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口蹄疫病毒VP1高效植物表达载体构建及鉴定
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作者 郝岗平 边高鹏 +1 位作者 孙凌云 张媛英 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期132-136,共5页
采用高保真PCR方法从pGEM-VP1-T质粒扩出VP1基因,定向克隆到含DHA的融合中间载体pUC18-DHA,得到pUC18-VP1-DHA,经测序证实核酸序列正确后,再亚克隆到转化范围广,转化效率高,且含有双增强子的高效植物双元表达载体pGreen0029-GFP上,获得... 采用高保真PCR方法从pGEM-VP1-T质粒扩出VP1基因,定向克隆到含DHA的融合中间载体pUC18-DHA,得到pUC18-VP1-DHA,经测序证实核酸序列正确后,再亚克隆到转化范围广,转化效率高,且含有双增强子的高效植物双元表达载体pGreen0029-GFP上,获得含VP1融合DHA基因的植物双元表达载体pGreen0029-VP1-DHA,采用电击法将含VP1的植物表达载体转入根癌农杆菌G3101中,获得了含VP1基因的双元植物表达载体,为下一步的广范围转基因植物表达研究奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒VP1基因 植物高效表达载体
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蝴蝶兰LFY基因克隆及高效植物表达载体的构建 被引量:4
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作者 崔波 牛苏燕 +3 位作者 蒋素华 武思 王默菲 叶永忠 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期65-68,共4页
根据NCBI中蝴蝶兰LFY花序分生组织基因序列设计2对引物,用RT-PCR法从蝴蝶兰花芽中扩增出LFY基因,对扩增产物进行克隆和测序。结果表明,获得的蝴蝶兰LFY基因约为1 500 bp,与报道序列同源性达98.71%。将LFY基因插入pRI101-ON载体中,经PCR... 根据NCBI中蝴蝶兰LFY花序分生组织基因序列设计2对引物,用RT-PCR法从蝴蝶兰花芽中扩增出LFY基因,对扩增产物进行克隆和测序。结果表明,获得的蝴蝶兰LFY基因约为1 500 bp,与报道序列同源性达98.71%。将LFY基因插入pRI101-ON载体中,经PCR、双酶切及测序鉴定,证实重组表达质粒中含有目的片段,表明成功构建了高效植物表达载体pRI101-LFY。 展开更多
关键词 蝴蝶兰 LFY基因 克隆 高效植物表达载体构建
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Lfy cDNA高效单子叶植物表达载体的构建及转化兰花研究初报 被引量:18
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作者 邵寒霜 李继红 王胜培 《热带作物学报》 CSCD 2000年第3期58-62,共5页
构建一个适合在单子叶植物中高效表达的含有Lfy cDNA的表达载体(pBIL-1),应用基因枪转化法将其导入兰花原球茎中,获得了一些卡那霉素抗性克隆。
关键词 Lfy cDNA 单子叶植物表达载体 构建 兰花 转化
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颠茄H6H基因的克隆及高效植物表达载体的构建 被引量:1
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作者 王贵君 郑月 +1 位作者 陈敏 廖志华 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第17期10194-10196,共3页
[目的]克隆颠茄(Atropa belladonna)H6H基因并构建高效植物表达载体。[方法]采用RT-PCR方法从颠茄中克隆莨菪碱-6β-羟化酶和1,4-丁二胺-氮-甲基转移酶基因编码区,插入经改造后获得双元三价植物高效表达载体p2301-gus,构建植物表达载体p... [目的]克隆颠茄(Atropa belladonna)H6H基因并构建高效植物表达载体。[方法]采用RT-PCR方法从颠茄中克隆莨菪碱-6β-羟化酶和1,4-丁二胺-氮-甲基转移酶基因编码区,插入经改造后获得双元三价植物高效表达载体p2301-gus,构建植物表达载体p2301-H6H,并将该表达载体导入根癌农杆菌LBA4404和发根农杆菌C58C1。[结果]获得了可直接用于遗传改良的颠茄工程菌p2301-H6H-LBA4404和p2301-H6H-C58C1。[结论]为利用植物基因工程技术提高颠茄中生物碱含量奠定了基础。 展开更多
