个α螺旋构型;组织表达结果显示,2个基因均在肠中有较高的表达量,而Pm CHH在鳃、Pm HHLPP在眼柄中表达量也较高,但在肝胰腺和肌肉中表达量较低;幼体发育阶段表达结果显示,2个基因在无节幼体Ⅲ~Ⅳ期、溞状幼体Ⅰ期和糠虾幼体期表达量均有较大波动,与代谢强度呈弱相关关系。根据其一级结构的特征和相关表达情况,可推测Pm CHH和Pm HHLPP均为CHHs家族基因。 展开更多
关键词 斑节对虾 甲壳动物高血糖激素 基因组结构 表达分析 幼体发育
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墨吉明对虾高血糖激素基因FmCHH-I的分子鉴定和表达特征 被引量:2
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作者 雷易果 陈兆明 王伟 《广东海洋大学学报》 CAS 北大核心 2022年第5期38-44,共7页
【目的】研究墨吉明对虾(Fenneropenaeus merguiensis)高血糖激素基因Fm CHH-I的分子特征和表达规律。【方法】根据转录组信息设计特异性引物,克隆FmCHH-I基因序列,并利用生物信息学手段预测其氨基酸和蛋白结构。采用实时荧光定量PCR方... 【目的】研究墨吉明对虾(Fenneropenaeus merguiensis)高血糖激素基因Fm CHH-I的分子特征和表达规律。【方法】根据转录组信息设计特异性引物,克隆FmCHH-I基因序列,并利用生物信息学手段预测其氨基酸和蛋白结构。采用实时荧光定量PCR方法分析该基因在不同组织中和卵巢发育不同时期的表达情况,以及切除单侧眼柄对其表达的影响。【结果与结论】成功克隆墨吉明对虾高血糖激素基因FmCHH-I的序列。该基因cDNA全长599 bp,开放阅读框(ORF)长为369 bp,编码123个氨基酸。蛋白序列的1~20位包含一个信号肽,随后有一段由26个氨基酸组成的前导肽,末端为成熟肽,包含74个氨基酸以及6个半胱氨酸残基。FmCHH-I基因与斑节对虾(Penaeus monodon)CHH-I基因同源性最高(91.53%),与欧洲龙虾(Homarus gammarus)CHH-I基因同源性最低(43.86%)。系统发育分析表明,FmCHH-I与斑节对虾聚在一起,与对虾科物种聚为一支。FmCHH-I在眼柄中的表达量最高,在肝胰腺、肠道中也有表达。FmCHH-I在性腺未发育期和性腺成熟期雌性对虾眼柄中的表达量无显著差异(P>0.05),但切除眼柄后,卵巢中FmCHH-I的表达量显著上调(P<0.01)。 展开更多
关键词 墨吉明对虾 高血糖激素 CHH神经肽 基因表达
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红螯螯虾CHH2基因的表达特征及其在卵巢发育中的功能
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作者 陈乐然 郑建波 +7 位作者 贾永义 迟美丽 李飞 程顺 刘士力 刘一诺 蒋文枰 顾志敏 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第1期33-40,共8页
为研究高血糖激素基因(CHH)在红螯螯虾卵巢发育中的作用,基于转录组学数据鉴定到红螯螯虾CHH2基因序列,并对其基本特性进行生物信息学分析。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测了CHH2在红螯螯虾不同组织和卵巢发育阶段的表达情况。结果表... 为研究高血糖激素基因(CHH)在红螯螯虾卵巢发育中的作用,基于转录组学数据鉴定到红螯螯虾CHH2基因序列,并对其基本特性进行生物信息学分析。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测了CHH2在红螯螯虾不同组织和卵巢发育阶段的表达情况。结果表明,CHH蛋白在甲壳类物种中高度保守,同源性高达66.84%。qRT-PCR结果表明,在红螯螯虾的肝胰腺中几乎检测不到CHH2表达,在其他组织均有表达,包括肌肉、鳃、肠、心,且在卵巢中的表达水平最高;另外,CHH2在卵巢发育各个时期(未发育、发育期、快速发育期、成熟期)均有表达,表达水平先升高后降低,在卵巢发育成熟期表达水平最低。此外,在切除单侧眼柄和雌二醇活体注射的红螯螯虾卵巢中,CHH2表达水平显著降低。通过注射体外合成CHH2-dsRNA对红螯螯虾进行RNAi干扰试验,结果显示,卵巢发育重要标记卵黄蛋白原基因(VTG)表达水平显著上升。综上所述,CHH2可能负调控红螯螯虾卵巢发育,研究结果为进一步开发基于RNAi的促性腺成熟技术奠定理论基础。 展开更多
关键词 红螯螯虾 高血糖激素基因2(CHH2) RNAI 卵巢发育 卵黄蛋白原
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