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玉米磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因高效表达载体构建及其导入小麦的研究 被引量：18
1
作者 李艳 许为钢 +4 位作者 胡琳 张磊 齐学礼 张庆琛 王根松 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期741-746,共6页
为获得具有C4光合特征的高光效转基因小麦材料,利用从玉米中克隆的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)基因(pepc,GenBank接受号为FJ415327)构建高效双元表达载体,通过基因枪介导法将其导入小麦品种(系)中,利用Real-time PCR方法分析外源基因... 为获得具有C4光合特征的高光效转基因小麦材料,利用从玉米中克隆的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)基因(pepc,GenBank接受号为FJ415327)构建高效双元表达载体,通过基因枪介导法将其导入小麦品种(系)中,利用Real-time PCR方法分析外源基因在转基因植株中的拷贝数。PCR和双酶切鉴定表明,玉米PEPCcDNA序列已插入双元表达载体pCAMBIA3301中,命名为p3301-pepc;对获得的抗性再生植株进行PCR扩增,其中有342株扩增出目的条带;在选取的15株转基因植株中7株拷贝数为1,3株拷贝数为2,2株拷贝数为3,拷贝数为5、8和17的分别为1株。初步证明玉米pepc基因已整合到小麦基因组中,且外源基因在转基因植株中既有单拷贝插入,也有多拷贝插入,这为进一步研究该基因在小麦基因组中的功能表达提供了试验材料。 展开更多
关键词 小麦 玉米磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC) 高效表达载体 转基因 拷贝数
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cry Ia基因小麦高效表达载体的构建 被引量：5
2
作者 侯文胜 郭三堆 路明 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2002年第6期121-124,共4页
　利用在禾谷类作物中表达效率较高的启动子Ubi对含目的基因cryIa的现有载体进行了改造,并引入了筛选标记基因bar,为提高目的基因的表达水平,还在目的基因5′端引入了Ω和Kozak序列,3′端引入了poly(A)序列。成功构建了适用于小麦的抗... 　利用在禾谷类作物中表达效率较高的启动子Ubi对含目的基因cryIa的现有载体进行了改造,并引入了筛选标记基因bar,为提高目的基因的表达水平,还在目的基因5′端引入了Ω和Kozak序列,3′端引入了poly(A)序列。成功构建了适用于小麦的抗虫基因植物表达载体pGU4ABBar,该载体含有顺向连接的Ubi-cryIa及Ubi-bar基因表达盒,可用于基因枪、花粉管通道法等介导的小麦遗传转化,人工合成的苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白基因cryIa可以编码对鳞翅目昆虫具有毒杀作用的蛋白。 展开更多
关键词 CRY Ia基因 小麦 高效表达载体 启动子 质粒
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sgna基因小麦高效表达载体的构建 被引量：3
3
作者 侯文胜 郭三堆 路明 《西北植物学报》 CAS CSCD 2002年第5期1031-1037,共7页
利用在禾谷类作物中表达效率较高的启动子 Ubi对含目的基因 sgna的现有载体进行了改造 ,并引入筛选标记基因 bar;为提高目的基因的表达水平 ,在目的基因 5′端引入了Ω和 kozak序列 ,3′端引入了 poly( A)序列 ,成功构建了适用于小麦的... 利用在禾谷类作物中表达效率较高的启动子 Ubi对含目的基因 sgna的现有载体进行了改造 ,并引入筛选标记基因 bar;为提高目的基因的表达水平 ,在目的基因 5′端引入了Ω和 kozak序列 ,3′端引入了 poly( A)序列 ,成功构建了适用于小麦的抗虫基因植物表达载体p GU4AGBar和 p GBIU4AGBar。其中 p GU4AGBar含有顺向连接的 Ubi- sgna及 Ubi- bar基因表达盒 ,p GBIU4AGBar含有 T- DNA边界序列 ,并在其左右边界中间插入了含有顺向连接的 Ca MV35 S- npt 、Ubi- sgna和 Ubi- bar基因表达盒。 展开更多