关键词 颠茄 莨菪碱-6β-羟化酶 高效植物表达载体
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DREB1A基因植物表达载体的构建 被引量:23
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作者 李杰 李晶 +4 位作者 朱延明 张晶 代翠红 纪巍 才华 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2003年第2期199-204,共6页
以 p Bch质粒为基础 ,构建了分别由 35 s启动子、 rd2 9A启动子调控的 DREB1A基因双子叶植物表达载体p BD35 s、p BD2 9A,其植物选择标记为新霉素磷酸转移酶基因 (N PT ) ,适用于双子叶植物的遗传转化。以 p CU质粒为基础 ,构建了分别由... 以 p Bch质粒为基础 ,构建了分别由 35 s启动子、 rd2 9A启动子调控的 DREB1A基因双子叶植物表达载体p BD35 s、p BD2 9A,其植物选择标记为新霉素磷酸转移酶基因 (N PT ) ,适用于双子叶植物的遗传转化。以 p CU质粒为基础 ,构建了分别由 E12启动子、 rd2 9A启动子调控的 DREB1A基因单子叶植物表达载体 p CDE12、p CD2 9A,其植物选择标记为乙酰 Co A转移酶基因 (bar) ,适用于单子叶植物的遗传转化。并分别通过三亲本杂交法和冻融法将重组质粒导入根癌农杆菌 L BA4 4 0 4中 ,为通过农杆菌介导法将 展开更多
关键词 DREBlA基因 植物表达载体 基因构建 生长发育 水分胁迫 植株表现
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高山离子芥冷诱导基因转化甘蔗二元植物表达载体构建 被引量:6
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作者 卢双楠 李粲 +10 位作者 滕峥 刘开雨 刘芳 邱永福 梁朝旭 方位宽 何姗珊 刘晓静 李鸣 梁俊 李容柏 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1262-1268,共7页
【目的】利用载体重组技术分别将高山离子芥冷诱导基因(Cbcor15a)和报告基因eGFP插入载体pCambia1300-bar,并引入玉米泛素基因启动子UBi-1代替载体本身启动子CaMV35s,重组为适合甘蔗转基因的二元植物表达载体pCambia1300-cbcor15a-bar... 【目的】利用载体重组技术分别将高山离子芥冷诱导基因(Cbcor15a)和报告基因eGFP插入载体pCambia1300-bar,并引入玉米泛素基因启动子UBi-1代替载体本身启动子CaMV35s,重组为适合甘蔗转基因的二元植物表达载体pCambia1300-cbcor15a-bar。【方法】参照pCambia1300-bar载体多克隆位点和基因Cbcor15a、eGFP和启动子UBi-1的核苷酸序列设计引物,通过载体重组技术将基因和启动子分别插入相应的位点。利用基因枪分别将pCambia1300-bar载体和重组载体导入洋葱表皮细胞,用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察。【结果】与导入pCambia1300-bar载体的洋葱表皮细胞相比较,导入重组载体pCambia1300-cbcor15a-bar的洋葱表皮细胞内有强烈的绿色荧光信号。【结论】重组甘蔗转基因二元植物表达载体启动子Ubi-1能够调控下游冷诱导基因Cbcor15a和报告基因eGFP的正常高效表达,为外源基因Cbcor15a转化甘蔗提供保障。 展开更多
关键词 Cbcor15a 甘蔗 转基因 植物表达载体构建 瞬时表达
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草鱼呼肠孤病毒VP6蛋白基因植物表达载体的构建 被引量:6
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作者 周勇 范玉顶 +3 位作者 徐进 李艳秋 肖艺 曾令兵 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2009年第4期40-44,共5页
