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非洲猪瘟病毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用
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作者 刘影 闫若潜 +10 位作者 王东方 杨海波 赵美雪 宋丹 赵雪丽 谢彩华 王淑娟 马震原 柴茂 王翠 刘梅芬 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期118-130,共13页
建立一种特异、敏感、快速的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,用于非洲猪瘟病毒(ASFV)和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)的鉴别诊断。针对ASFV的B646L基因和HP-PRRSV的NSP2基因分别设计特异性引物/探针对,经优化反应体系、反应... 建立一种特异、敏感、快速的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,用于非洲猪瘟病毒(ASFV)和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)的鉴别诊断。针对ASFV的B646L基因和HP-PRRSV的NSP2基因分别设计特异性引物/探针对,经优化反应体系、反应程序等反应条件,建立一种基于探针技术的FQ-PCR方法,验证方法的敏感性、特异性和重复性,对130份临床样品进行检测,并与OIE检测方法(ASFV)及国标方法(HP-PRRSV)进行比较分析。本研究成功建立的ASFV和HP-PRRSV二重FQ-PCR检测方法在10^(-1)~10^(5) copies/μL模板范围内有良好的线性关系;对ASFV和HP-PRRSV基因出现阳性扩增,但对猪日本乙型脑炎病毒(JEV)、猪瘟(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲经典株(VR2332株)、健康猪脾脏等7种病原核酸样品对照未出现扩增;批内、批间试验变异系数在0.53%~3.14%,重复性良好;对ASFV和HP-PRRSV的最低检测模板浓度均为10 copies/μL;利用建立的二重FQ-PCR方法对130份临床样品进行检测,检测结果与OIE检测方法(ASFV)及国标方法(HP-PRRSV)完全一致。本研究成功建立了鉴别ASFV和HPPRRSV二重FQ-PCR检测方法,为ASFV和HP-PRRSV的鉴别诊断提供了快速、敏感、特异且能满足临床检测需求的检测方法。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 致病猪繁殖呼吸综合征病毒 二重FQ-PCR
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猪繁殖与呼吸综合征病毒三重纳米RT-PCR检测方法的建立 被引量:1
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作者 茹敏 高洁 +3 位作者 赵治钤 郑丹阳 赵谜 穆杨 《动物医学进展》 北大核心 2025年第7期18-25,共8页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在猪群中不断变异和传播,给世界养猪业造成严重的经济损失。将纳米颗粒与传统RT-PCR技术相结合,根据不同毒株Nsp2核苷酸序列,设计合成PRRSV特异性通用引物,在对退火温度、引物浓度、反应循环数等进行优化... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在猪群中不断变异和传播,给世界养猪业造成严重的经济损失。将纳米颗粒与传统RT-PCR技术相结合,根据不同毒株Nsp2核苷酸序列,设计合成PRRSV特异性通用引物,在对退火温度、引物浓度、反应循环数等进行优化后,建立了能鉴别经典、高致病性和NADC30样PRRSV毒株的三重纳米RT-PCR(Nano RT-PCR)检测方法。特异性试验结果显示,使用该方法检测猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪圆环病毒2型、伪狂犬病病毒、猪细小病毒等病毒均无交叉反应。该方法对经典、高致病性和NADC30样PRRSV毒株的Nsp2重组质粒的检出限分别为3.32×10^(2)、6.18×10^(3)、3.26×10^(3)拷贝/μL,高于常规RT-PCR方法的灵敏度。对80份临床样本的检测结果显示,该方法可用于临床样品中PRRSV经典毒株、高致病性毒株和NADC30样毒株的鉴别检测,并可确定毒株类型,为猪繁殖与呼吸综合征病毒的快速检测提供了技术支撑。 展开更多
关键词 猪繁殖呼吸综合征病毒 经典毒株 致病毒株 NADC30样毒株 纳米RT-PCR