关键词 抗虫基因 sgna基因 小麦 高效表达载体 构建
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真核细胞高效表达载体的构建及尿激酶原基因在哺乳动物细胞中的高效表达
4
作者 李风知 李军 俞炜源 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 1994年第S1期258-258,共1页
真核细胞高效表达载体的构建及尿激酶原基因在哺乳动物细胞中的高效表达北京军事医学科学院生物工程研究所１００８５０）李风知，李军，俞炜源真核表达载体的元件组成及结构是哺乳动物细胞高效表达外源基因的关键因素之一。我们以基因... 真核细胞高效表达载体的构建及尿激酶原基因在哺乳动物细胞中的高效表达北京军事医学科学院生物工程研究所１００８５０）李风知，李军，俞炜源真核表达载体的元件组成及结构是哺乳动物细胞高效表达外源基因的关键因素之一。我们以基因表达调控理论为指导，采用多种表达载... 展开更多
关键词 尿激酶原 高效表达载体 真核表达载体 子控制 重组载体 启动子 表达产物 李军 中国仓鼠 增强子
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单子叶高效表达载体的构建及玉米植株再生体系的建立
5
作者 冯玉兰 王汉宁 +1 位作者 张金文 孔维萍 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2006年第6期18-23,共6页
从原核表达载体pETChi上切下几丁质酶基因片段,取代植物表达载体pBIUA上的Res基因片段,构建玉米ubi启动子驱动的单子叶高效植物表达载体pBIUC;以目前国内大面积种植的6个骨干自交系综3、87-1、郑58、昌7-2、137、和K12的幼胚为材料,诱... 从原核表达载体pETChi上切下几丁质酶基因片段,取代植物表达载体pBIUA上的Res基因片段,构建玉米ubi启动子驱动的单子叶高效植物表达载体pBIUC;以目前国内大面积种植的6个骨干自交系综3、87-1、郑58、昌7-2、137、和K12的幼胚为材料,诱导愈伤组织,并以愈伤组织诱导率较高的综3、郑58和K12建立玉米植株再生体系.结果表明:pBIUC植物表达载体成功构建;玉米愈伤组织的诱导对基因型依赖较强;愈伤组织诱导的最佳2,4-D浓度为2.0 mg/L. 展开更多
关键词 几丁质酶基因 ubi启动子 单子叶高效表达载体 玉米 愈伤组织 再生体系
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新的单子叶作物高效表达载体
6
作者 孙雷心 《生物技术通报》 CAS CSCD 1992年第10期6-6,共1页
微弹导入系统(包括向细胞中射入覆盖DNA的颗粒)是一种成功的转化手段,却在单子叶植物如禾谷类作物上遇到麻烦,这导致人们研究寻找更加有效的启动子。CaMV(花椰菜花叶病毒组)35S RNA启动子和玉米乙醇脱氢酶启动子已被广泛用于植物转化,... 微弹导入系统(包括向细胞中射入覆盖DNA的颗粒)是一种成功的转化手段,却在单子叶植物如禾谷类作物上遇到麻烦,这导致人们研究寻找更加有效的启动子。CaMV(花椰菜花叶病毒组)35S RNA启动子和玉米乙醇脱氢酶启动子已被广泛用于植物转化,但在水稻细胞中效果不佳。Cornell大学由Ray Wu牵头的研究小组报导,用肌动蛋白基因启动子可使转化成功。 Act1肌动蛋白基因启动子在所有水稻细胞中均大量表达。初步实验表明。 展开更多
关键词 高效表达载体 启动子 CaMV 花椰菜花叶病毒 肌动蛋白 初步实验 RNA 转基因烟草 禾谷类作物 Cornell
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口蹄疫病毒VP1高效植物表达载体构建及鉴定
7
作者 郝岗平 边高鹏 +1 位作者 孙凌云 张媛英 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期132-136,共5页