以据草鱼呼肠孤病毒(GCRV)VP6蛋白的全基因序列(GeneBank AF403394)为模板,采用RT-PCR构建了草鱼呼肠孤病毒VP6蛋白基因植物表达载体的构建。结果显示:实验构建的pCR 2.1-VP6重组质粒含有NcoⅠ和BglⅡ酶切位点;pCR 2.1-VP6重组质粒经PC... 以据草鱼呼肠孤病毒(GCRV)VP6蛋白的全基因序列(GeneBank AF403394)为模板,采用RT-PCR构建了草鱼呼肠孤病毒VP6蛋白基因植物表达载体的构建。结果显示:实验构建的pCR 2.1-VP6重组质粒含有NcoⅠ和BglⅡ酶切位点;pCR 2.1-VP6重组质粒经PCR扩增和测序显示含有1.3 Kbp的草鱼呼肠孤病毒VP6基因读码框片段。将目的片段VP6酶切、克隆到携带有绿色荧光蛋白(GFP)基因的植物表达载体pCAMBIA1302中,再经酶切、PCR扩增和序列测定显示,pCAMBIA1302-VP6含有1.3 Kbp的草鱼呼肠孤病毒VP6基因片段,说明已插入植物表达载体pCAMBIA1302绿色荧光蛋白基因前,成功构建了融合表达草鱼呼肠孤病毒VP6蛋白和绿色荧光蛋白的植物表达载体pCAMBIA1302-VP6。 展开更多
关键词 草鱼呼肠孤病毒 VP6基因 植物表达载体 构建
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高光效基因植物表达载体的构建 被引量:6
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作者 罗素兰 陈如凯 +1 位作者 潘大仁 林俊芳 《生物技术通报》 CAS CSCD 2003年第4期38-41,共4页
通过一系列中间载体的构建 ,将来自C4作物 (甘蔗 )光合作用中的关键酶基因 (高光效基因 )RbcS和PEPCase基因插入到植物表达质粒中 ,获得了具有卡那霉素抗性的RbcS植物表达载体 pC2 0SNR和具有PPT除草剂抗性的PEPCase基因的正义 (pC30SNP... 通过一系列中间载体的构建 ,将来自C4作物 (甘蔗 )光合作用中的关键酶基因 (高光效基因 )RbcS和PEPCase基因插入到植物表达质粒中 ,获得了具有卡那霉素抗性的RbcS植物表达载体 pC2 0SNR和具有PPT除草剂抗性的PEPCase基因的正义 (pC30SNP)和反义 (pC30SNPr)植物表达载体。再将这 3个载体分别转入农杆菌LBA4 4 0 4和A2 81或EHA10 5中 ,获得了适于C3 植物转化的农杆菌重组工程菌株。为进一步利用C4植物高光效基因转化C3 植物 ,以期提高光合效率提供基础。 展开更多
关键词 高光效基因 植物表达载体 构建 中间载体 光合作用 关键酶基因
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费尔干猪毛菜病程相关蛋白基因SfPR-1的表达规律和植物表达载体构建 被引量:5
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作者 王艳 陈西 +1 位作者 周莲洁 杨中敏 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期116-124,共9页
采用RT-PCR技术探究盐生植物费尔干猪毛菜病程相关蛋白基因SfPR-1(GenBank登录号:JQ670917)在不同发育时期、组织部位、植物激素、非生物胁迫及生物胁迫处理下的表达规律,以揭示该基因在费尔干猪毛菜生长发育和逆境胁迫下的作用。结果表... 采用RT-PCR技术探究盐生植物费尔干猪毛菜病程相关蛋白基因SfPR-1(GenBank登录号:JQ670917)在不同发育时期、组织部位、植物激素、非生物胁迫及生物胁迫处理下的表达规律,以揭示该基因在费尔干猪毛菜生长发育和逆境胁迫下的作用。结果表明,不同组织(根、茎、叶)中,SfPR-1在根中表达量最高,预示该基因可能在根防御中发挥主要作用;SfPR-1在不同发育阶段(种子、种子萌发20 d幼苗、种子萌发30 d幼苗、种子萌发40 d幼苗)的表达特性显示,种子萌发30 d幼苗时,其表达差异最显著,表明其可能在植株后期生长发育中具有重要作用;SfPR-1对不同植物激素(水杨酸SA、茉莉酸JA、脱落酸ABA、乙烯合成前体ACC)均产生了响应,表明该基因在几条主要的抗病防御通路中均发挥作用。非生物胁迫(H2O2、盐、旱、冷)都能够诱导SfPR-1基因的表达,其中对盐响应程度最高。以植源性意大利青霉(Penicillium italicum)进行生物胁迫时,SfPR-1表达呈持续上升趋势。以上结果表明费尔干猪毛菜病程相关蛋白基因SfPR-1是生物与非生物逆境胁迫下均响应的基因,推测其在植物抵御逆境胁迫中发挥重要作用。 展开更多
关键词 费尔干猪毛菜 SfPR-1基因 RT-PCR 表达模式 植物表达载体构建
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GFP-mut2植物表达载体的构建及在甜菊愈伤组织中的表达 被引量:2
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作者 熊玲媛 陈亮 +2 位作者 沈明山 黄胤怡 陈睦传 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期546-550,共5页
构建了GFP mut2的植物表达载体 ,在农杆菌的介导下使GFP mut2基因整合到甜菊核基因组中并得到了表达 ,从而建立了以绿色荧光蛋白基因为报告基因的根癌农杆菌介导的甜菊转基因系统 .