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地塞米松对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒感染仔猪的影响 被引量:1
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作者 佟杰 王刚 +8 位作者 于颖 张冲 常亚飞 刘永刚 涂亚斌 汤艳东 姜成刚 王淑杰 蔡雪辉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期590-594,共5页
为研究地塞米松(DEx)对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP—PRRSV)感染仔猪造成的免疫系统和呼吸系统损伤的影响,本实验在断奶仔猪感染HP-PRRSVHuN4株前后,肌肉注射不同剂量的DEX。观察临床症状,检测其免疫系统相关指标的变化... 为研究地塞米松(DEx)对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP—PRRSV)感染仔猪造成的免疫系统和呼吸系统损伤的影响,本实验在断奶仔猪感染HP-PRRSVHuN4株前后,肌肉注射不同剂量的DEX。观察临床症状,检测其免疫系统相关指标的变化。结果显示:不同剂量DEX注射组实验猪均表现典型临床症状,虽然其外周血中的促炎性细胞因子IL-1β、IL-6及TNF—d水平降低,CD4+CD8‘T淋巴细胞亚群比例较HuN4单独感染组升高,CD8+CD4-T细胞比例较HuN4单独感染组降低,但DEX注射组仔猪体温始终维持在40℃-42℃,肺部、胸腺和淋巴组织病变加重,死亡率达到100%(10/10),而HuN4单独感染组仔猪死亡率仅为25%(1/4)。表明DEX对HP—PRRSV感染的断奶仔猪虽具有一定的抑制炎症反应作用,但加重了HP-PRRSV感染的不利影响。本研究为全面防控HP—PRRSV提供新的实验依据。 展开更多
关键词 高致病性猪繁殖与呼吸系统综合征病毒 地塞米松 促炎细胞因子
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR鉴别诊断方法的建立 被引量:62
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作者 郝晓芳 周艳君 +5 位作者 田志军 韦天超 安同庆 彭金美 华荣虹 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期704-709,共6页
2006年5月以来,我国部分猪场暴发了一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染性疾病,经病原分离及分子流行病学分析证明是由一种带有nsp2部分缺失的、对猪呈高致病性的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory ... 2006年5月以来,我国部分猪场暴发了一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染性疾病,经病原分离及分子流行病学分析证明是由一种带有nsp2部分缺失的、对猪呈高致病性的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的。本实验参考GenBank发表的以及本实验室分离鉴定的PRRSV的nsp2基因序列,在nsp2缺失区的两端的保守区设计并合成了一对引物,建立了一种PRRSV的RT-PCR检测方法。该方法扩增高致病性PRRSV基因组时可获得230bp的片段,扩增经典型PRRSV时则获得320bp的片段,根据RT-PCR产物大小可将二者区分开来。通过大量临床病料的检测,并配合PCR产物测序验证,结果表明该方法简便、快速、特异,可以鉴别高致病性PRRSV,为进一步的PRRS流行病学研究提供了重要的技术手段。 展开更多
关键词 致病猪繁殖呼吸综合征病毒 基因缺失 RT-PCR 鉴别诊断
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猪α干扰素的原核表达及抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒活性测定 被引量:12
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作者 闫若潜 赵雪丽 +2 位作者 赵明军 盛敏 吴志明 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期570-574,共5页
