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黄曲霉毒素B1高敏感性和高特异性单抗的制备及dcELISA检测方法的建立
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作者 樊振江 王丽莎 +1 位作者 孟楠 张华青 《饲料工业》 北大核心 2025年第11期139-146,共8页
研究旨在制备黄曲霉毒素B1(AFB1)高敏感性和高特异性单克隆抗体(mAb),建立AFB1直接竞争酶联免疫吸附试验(dcELISA)检测方法。试验选用自制人工抗原AFB1-BSA免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合和阳性杂交瘤筛选技术建立AFB1 mAb杂交瘤细胞株,... 研究旨在制备黄曲霉毒素B1(AFB1)高敏感性和高特异性单克隆抗体(mAb),建立AFB1直接竞争酶联免疫吸附试验(dcELISA)检测方法。试验选用自制人工抗原AFB1-BSA免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合和阳性杂交瘤筛选技术建立AFB1 mAb杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备AFB1 mAb,对其免疫学特性进行鉴定;应用AFB1 mAb建立AFB1 dcELISA检测方法,对其性能进行测定。结果表明,筛选出AFB1 mAbs 1F6-3C8和3G9-2B6 2株杂交瘤细胞株,其中1F6-3C8敏感性更高、特异性更好,间接非竞争ELISA(inELISA)细胞培养上清液和腹水效价分别为1∶(6.4×10^(3))和1∶(1.28×10^(6)),对AFB1的半数抑制浓度(IC_(50))为1.32μg/L,除与黄曲霉毒素B2(AFB2)有15.37%的交叉反应率(CRR)外,与黄曲霉毒素(AFs)其他同系物的CRR均小于3.0%,与其他霉菌毒素的CRR小于0.02%;在优化的条件下,AFB1 dcELISA的检测限(LOD)为0.11μg/L,检测范围为0.15~7.01μg/L;玉米粉、豆饼粉、猪饲料和蛋鸡饲料的批内平均回收率分别为89.07%、86.58%、89.35%和93.62%,批间平均回收率分别为89.97%、88.07%、91.35%和92.48%,批内平均变异系数(CVs)值分别为11.08%、11.67%、11.45%和10.40%,批间平均CVs值分别为11.37%、12.61%、11.87%和10.94%,AFB1 dcELISA具有较好的准确性和稳定性;用AFB1 dcELISA和LC-MS/MS检测40个实际样品和6个已知阳性样品,两者的检测结果一致,符合率为100%,AFB1 dcELISA具有较好的可靠性。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素B1 人工抗原 高敏感性和高特异性单克隆抗体 dcELISA 免疫分析
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高特异性黄曲霉毒素B_1单克隆抗体的制备及特性研究 被引量:10
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作者 肖智 李培武 +2 位作者 张奇 张文 丁小霞 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期66-70,共5页
本研究将黄曲霉毒素B1转化为半缩醛B2a,在硼氢化钠(NaBH4)还原作用下与载体蛋白偶联制备完全抗原。将制备的完全抗原免疫Balb/c小鼠,经4次免疫后取其脾脏与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0细胞融合,采用半固体培养基筛选后鉴定,获得杂交瘤细胞株3A... 本研究将黄曲霉毒素B1转化为半缩醛B2a,在硼氢化钠(NaBH4)还原作用下与载体蛋白偶联制备完全抗原。将制备的完全抗原免疫Balb/c小鼠,经4次免疫后取其脾脏与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0细胞融合,采用半固体培养基筛选后鉴定,获得杂交瘤细胞株3A12,抗体的灵敏度可达6.1±0.025ng/mL,抗体与其它黄曲霉毒素B2、G1及G2的交叉反应率依次为7.8%、20.2%及0.6%,与黄曲霉毒素M1交叉反应率小于0.1%。本研究为研发花生等农产品黄曲霉毒素B1特异性免疫分析技术及产品奠定了重要基础。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素B1 高特异性单克隆抗体 特性
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应用两种新的单克隆抗体ELISA方法检测SVDV抗体
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作者 朱其太 《畜牧兽医科技信息》 1996年第9期5-5,共1页
1995年意大利学者Brocchi等建立两种新的ELISA方法,来检测猪水泡病病毒(SVDV)抗体。一种是单克隆抗体竞争ELISA(MAC—ELISA),用于检测血清中能中和单克隆抗体(M_cA_b)的特异性抗体;另一种是使用表型特异性M_cA_b的直接捕获ELISA,来检测S... 1995年意大利学者Brocchi等建立两种新的ELISA方法,来检测猪水泡病病毒(SVDV)抗体。一种是单克隆抗体竞争ELISA(MAC—ELISA),用于检测血清中能中和单克隆抗体(M_cA_b)的特异性抗体;另一种是使用表型特异性M_cA_b的直接捕获ELISA,来检测SVDV特异性IgG或IgM。试验共用5671份野外血清来评价MAC—ELISA的敏感性和特异性。 展开更多
关键词 中和单克隆抗体 ELISA方法 竞争ELISA 猪水泡病病毒 SVDV 捕获ELISA 感性和异性 异性IGG 异性抗体 病毒中和试验
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用MAb阻断ELISA检测PMV-1特异性抗体
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作者 李凯年 《畜牧兽医科技信息》 1998年第9期5-5,共1页