关键词 GFP-mut2 植物表达载体 甜菊 愈伤组织 绿色荧光蛋白基因 遗传转化 基因表达 载体构建 转基因系统
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马铃薯淀粉合成酶融合基因植物表达载体构建 被引量:2
11
作者 王颖 张金文 +1 位作者 王蒂 李洲 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期2163-2168,共6页
通过反义抑制马铃薯(Solanum tuberosumL.)块茎淀粉合成酶GBSS、SSⅡ和ssⅢ基因的表达,可降低淀粉中直链淀粉含量和改变分支链的长度,从而降低马铃薯淀粉糊化温度、改善其抗凝沉性。依据GBSS、SSⅡ和SSⅢ基因的cDNA序列分析,从各... 通过反义抑制马铃薯(Solanum tuberosumL.)块茎淀粉合成酶GBSS、SSⅡ和ssⅢ基因的表达,可降低淀粉中直链淀粉含量和改变分支链的长度,从而降低马铃薯淀粉糊化温度、改善其抗凝沉性。依据GBSS、SSⅡ和SSⅢ基因的cDNA序列分析,从各基因中筛选和克隆了一段同源性极低、约500~600bp的片段;通过PCR技术实现了3个片段的融合,得到了1671bp的融合基因GS:S3;将GS:S3反向连接在GBSS5′侧翼序列之后,构建了由GBSS5′侧翼序列驱动的GS2S3反义基因的植物表达载体pBI-GS2S3,并进行了初步转化。 展开更多
关键词 淀粉合成酶 马铃薯淀粉 基因植物 表达载体构建 CDNA序列分析 GBSS 直链淀粉含量 植物表达载体
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DDF2基因克隆及植物表达载体构建 被引量:3
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作者 段青 王博 +1 位作者 刘婵 黄海泉 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第6期47-49,共3页
采用CTAB法提取拟南芥叶片总DNA,根据已报道的DDF2基因序列设计并合成1对特异引物,通过PCR扩增得到1条约550bp的特异片段,把该片段连接到pGEM-TEasyVector上进行测序,结果表明:该基因编码区全长546bp,为开放阅读框,共编码氨基酸181个,... 采用CTAB法提取拟南芥叶片总DNA,根据已报道的DDF2基因序列设计并合成1对特异引物,通过PCR扩增得到1条约550bp的特异片段,把该片段连接到pGEM-TEasyVector上进行测序,结果表明:该基因编码区全长546bp,为开放阅读框,共编码氨基酸181个,与报道序列完全一致。并构建了以CaMV35S为启动子的植物表达载体pBI121-DDF2,采用冻融法将其转入根癌农杆菌,为后期该基因遗传转化花卉,改良花卉品质,并提高其抗逆性打下了一定的基础。 展开更多
关键词 DDF2 植物表达载体 载体构建
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sgna基因小麦高效表达载体的构建 被引量:3
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作者 侯文胜 郭三堆 路明 《西北植物学报》 CAS CSCD 2002年第5期1031-1037,共7页
利用在禾谷类作物中表达效率较高的启动子 Ubi对含目的基因 sgna的现有载体进行了改造 ,并引入筛选标记基因 bar;为提高目的基因的表达水平 ,在目的基因 5′端引入了Ω和 kozak序列 ,3′端引入了 poly( A)序列 ,成功构建了适用于小麦的... 利用在禾谷类作物中表达效率较高的启动子 Ubi对含目的基因 sgna的现有载体进行了改造 ,并引入筛选标记基因 bar;为提高目的基因的表达水平 ,在目的基因 5′端引入了Ω和 kozak序列 ,3′端引入了 poly( A)序列 ,成功构建了适用于小麦的抗虫基因植物表达载体p GU4AGBar和 p GBIU4AGBar。其中 p GU4AGBar含有顺向连接的 Ubi- sgna及 Ubi- bar基因表达盒 ,p GBIU4AGBar含有 T- DNA边界序列 ,并在其左右边界中间插入了含有顺向连接的 Ca MV35 S- npt 、Ubi- sgna和 Ubi- bar基因表达盒。 展开更多
关键词 抗虫基因 sgna基因 小麦 高效表达载体 构建
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油茶DGAT1基因植物表达载体的构建 被引量:3
14
作者 刘凯 江泽鹏 +3 位作者 叶航 曾雯郡 王冬雪 梁文汇 《林业科技开发》 北大核心 2014年第1期88-90,共3页
DGAT酶是三酰甘油(TAG)合成的Kennedy途径中唯一的限速酶,因此直接影响三酰甘油(TAG)的累积。本研究在已克隆分离到Co-DGAT1基因全长cDNA序列的前期基础上,利用含有双酶切位点的特异引物扩增出Co-DGAT1基因的开放读码框,定向克隆到植物... DGAT酶是三酰甘油(TAG)合成的Kennedy途径中唯一的限速酶,因此直接影响三酰甘油(TAG)的累积。本研究在已克隆分离到Co-DGAT1基因全长cDNA序列的前期基础上,利用含有双酶切位点的特异引物扩增出Co-DGAT1基因的开放读码框,定向克隆到植物转化载体pBI121中,并采用冻融法导入农杆菌LBA4404,为进一步通过转基因技术研究该基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 油茶 DGAT1 植物表达载体 构建