为了研究高效广谱的基因工程抗病毒制剂,本研究采用PCR技术自猪肝脏总DNA中扩增、克隆猪α干扰素(PoIFN-α)成熟肽基因并亚克隆入pQE30载体进行原核表达,对表达的融合重组猪α干扰素(rPoIFN-α)蛋白通过尿素变性、低浓度蛋白复性液复性... 为了研究高效广谱的基因工程抗病毒制剂,本研究采用PCR技术自猪肝脏总DNA中扩增、克隆猪α干扰素(PoIFN-α)成熟肽基因并亚克隆入pQE30载体进行原核表达,对表达的融合重组猪α干扰素(rPoIFN-α)蛋白通过尿素变性、低浓度蛋白复性液复性、PBS溶液透析等步骤进行纯化,采用细胞病变抑制法分别测定rPoIFN-α蛋白在PK15细胞上抗水泡性口炎病毒(VSV)增殖活性及在Marc-145细胞上抑制高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的增殖活性,以分别评价rPoIFN-α的活性单位及其体外抑制高致病性PRRSV增殖所需的最低浓度。结果表明,克隆的PoIFN-α成熟肽基因全长501bp,编码166个氨基酸;表达的rPoIFN-α蛋白分子量大小20.7ku左右,与预期大小相一致;经纯化后的蛋白纯度在95%以上;纯化的rPoIFN-α蛋白在PK15细胞上抗VSV病毒活性单位为1.4482×104IU/mL(5.2×106IU/mg),在Marc-145细胞上能完全抑制高致病性PRRSV增殖所需的rPoIFN-α蛋白最低有效剂量为640U/mL(2.3×104U/mg)。这些研究结果为新型基因工程抗病毒制剂的开发以及用于高致病性PRRSV性疾病的预防和治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 猪Α干扰素 表达 纯化 致病猪繁殖呼吸综合征病毒 病毒
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒分离鉴定及其体外传代遗传变异分析 被引量:14
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作者 刘长明 危艳武 +2 位作者 张朝霞 袁婧 黄立平 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期329-334,共6页
从临床"高热综合征"病例分离到高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株,经细胞传代和蚀斑克隆,培育成功增殖性能稳定的新毒株,命名为PRRSV-HBR。该毒株接种细胞后能够产生细胞病变(CPE),随传代次数增加毒价显著提升,第4... 从临床"高热综合征"病例分离到高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株,经细胞传代和蚀斑克隆,培育成功增殖性能稳定的新毒株,命名为PRRSV-HBR。该毒株接种细胞后能够产生细胞病变(CPE),随传代次数增加毒价显著提升,第45~60代毒价测定达107.5TCID50/mL。采用免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测病毒抗原分布在细胞浆中;电镜观察到的病毒粒子呈圆形,直径约50nm~55nm。分离株Nsp2基因序列中第483位和535~563位氨基酸存在缺失,属PRRSV变异株。该毒株Nsp2基因序列比较发现,经细胞传40代后第3115位核苷酸处插入12个碱基序列(GAGATCGCCTTT)。用该毒株第5代培养物滴鼻接种试验猪(1.0×104.5TCID50),临床表现为持续高热(≥40.5℃,9d~12d)、食欲下降、精神萎靡、消瘦、眼睑水肿、体表淋巴结肿大等,发病率为100%(10/10),死亡率为30%(3/10)。研究表明,PRRSV-HBR分离株对靶动物具有高致病力,培育的细胞适应毒株体外繁殖能力稳定,并产生了标志性基因突变,为该病毒致病机理、遗传变异规律、疫苗免疫等研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖呼吸综合征病毒 致病 遗传变异分析
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒病和副猪嗜血杆菌病混合感染的诊断与防制 被引量:18
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作者 苏丹萍 王文豪 +2 位作者 张显浩 张丹琳 贺东生 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第8期186-189,共4页
目前在集约化养殖场的猪群中经常出现病毒病和细菌病的混合感染,严重影响中国养猪业的发展。2011年9月,广东某个千头母猪场的猪群大量发病,表现为高热、咳嗽、食欲下降、皮肤发绀、关节肿大等临床症状。通过流行病学调查、剖检、细菌分... 目前在集约化养殖场的猪群中经常出现病毒病和细菌病的混合感染,严重影响中国养猪业的发展。2011年9月,广东某个千头母猪场的猪群大量发病,表现为高热、咳嗽、食欲下降、皮肤发绀、关节肿大等临床症状。通过流行病学调查、剖检、细菌分离鉴定、药敏试验、PCR和RT-PCR等实验室检测最终确诊为高致病性猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒病和副猪嗜血杆菌病的混合感染,在此基础上提出和实施了该病的防控方案。 展开更多
