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高效热不对称交互式PCR技术克隆地黄基因
被引量：
3
1
作者
周延清
王婉珅
+4 位作者
张喻
李静云
陈娟娟
苑璐璐
魏俊
《河南师范大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2015年第1期100-105,共6页
利用高效热不对称交互式PCR（hiTAIL-PCR）技术从地黄基因组中扩增出3个DNA片段,经过电泳检测、回收、纯化和测序获得2个片段的碱基序列.其中一个由578个bp组成,包含一个453bp的开放阅读框（ORF）,编码151个氨基酸,与一些已知纤维素合...
利用高效热不对称交互式PCR（hiTAIL-PCR）技术从地黄基因组中扩增出3个DNA片段,经过电泳检测、回收、纯化和测序获得2个片段的碱基序列.其中一个由578个bp组成,包含一个453bp的开放阅读框（ORF）,编码151个氨基酸,与一些已知纤维素合酶基因在DNA水平和氨基酸水平的同源性分别高达81%~91%和83%~99%,而且推测蛋白质具有纤维素合酶的结构域;另一个由385个bp组成,没有ORF,不编码蛋白质,但是,预测其包含启动子元件.这些结果表明使用hiTAIL-PCR技术可以克隆地黄基因,克隆的基因将为地黄基因分子作用机制和分子育种研究奠定基础.
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关键词
地黄
高效
热
不对称
交互式
pcr
技术
基因克隆
启动子
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职称材料
应用hiTAIL-PCR技术克隆Marinomonas sp.BSi20584菌株β-半乳糖苷酶基因
被引量：
3
2
作者
周莉莉
陈瑞琴
+2 位作者
陈秀兰
曾胤新
陈波
《极地研究》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第3期249-256,共8页
实验使用hiTAIL-PCR(high-efficiency thermal asymmetric interlaced PCR,高效热不对称交错PCR)方法,从海单胞菌Marinomonas sp.BSi20584中克隆β-半乳糖苷酶基因。从GenBank注册的已知β-半乳糖苷酶氨基酸序列出发,设计引物克隆编码β...
实验使用hiTAIL-PCR(high-efficiency thermal asymmetric interlaced PCR,高效热不对称交错PCR)方法,从海单胞菌Marinomonas sp.BSi20584中克隆β-半乳糖苷酶基因。从GenBank注册的已知β-半乳糖苷酶氨基酸序列出发,设计引物克隆编码β-半乳糖苷酶保守片段的DAN序列;根据Marinomonas sp.BSi20584天然酶N端氨基酸残基测序结果,设计上游引物,保守DNA片段5'端设计下游引物,克隆N端到保守序列之间的DNA片段;将所得的2个DNA片段拼接并命名拼接后的片段为nbs。根据hiTAIL-PCR方法设计引物,染色体步移克隆nbs上下游片段,拼接上下游片段得到全长序列,设计引物扩增全长片段并测序。本文成功克隆了Marinomonas sp.BSi20584菌株β-半乳糖苷酶的编码基因,全长1 971 bp,NCBI比对表明其编码产物为GH-42家族的一个新成员。
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关键词
Β-半乳糖苷酶
高效
热
不对称
交错
pcr
染色体步移
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职称材料
sikFBA4基因启动子的克隆及低温表达模式分析
3
作者
张尧
李忠晴
+1 位作者
王爱英
祝建波
《草业学报》
CSCD
北大核心
2018年第12期199-207,共9页
天山雪莲生长于常年积雪覆盖高海拔处的高山区域,具有很强的极端低温生境适应能力,属于研究植物低温适应的良好模式植物。前期的研究表明,sikFBA4基因可以显著提高番茄的抗寒能力。为进一步研究sikFBA4基因的耐寒响应模式,以天山雪莲为...
天山雪莲生长于常年积雪覆盖高海拔处的高山区域,具有很强的极端低温生境适应能力,属于研究植物低温适应的良好模式植物。前期的研究表明,sikFBA4基因可以显著提高番茄的抗寒能力。为进一步研究sikFBA4基因的耐寒响应模式,以天山雪莲为材料,采用实时荧光定量PCR分析sikFBA4在低温胁迫下的表达模式;利用高效热不对称PCR法(Hi-Tail PCR)克隆sikFBA4启动子序列并进行生物信息学分析。为分析PsikFBA4序列克隆的完整性及转录表达特性,将PsikFBA4与GUS基因融合在烟草中进行瞬时表达。结果表明,sikFBA4在低温胁迫条件下的表达发生瞬时显著上调,并在1h达到峰值,而后表达下调。通过启动子克隆分析,在PsikFBA4序列-1648bp位置处具有冷响应元件LTRE;进一步的GUS染色和酶活力测定结果表明,低温能够显著提高GUS基因的表达活性,说明sikFBA4属于低温诱导型基因。SikFBA4基因启动子的克隆、序列分析以及表达分析,为进一步探究雪莲果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(sikFBAs)基因的表达与调控机制奠定了基础。
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关键词
天山雪莲
sikFBA4
高效热不对称pcr
启动子
GUS
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职称材料
题名
高效热不对称交互式PCR技术克隆地黄基因
被引量：
3
1
作者
周延清
王婉珅
张喻
李静云
陈娟娟
苑璐璐
魏俊
机构
河南师范大学生命科学学院
周口市科学技术局
出处
《河南师范大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2015年第1期100-105,共6页
基金
河南省基础与前沿技术研究计划项目(092300410009)
河南省教育厅科学技术研究重点项目(14B180028)
国家大学生创新创业训练计划项目(201310476102)
文摘
利用高效热不对称交互式PCR（hiTAIL-PCR）技术从地黄基因组中扩增出3个DNA片段,经过电泳检测、回收、纯化和测序获得2个片段的碱基序列.其中一个由578个bp组成,包含一个453bp的开放阅读框（ORF）,编码151个氨基酸,与一些已知纤维素合酶基因在DNA水平和氨基酸水平的同源性分别高达81%~91%和83%~99%,而且推测蛋白质具有纤维素合酶的结构域;另一个由385个bp组成,没有ORF,不编码蛋白质,但是,预测其包含启动子元件.这些结果表明使用hiTAIL-PCR技术可以克隆地黄基因,克隆的基因将为地黄基因分子作用机制和分子育种研究奠定基础.