采用高保真PCR方法从pGEM-VP1-T质粒扩出VP1基因,定向克隆到含DHA的融合中间载体pUC18-DHA,得到pUC18-VP1-DHA,经测序证实核酸序列正确后,再亚克隆到转化范围广,转化效率高,且含有双增强子的高效植物双元表达载体pGreen0029-GFP上,获得... 采用高保真PCR方法从pGEM-VP1-T质粒扩出VP1基因,定向克隆到含DHA的融合中间载体pUC18-DHA,得到pUC18-VP1-DHA,经测序证实核酸序列正确后,再亚克隆到转化范围广,转化效率高,且含有双增强子的高效植物双元表达载体pGreen0029-GFP上,获得含VP1融合DHA基因的植物双元表达载体pGreen0029-VP1-DHA,采用电击法将含VP1的植物表达载体转入根癌农杆菌G3101中,获得了含VP1基因的双元植物表达载体,为下一步的广范围转基因植物表达研究奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒VP1基因 植物高效表达载体
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蝴蝶兰LFY基因克隆及高效植物表达载体的构建 被引量：4
8
作者 崔波 牛苏燕 +3 位作者 蒋素华 武思 王默菲 叶永忠 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期65-68,共4页
根据NCBI中蝴蝶兰LFY花序分生组织基因序列设计2对引物,用RT-PCR法从蝴蝶兰花芽中扩增出LFY基因,对扩增产物进行克隆和测序。结果表明,获得的蝴蝶兰LFY基因约为1 500 bp,与报道序列同源性达98.71%。将LFY基因插入pRI101-ON载体中,经PCR... 根据NCBI中蝴蝶兰LFY花序分生组织基因序列设计2对引物,用RT-PCR法从蝴蝶兰花芽中扩增出LFY基因,对扩增产物进行克隆和测序。结果表明,获得的蝴蝶兰LFY基因约为1 500 bp,与报道序列同源性达98.71%。将LFY基因插入pRI101-ON载体中,经PCR、双酶切及测序鉴定,证实重组表达质粒中含有目的片段,表明成功构建了高效植物表达载体pRI101-LFY。 展开更多
关键词 蝴蝶兰 LFY基因 克隆 高效植物表达载体构建
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颠茄H6H基因的克隆及高效植物表达载体的构建 被引量：1
9
作者 王贵君 郑月 +1 位作者 陈敏 廖志华 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第17期10194-10196,共3页
[目的]克隆颠茄(Atropa belladonna)H6H基因并构建高效植物表达载体。[方法]采用RT-PCR方法从颠茄中克隆莨菪碱-6β-羟化酶和1,4-丁二胺-氮-甲基转移酶基因编码区,插入经改造后获得双元三价植物高效表达载体p2301-gus,构建植物表达载体p... [目的]克隆颠茄(Atropa belladonna)H6H基因并构建高效植物表达载体。[方法]采用RT-PCR方法从颠茄中克隆莨菪碱-6β-羟化酶和1,4-丁二胺-氮-甲基转移酶基因编码区,插入经改造后获得双元三价植物高效表达载体p2301-gus,构建植物表达载体p2301-H6H,并将该表达载体导入根癌农杆菌LBA4404和发根农杆菌C58C1。[结果]获得了可直接用于遗传改良的颠茄工程菌p2301-H6H-LBA4404和p2301-H6H-C58C1。[结论]为利用植物基因工程技术提高颠茄中生物碱含量奠定了基础。 展开更多
关键词 颠茄 莨菪碱-6β-羟化酶 高效植物表达载体
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世界首例转人防御素基因克隆奶牛在陕西杨凌诞生
10
作者 文一波 《农业技术与装备》 2009年第12S期60-60,共1页
2009年11月25日中午,由中国著名动物胚胎工程专家。
关键词 人防御素 陕西杨凌 动物胚胎工程 基因克隆 体细胞克隆 Β-酪蛋白 启动子 高效表达载体 皮肤成纤维
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