瑞典G.Czifra等人研究了一种检测新城疫病毒(NDV)特异性抗体的单克隆抗体(Mab)阻断ELISA(B-ELISA)。用间接免疫过氧化物酶试验证实,所用的MAb对一个保守的副粘病毒血清型1(MPV-1)表位是特异的,与代表MPV-1血清型内不同血清组的所有毒株... 瑞典G.Czifra等人研究了一种检测新城疫病毒(NDV)特异性抗体的单克隆抗体(Mab)阻断ELISA(B-ELISA)。用间接免疫过氧化物酶试验证实,所用的MAb对一个保守的副粘病毒血清型1(MPV-1)表位是特异的,与代表MPV-1血清型内不同血清组的所有毒株反应,但与属于其他PMV血清型的任何毒株都不反应。与血凝抑制试验(HI)比较了B-ELISA的敏感性和特异性。 展开更多
关键词 阻断ELISA 感性和异性 血清型 新城疫病毒 单克隆抗体 异性抗体 副粘病毒 抑制试验 过氧化物 酶试验
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用竞争ELISA检测禽流感病毒核蛋白抗体
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作者 李凯年 《畜牧兽医科技信息》 1999年第8期5-5,共1页
加拿大研究人员研制了一种竞争ELISA(C—ELISA),用以检测A型流感病毒核蛋白的抗体。这种C—ELISA使用一种杆状病毒表达的重组核蛋白和一种单克隆抗体。通过测试756只鸡、1123只火鸡、707只鸸鹋和1261只鸵鸟共3847份血清样品对C—ELISA... 加拿大研究人员研制了一种竞争ELISA(C—ELISA),用以检测A型流感病毒核蛋白的抗体。这种C—ELISA使用一种杆状病毒表达的重组核蛋白和一种单克隆抗体。通过测试756只鸡、1123只火鸡、707只鸸鹋和1261只鸵鸟共3847份血清样品对C—ELISA的性能进行了评价,并与常用于检测禽流感病毒抗体的琼脂凝胶免疫扩散(AGID)试验和血凝抑制(HI)试验进行了比较。结果。 展开更多
关键词 禽流感病毒 ELISA检测 竞争ELISA 重组核蛋白 单克隆抗体 杆状病毒表达 血清样品 感性和异性 病毒抗体 免疫扩散
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用竞争ELISA检测PRRSV抗体
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作者 李凯年 《畜牧兽医科技信息》 2001年第10期10-11,共2页
加拿大研究人员研制了一种检测猪繁殖和呼吸综 合征病毒(PRRSV)抗体的竞争ELISA(K8-ELISA)。
关键词 ELISA检测 PRRSV 猪繁殖和呼吸综合征病毒 竞争ELISA 感性和异性 单克隆抗体 间接免疫荧光 大肠杆菌表达 重组融合蛋白 研究人员
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用捕获酶免疫测定检测多杀性巴氏杆菌抗体
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作者 李凯年 《畜牧兽医科技信息》 1997年第15期7-7,共1页
最近,美国Robert R.Peterson等人研制了一种酶免疫测定法(EIA),用鼠免疫球蛋白G单克隆抗体捕获EIA中的一个多杀性巴氏杆菌血清型A:12的37-kDa多肽来检测多杀性巴氏杆菌抗体。通过测定56只感染多杀性巴氏杆菌兔的血清,这种P57EIA的敏感性... 最近,美国Robert R.Peterson等人研制了一种酶免疫测定法(EIA),用鼠免疫球蛋白G单克隆抗体捕获EIA中的一个多杀性巴氏杆菌血清型A:12的37-kDa多肽来检测多杀性巴氏杆菌抗体。通过测定56只感染多杀性巴氏杆菌兔的血清,这种P57EIA的敏感性为98%。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 酶免疫测定 免疫球蛋白G 单克隆抗体 血清型 细菌溶解产物 诊断试验 变异系数 感性和异性 免疫兔血清
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应用ELISA方法诊断羊布病 被引量:1
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作者 史同瑞 《畜牧兽医科技信息》 1998年第23期6-6,共1页
羊布氏杆菌病临床诊断一般是依据公羊生殖器病变,母羊胎盘炎,流产而定性。实验室诊断多采用琼扩试验和补体结合试验。由于抗原和结合物影响ELISA方法诊断布氏杆菌病的敏感性和特异性,因而尚无可靠的ELISA方法用于此病诊断。最近西班牙... 羊布氏杆菌病临床诊断一般是依据公羊生殖器病变,母羊胎盘炎,流产而定性。实验室诊断多采用琼扩试验和补体结合试验。由于抗原和结合物影响ELISA方法诊断布氏杆菌病的敏感性和特异性,因而尚无可靠的ELISA方法用于此病诊断。最近西班牙学者用三种不同的过氧化物酶结合物,即抗羊IgG多克隆抗体,重组蛋白G,抗反刍动物IgG<sub>1</sub>单克隆抗体建立了三个ELISA试验。 展开更多
关键词 ELISA 方法诊断 羊布氏杆菌病 单克隆抗体 克隆抗体 补体结合试验 实验室诊断 感性和异性 重组蛋白 酶结合物
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应用单抗ELESA检测Vero毒素性大肠杆菌
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作者 朱其太 《畜牧兽医科技信息》 1998年第6期6-6,共1页
英国学者Randall等应用抗大肠杆菌Vero细胞毒素1和2的单克隆抗体建立了夹心ELISA法,用于检测动物粪便中产生Vero细胞毒素性大肠杆菌(VTEC)。为了最理想地检测毒素,将粪便样本先在麦康凯平板上初培养后再接种到胰蛋白胨大豆琼脂(含有丝... 英国学者Randall等应用抗大肠杆菌Vero细胞毒素1和2的单克隆抗体建立了夹心ELISA法,用于检测动物粪便中产生Vero细胞毒素性大肠杆菌(VTEC)。为了最理想地检测毒素,将粪便样本先在麦康凯平板上初培养后再接种到胰蛋白胨大豆琼脂(含有丝裂霉素C)。 展开更多
关键词 Vero毒素 ELESA 大肠杆菌数 丝裂霉素C 单克隆抗体 细胞毒素 VERO细胞 夹心ELISA法 动物粪便 感性和异性
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