关键词 致病猪繁殖呼吸综合征病毒 猪圆环病毒 副猪嗜血杆菌 诊断 防制
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猪繁殖与呼吸综合征病毒重组毒株GX-C4CG6致病性探究
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作者 王东东 李春梅 +5 位作者 罗小飞 叶敏慧 田小艳 欧阳海平 潘永飞 何晓明 《中国动物检疫》 CAS 2024年第5期104-109,共6页
为评估猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组毒株GX-C4CG6对小猪的致病性,选择PRRSV抗原、抗体均为阴性的小猪进行攻毒试验,然后通过攻毒后猪只体温变化及死亡情况、临床症状评分、血清抗体变化、攻毒后平均日增重、解剖后肺脏眼观及显微... 为评估猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组毒株GX-C4CG6对小猪的致病性,选择PRRSV抗原、抗体均为阴性的小猪进行攻毒试验,然后通过攻毒后猪只体温变化及死亡情况、临床症状评分、血清抗体变化、攻毒后平均日增重、解剖后肺脏眼观及显微病理变化、血清/肺脏病毒拷贝数等指标,对该毒株致病性进行评估。结果显示:GX-C4CG6毒株攻毒组有4头猪出现发烧,平均体温在攻毒后第12、13天大于40℃,最高体温达40.4℃,未出现死亡;被攻毒猪仅表现轻微减料,未表现出明显的呼吸障碍;攻毒后7 d,攻毒组猪只抗体开始转阳,至攻毒后14 d,攻毒组猪只ELISA抗体S/P平均值达最高;攻毒组在攻毒后第1周和对照组平均日增重差异不显著,至第2周差异显著(P<0.05),攻毒组显著低于对照组;被攻毒猪出现肺脏间质性肺炎,血清和肺脏病毒拷贝数浓度较高,分别达9.2×10^(5)和1.6×10^(7)copies/mL。结果表明,PRRSV GX-C4CG6毒株对小猪表现温和致病性。本研究为PRRSV重组毒株流行的控制提供了基础资料。 展开更多
关键词 猪繁殖呼吸综合征病毒 重组毒株 致病 小猪
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株主要囊膜糖蛋白GP5的遗传变异分析 被引量:14
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作者 安同庆 田志军 +6 位作者 肖燕 姜一峰 韦天超 彭金美 周艳君 仇华吉 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期851-856,共6页
为了探究高致病性猪蓝耳病病毒(HP-PRRSV)的遗传变异特征,本研究对GenBank中235株HP-PRRSV GP5序列的遗传进化、主要氨基酸基序、抗原性以及N-糖基化位点数量和位置的变异进行了分析。结果表明HP-PRRSV之间的同源性较高,与其他参考毒株... 为了探究高致病性猪蓝耳病病毒(HP-PRRSV)的遗传变异特征,本研究对GenBank中235株HP-PRRSV GP5序列的遗传进化、主要氨基酸基序、抗原性以及N-糖基化位点数量和位置的变异进行了分析。结果表明HP-PRRSV之间的同源性较高,与其他参考毒株相比,这些病毒处于一个相对独立的分支中,而且与经典疫苗株的亲缘关系较远。这有助于解释经典疫苗株对于HP-PRRSV为何起不到理想的免疫保护效果。在病毒的中和表位序列中存在着规律的点突变,同时抗原性比较显示HP-PRRSV与经典毒株之间存在着一定的差异。绝大多数的HP-PRRSV的N-糖基化位点在数量上多一个,而且位置要向羧基端平移2个氨基酸,从而使得中和表位两侧直接与糖链相连,可能会造成中和表位被糖侧链所遮掩,本研究由此推测减弱中和抗体对HP-PRRSV的有效识别,促进病毒逃避机体体液免疫。 展开更多
关键词 致病猪繁殖呼吸综合征 GP5 序列分析 遗传变异 糖基化
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高致病性与低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量:8
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作者 安春霞 闫若潜 +4 位作者 吴志明 赵明军 赵雪丽 王东方 刘淑敏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第5期66-70,共5页