关键词
地黄
高效
热
不对称
交互式
pcr
技术
基因克隆
启动子
Keywords
Rehmannia glutinosa
high-efficient thermal asymmetric interlaced
pcr
gene cloning
promoter
分类号
Q754 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
应用hiTAIL-PCR技术克隆Marinomonas sp.BSi20584菌株β-半乳糖苷酶基因
被引量：
3
2
作者
周莉莉
陈瑞琴
陈秀兰
曾胤新
陈波
机构
华东理工大学生物工程学院
国家海洋局极地科学重点实验室
山东大学微生物技术国家重点实验室
出处
《极地研究》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第3期249-256,共8页
基金
海洋公益性行业科研专项经费项目(201005032-3)
国家高技术研究发展计划(863计划)(2012AA092105)
南北极环境综合考察与评估专项(CHINARE2012-01-06)资助
文摘
实验使用hiTAIL-PCR(high-efficiency thermal asymmetric interlaced PCR,高效热不对称交错PCR)方法,从海单胞菌Marinomonas sp.BSi20584中克隆β-半乳糖苷酶基因。从GenBank注册的已知β-半乳糖苷酶氨基酸序列出发,设计引物克隆编码β-半乳糖苷酶保守片段的DAN序列;根据Marinomonas sp.BSi20584天然酶N端氨基酸残基测序结果,设计上游引物,保守DNA片段5'端设计下游引物,克隆N端到保守序列之间的DNA片段;将所得的2个DNA片段拼接并命名拼接后的片段为nbs。根据hiTAIL-PCR方法设计引物,染色体步移克隆nbs上下游片段,拼接上下游片段得到全长序列,设计引物扩增全长片段并测序。本文成功克隆了Marinomonas sp.BSi20584菌株β-半乳糖苷酶的编码基因,全长1 971 bp,NCBI比对表明其编码产物为GH-42家族的一个新成员。
关键词
Β-半乳糖苷酶
高效
热
不对称
交错
pcr
染色体步移
Keywords
β-galactosidase, hiTAIL-
pcr
, gene walking
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
sikFBA4基因启动子的克隆及低温表达模式分析
3
作者
张尧
李忠晴
王爱英
祝建波
机构
农业生物技术重点实验室
出处
《草业学报》
CSCD
北大核心
2018年第12期199-207,共9页
基金
国家自然基金项目(31360053)资助。
文摘
天山雪莲生长于常年积雪覆盖高海拔处的高山区域,具有很强的极端低温生境适应能力,属于研究植物低温适应的良好模式植物。前期的研究表明,sikFBA4基因可以显著提高番茄的抗寒能力。为进一步研究sikFBA4基因的耐寒响应模式,以天山雪莲为材料,采用实时荧光定量PCR分析sikFBA4在低温胁迫下的表达模式;利用高效热不对称PCR法(Hi-Tail PCR)克隆sikFBA4启动子序列并进行生物信息学分析。为分析PsikFBA4序列克隆的完整性及转录表达特性,将PsikFBA4与GUS基因融合在烟草中进行瞬时表达。结果表明,sikFBA4在低温胁迫条件下的表达发生瞬时显著上调,并在1h达到峰值,而后表达下调。通过启动子克隆分析,在PsikFBA4序列-1648bp位置处具有冷响应元件LTRE;进一步的GUS染色和酶活力测定结果表明,低温能够显著提高GUS基因的表达活性,说明sikFBA4属于低温诱导型基因。SikFBA4基因启动子的克隆、序列分析以及表达分析,为进一步探究雪莲果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(sikFBAs)基因的表达与调控机制奠定了基础。
关键词
天山雪莲
sikFBA4
高效热不对称pcr
启动子
GUS
Keywords
Saussurea involucrata
sikFBA4
Hi-Tail
pcr
promoter
GUS
分类号
Q943.2 [生物学—植物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
高效热不对称交互式PCR技术克隆地黄基因
周延清
王婉珅
张喻
李静云
陈娟娟
苑璐璐
魏俊
《河南师范大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2015
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
应用hiTAIL-PCR技术克隆Marinomonas sp.BSi20584菌株β-半乳糖苷酶基因
周莉莉
陈瑞琴
陈秀兰
曾胤新
陈波
《极地研究》
CAS
CSCD
北大核心
2013
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
sikFBA4基因启动子的克隆及低温表达模式分析
张尧
李忠晴
王爱英
祝建波
《草业学报》
CSCD
北大核心
2018
0
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