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题名含发夹结构的Gateway质粒DNA测序方法改进
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作者
刘耘
熊家军
杨利国
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机构
华中农业大学动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室
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出处
《华中农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第4期441-444,共4页
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基金
国家“863”计划项目(2007AA10Z152)
国家“十一五”支撑项目(2006BAD04A02-11)资助
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文摘
Gateway克隆技术现已广泛用于cDNA文库构建。然而,用常规DNA测序程序对Gateway cDNA进行测序时,反向重复的att序列易形成发夹结构,导致测序质量较差,且测得的序列较短,成为Gateway克隆技术应用的限制因素。本研究报道了1种Gateway cDNA克隆高温变性测序方法,即在Gateway cDNA测序PCR反应之前,先将DNA在98℃预变性5 min,可有效防止测序峰值的快速下降,极显著地增加Gateway cDNA克隆测序长度(质量Q≥20的序列平均长度从528 bp提高到816 bp)。该方法在常规DNA测序程序的基础上仅新增了5 min的高温预变性,不增加任何实验成本和操作步骤,非常适合Gateway质粒DNA的大规模测序。
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关键词
Gateway克隆系统
DNA测序
发夹
高温预变性
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Keywords
Gateway cloning system
DNA cycle sequencing
hairpins high-temperature pre-denaturation
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分类号
Q785
[生物学—分子生物学]
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