为建立高致病性与低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP/LP-PRRSV)快速鉴别诊断方法,本研究根据GenBank已登录的HP-PRRSV与LP-PRRSV的Nsp2基因序列,分别设计了特异性的上游引物(HP-Upper-p1/LP-Upper-p2)和共用下游引物(Co-Lower-p3)。以H... 为建立高致病性与低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP/LP-PRRSV)快速鉴别诊断方法,本研究根据GenBank已登录的HP-PRRSV与LP-PRRSV的Nsp2基因序列,分别设计了特异性的上游引物(HP-Upper-p1/LP-Upper-p2)和共用下游引物(Co-Lower-p3)。以HP-PRRSV和LP-PRRSV混合物总RNA为反转录模板,建立了HP-PRRSV和LP-PRRSV的二重RT-PCR检测方法;并进行了特异性、敏感性和重复性试验;利用所建立的检测方法对临床疑似样品进行了检测。结果显示,本试验成功建立了HP-PRRSV和LP-PRRSV二重RT-PCR检测方法,该方法灵敏度高,最低检出限均为100拷贝/μL;重复性好,特异性强,可特异性地扩增HP-PRRSV细胞培养物和LP-PRRSV疫苗毒,但对Marc-145细胞和其他8种病原对照扩增不出任何条带;自25份临床疑似PRRSV感染病料中共检测出了21份PRRSV阳性样品,其中HP-PRRSV阳性样品共计20份,LP-PRRSV阳性样品4份。结果表明,本研究成功建立了HP-PRRSV和LP-PRRSV二重RT-PCR检测方法,可适用于高致病性与低致病性猪繁殖与呼吸综合征的快速鉴别诊断。 展开更多
关键词 致病猪繁殖呼吸综合征病毒 致病猪繁殖呼吸综合征病毒 二重RT-PCR 检测 建立 应用
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猪圆环病毒2型感染对高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫应答的影响 被引量:8
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作者 司兴奎 顾万军 +2 位作者 张济培 陈建红 马春全 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期35-39,共5页
采用阻断ELISA法对单独接种高致病性猪繁殖与呼吸综合征组(hpPRRS,B组)及PCV2人工感染21d后接种hpPRRS疫苗组(PB组)不同时期血清中的PRRSV抗体进行检测,同时对不同时期前腔静脉血进行CD4/CD8流式细胞术及血常规分析。结果表明,在接种后3... 采用阻断ELISA法对单独接种高致病性猪繁殖与呼吸综合征组(hpPRRS,B组)及PCV2人工感染21d后接种hpPRRS疫苗组(PB组)不同时期血清中的PRRSV抗体进行检测,同时对不同时期前腔静脉血进行CD4/CD8流式细胞术及血常规分析。结果表明,在接种后32dB组白细胞含量极显著高于PB组(P<0.01),接种后62dB组淋巴细胞含量极显著高于PB组(P<0.01),接种后75dPB组幼稚型Th细胞含量显著高于B组(P<0.05),接种后32、62及75dB组Tc细胞含量为PB组的2.40、1.98和1.86倍,接种后32、48及62dB组记忆/激活Th细胞含量分别为PB组的1.54、1.46及1.32倍。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型感染 致病猪繁殖呼吸综合征疫苗 免疫应答 ELISA 流式细胞术
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光定量PCR方法的建立 被引量:18
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作者 杨宗照 母安雄 方维焕 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期288-291,共4页
根据GenBank中的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)基因组序列设计1对特异性引物,建立一种基于SYBR Green I实时PCR检测HP-PRRSV的方法。结果表明,该方法能够检测到HP-RRSV的存在,不与其它猪源病毒发生非特异性反应,标准曲线线... 根据GenBank中的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)基因组序列设计1对特异性引物,建立一种基于SYBR Green I实时PCR检测HP-PRRSV的方法。结果表明,该方法能够检测到HP-RRSV的存在,不与其它猪源病毒发生非特异性反应,标准曲线线性范围为1011拷贝/反应~102拷贝/反应。与常规PCR方法相比,两者的符合率100%。该方法具有快速、简便、敏感等优点,具有重要的实用价值。 展开更多
关键词 实时定量PCR 致病猪繁殖呼吸综合征病毒
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乳猪“高热症”猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离与致病性分析 被引量:5
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作者 杨明娴 邢刚 +3 位作者 孙文博 黄杰 姜学涛 周继勇 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期846-851,共6页
本研究针对疑似高热症疫情的猪场,从分离病原的致病特性及基因特征,对高热症的病因进行了探索。以RT-PCR/PCR从临床病料中检测出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)核酸,利用Marc-145细胞从病料中分离... 本研究针对疑似高热症疫情的猪场,从分离病原的致病特性及基因特征,对高热症的病因进行了探索。以RT-PCR/PCR从临床病料中检测出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)核酸,利用Marc-145细胞从病料中分离到PRRSV(XS070425毒株)。测序结果显示,XS070425毒株Nsp2基因无高致病性PRRSV Nsp2基因533~561位连续29个氨基酸"RPVTPLSEPIPVPAPRRKFQQVKRLSSAA"的缺失;但遗传进化分析显示,XS070425毒株Nsp2、ORF5基因与近期我国报道的高致病性PRRSV-HuN4和JXA1有较高的同源性,达95%~96%。致病性试验显示,PRRSV-XS070425原始病料悬液和Marc-145细胞分离物接种健康猪后,病毒血症可持续26d,并出现典型的PRRS临床症状和体温升高,但不致死感染猪。这些结果说明,无NSP2蛋白29个氨基酸残基缺失的PRRSV也是猪高热症的重要病原。 展开更多
关键词 热症 猪繁殖呼吸综合征病毒 致病
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪伪狂犬病病毒双重PCR检测方法的建立及初步应用 被引量:7
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作者 程亮亮 祁克宗 +2 位作者 占松鹤 朱良强 秦爱建 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第10期85-88,共4页
为快速鉴别诊断高致病性猪繁殖与呼吸综合征和猪伪狂犬病,根据GenBank中登录的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Nsp2基因缺失区和猪伪狂犬病病毒(PRV)gB基因保守区序列,分别设计并合成了2对特异性扩增引物,通过对反应条件的优... 为快速鉴别诊断高致病性猪繁殖与呼吸综合征和猪伪狂犬病,根据GenBank中登录的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Nsp2基因缺失区和猪伪狂犬病病毒(PRV)gB基因保守区序列,分别设计并合成了2对特异性扩增引物,通过对反应条件的优化,建立了能够同时检测HP-PRRSV和PRV的双重PCR诊断方法。利用建立的双重PCR方法对30份临床可疑样品进行检测,并与商品化单项PCR试剂盒进行对比验证。结果表明,本试验建立的双重PCR方法具有较高的灵敏度和特异性,与商品化单项PCR试剂盒检测结果完全一致。因此,该双重PCR方法能够用于HP-PRRSV和PRV单项或混合感染的临床样品快速鉴别检测。 展开更多
关键词 双重PCR 致病猪繁殖呼吸综合征病毒 猪为狂犬病病毒
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应用生物反应器生产高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原 被引量:6
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作者 梅建国 王玉茂 +3 位作者 王文秀 唐世云 丁壮 沈志强 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第11期80-84,共5页
应用激流式生物反应器培养Marc-145细胞生产高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒,并通过工艺优化,实现了病毒抗原的高效生产。首先将Marc-145细胞用含6 0mL/L牛血清的DMEM培养液复苏放大培养,当细胞量达到3×109时,接种入反应器中。先... 应用激流式生物反应器培养Marc-145细胞生产高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒,并通过工艺优化,实现了病毒抗原的高效生产。首先将Marc-145细胞用含6 0mL/L牛血清的DMEM培养液复苏放大培养,当细胞量达到3×109时,接种入反应器中。先用细胞生长液培养,当细胞达到最大量时更换生长液为维持液,并接种HP-PRRSV。整个过程采用流加方式,每8h采样测定培养上清中葡萄糖浓度。接种病毒后,每24h测定培养上清HP-PRRSV滴度。6个批次细胞生长至88h,糖耗达到最高水平。连续3个批次种毒后培养至96h,上清中HP-PRRSV滴度达到最高,平均约为每106.4 TCID50/0.1mL。因此,认为应用激流式生物反应器进行细胞培养,通过过程工艺优化,可以实现HP-PRRSV抗原的高滴度生产。 展开更多
关键词 生物反应器 细胞培养 致病猪繁殖呼吸综合征病毒
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高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒感染猪主要脏器的超微结构变化 被引量:5
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作者 曹剑波 李彬 +1 位作者 陈焕春 肖少波 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期330-333,共4页
对高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(HP-PRRSV)人工感染的成年猪脏器进行透射电子显微镜观察,结果发现,肺部组织细胞病变最严重,部分毛细血管破裂,毛细血管内皮细胞裂解,肺泡巨噬细胞线粒体嵴肿胀严重;脑部组织神经元细胞凋亡和胶质... 对高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(HP-PRRSV)人工感染的成年猪脏器进行透射电子显微镜观察,结果发现,肺部组织细胞病变最严重,部分毛细血管破裂,毛细血管内皮细胞裂解,肺泡巨噬细胞线粒体嵴肿胀严重;脑部组织神经元细胞凋亡和胶质细胞坏死;肾脏和淋巴结组织中均出现病毒的复制和线粒体嵴的肿胀。该结果为阐明HP-PRRSV的致病机理提供了实验依据。 展开更多
关键词 致病猪繁殖呼吸障碍综合征病毒 超微结构
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云南高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2基因变异分析 被引量:3
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作者 庞海洋 赵焕云 +6 位作者 张文东 张思东 吕粤 岳亮 范泉水 张应国 张富强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期934-938,共5页
采用RT-PCR技术对云南2007年采集的48份猪组织样品中病毒Nsp2基因进行检测,获得阳性样品14份,选择5份代表性样品将其PCR产物纯化后,克隆至pMD18-T载体测序,并与已知代表性毒株进行比较及系统发育分析。结果发现云南病毒样品Nsp2基因核... 采用RT-PCR技术对云南2007年采集的48份猪组织样品中病毒Nsp2基因进行检测,获得阳性样品14份,选择5份代表性样品将其PCR产物纯化后,克隆至pMD18-T载体测序,并与已知代表性毒株进行比较及系统发育分析。结果发现云南病毒样品Nsp2基因核苷酸及氨基酸序列同源性分别为95.8%~99.0%和92.3%~98.6%。5份样品病毒Nsp2蛋白482位、534位~562位氨基酸均存在缺失,其中1份样品(YNMG)486位~489位氨基酸也发生了缺失。云南病毒样品在系统发育树上可划分为4个亚组群,分别与广东、广西、贵州、浙江、江苏、山东毒株遗传关系密切。 展开更多
关键词 猪繁殖呼吸综合征病毒 致病 NSP2基因 变异
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株及其致弱过程中的不同代次病毒的分子特征分析 被引量:6
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作者 周艳君 田志军 +6 位作者 郝晓芳 安同庆 于海 李国新 陈瑾 彭金美 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 2011年第1期1-10,共10页
为了追踪高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syn-drome virus,HP-PRRSV)毒力逐渐减弱的分子轨迹,我们以HP-PRRSV亲本毒HuN4株及其系列传代致弱毒株为研究对象,对HuN4株及其不同... 为了追踪高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syn-drome virus,HP-PRRSV)毒力逐渐减弱的分子轨迹,我们以HP-PRRSV亲本毒HuN4株及其系列传代致弱毒株为研究对象,对HuN4株及其不同代次毒株其全基因序列进行了序列比较分析。结果显示由高致病性的亲本毒HuN4株到无致病性的F112代的疫苗毒,共有65个核苷酸发生突变,其中导致41个氨基酸发生突变,这些突变的氨基酸分散性的存在于不同基因区域。与已经报道的高致病性JXA1株及其致弱毒株JXA80株相比较,可以看到两个强毒株毒力致弱的演变轨迹并不完全相同,二者之间不仅氨基酸突变数量不一致,而且突变氨基酸的位置也不完全相同,但其共同特点是由强毒株到弱毒株的变化过程中,突变率较高的结构蛋白相一致,突变率较高的非结构蛋白基本一致。分析结果提示我们决定高HP-PRRSV毒力强弱的因素可能不是由单个氨基酸的突变来决定的,推测是由一个基因或多个基因或多种因素共同造成的,同时也使我们认识到PRRSV的非结构蛋白区在病毒毒力变化中可能发挥重要作用。 展开更多
关键词 致病猪繁殖呼吸综合征病毒HuN4株 二疫苗毒HuN4-F112 突变
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天津株(TJM-F92)高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗免疫后病毒血症和抗体消长规律的试验报告 被引量:3
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作者 杨本勇 曹东 +8 位作者 顾贵波 赵晓彤 赵凤菊 于学武 关淼 李树博 王克才 李井春 魏澍 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2017年第7期56-58,共3页
高致病性猪繁殖与呼吸综合征(HP—PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株引起的一种急性高致死性疫病。发病主要特征为怀孕母猪流产、早产、木乃伊胎等,母猪流产率可达30%以上;仔猪出现严重的呼吸道症状,感染率可达100%,死亡率... 高致病性猪繁殖与呼吸综合征(HP—PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株引起的一种急性高致死性疫病。发病主要特征为怀孕母猪流产、早产、木乃伊胎等,母猪流产率可达30%以上;仔猪出现严重的呼吸道症状,感染率可达100%,死亡率在50%以上。目前我国使用的高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗均为活疫苗,据报道活疫苗免疫后可在动物体内复制并持续存在。为摸清高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗免疫后在猪体内的存在时间,我们进行了本试验,现报告如下。 展开更多
关键词 猪繁殖呼吸综合征病毒 疫苗免疫 致病 试验报告 抗体消长规律 病毒血症 天津 母猪流产
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒BJSD株和BJPG株序列分析 被引量:3
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作者 刘永宏 赵丽 +2 位作者 刘俊峰 王凤龙 刘月焕 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第12期111-118,共8页
本研究旨在预测与分析高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒BJSD株和BJPG株序列特点,为其下一步研究作准备。利用分子生物学软件及服务器,对BJSD株和BJPG株全序列及各结构蛋白的生化特性、溶解性和核定位信号等进行了分析,结果显示BJSD株和B... 本研究旨在预测与分析高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒BJSD株和BJPG株序列特点,为其下一步研究作准备。利用分子生物学软件及服务器,对BJSD株和BJPG株全序列及各结构蛋白的生化特性、溶解性和核定位信号等进行了分析,结果显示BJSD株和BJPG株至少有12个非结构蛋白和6个结构蛋白;同源性比较结果显示GP3和GP5蛋白变异性高,M和N蛋白保守。GP3、GP5和M蛋白糖基化位点与参考株相比有变化,GP2、GP4和N蛋白糖基化位点与所有参考株一致。服务器预测BJSD株和BJPG株GP2、M和N蛋白生化特性显示各项数据完全一致,其中N蛋白的碱性氨基酸比例明显高于其他蛋白,总平均亲水值明显低于其他蛋白;GP2、GP3和GP4蛋白不稳定,GP5、M和N蛋白稳定。BJSD株和BJPG株可溶性只有GP3和GP5略有差别,其余蛋白数据一致,6个结构蛋白预测不溶性概率均在66%以上,GP3不溶性概率最高。BJSD株和BJPG株结构蛋白核定位结果显示,两株仅GP3和GP5有差异,其余蛋白分布情况完全一致。可以利用以上一些不同于以往各代表株的特点,对PRRS的诊断和防制做进一步的研究。 展开更多
关键词 致病 猪繁殖呼吸综合征 序列分析 BJSD株 BJPG株
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