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3种不同启动子构建ACC脱氨酶基因植物表达载体 被引量:2
15
作者 黄海泉 黄美娟 +3 位作者 范志祥 李建永 刘璇 刘飞虎 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期706-710,共5页
从阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)UW4菌株克隆出ACC脱氨酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylicacid deaminase)基因连接至pGEM-Tvector上,并采用3种不同启动子(组成型表达启动子CaMV35S、花特异表达启动子CHSA及衰老特异表达启动子SAG... 从阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)UW4菌株克隆出ACC脱氨酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylicacid deaminase)基因连接至pGEM-Tvector上,并采用3种不同启动子(组成型表达启动子CaMV35S、花特异表达启动子CHSA及衰老特异表达启动子SAG12)分别构建ACC脱氨酶基因的植物表达载体,经PCR及酶切鉴定均已构建成功,为后期选择不同的花卉等植物材料遗传转化研究打下基础。 展开更多
关键词 ACC脱氨酶基因 花特异表达启动子 衰老特异表达启动子 植物表达载体构建
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三角叶滨藜甜菜碱醛脱氢酶基因克隆及植物表达载体的构建 被引量:3
16
作者 何晓兰 吴纪中 +4 位作者 刘桂华 张保龙 钦佩 侯喜林 朱卫民 《江苏农业学报》 CSCD 2003年第4期237-241,共5页
 通过RT PCR技术从盐生植物三角叶滨藜总RNA中,扩增并克隆了BADH68基因。该基因全序列显示,核苷酸序列长1520bp,12~1515bp为1个开放阅读框架,推测的氨基酸序列全长为500个氨基酸残基,其核苷酸序列与菠菜和山菠菜同源性分别为89%和95%...  通过RT PCR技术从盐生植物三角叶滨藜总RNA中,扩增并克隆了BADH68基因。该基因全序列显示,核苷酸序列长1520bp,12~1515bp为1个开放阅读框架,推测的氨基酸序列全长为500个氨基酸残基,其核苷酸序列与菠菜和山菠菜同源性分别为89%和95%。利用BamHI和SacI酶切位点将BADH68基因连接到pCAMBI A2301的多克隆位点,并把35S启动子和nos终止子分别连接到BADH基因的上游和下游的多克隆位点上,获重组植物表达质粒pCAMATBADH682,并转入根癌农杆菌LBA4404中,获LBA4404(pCBAMATBADH682)菌种。 展开更多
关键词 三角叶滨藜 甜菜碱醛脱氢酶 基因克隆 植物表达载体 基因构建
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玉米ZmSUT4基因RNAi植物表达载体的构建 被引量:2
17
作者 弓雪 姜敏 +4 位作者 齐欣 李明 马骏 刘欣芳 王延波 《江苏农业科学》 北大核心 2016年第7期42-44,共3页
蔗糖转运蛋白(sucrose transporters,SUCs或SUTs)是蔗糖装载、卸载、分配的重要载体,Zm SUT4是玉米低亲和、高转运能力SUT4亚族的唯一成员。以黄早四Zm SUT4全长c DNA序列为模板,设计带有限制性内切酶位点的特异性引物,PCR扩增获得正向... 蔗糖转运蛋白(sucrose transporters,SUCs或SUTs)是蔗糖装载、卸载、分配的重要载体,Zm SUT4是玉米低亲和、高转运能力SUT4亚族的唯一成员。以黄早四Zm SUT4全长c DNA序列为模板,设计带有限制性内切酶位点的特异性引物,PCR扩增获得正向、反向2个片段,将反向、正向片段双酶切后依次插入p Green-HY104植物表达载体中,从而构建由35S启动子调控的Zm SUT4基因RNA干扰(RNAi)的植物表达载体HY104-A-S,然后通过冻融法将载体质粒转入含有p Soup质粒的农杆菌EHA105中。Zm SUT4基因RNAi的植物表达载体的构建为研究Zm SUT4基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 玉米 ZmSUT4基因 RNAi植物表达 载体构建
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TNF受体(P55)胞外区和IgGFc嵌合蛋白高效原核表达载体的构建 被引量:2
18
作者 祖东 徐春晓 +1 位作者 张智清 谭锦泉 《安徽医科大学学报》 CAS 2002年第2期89-92,共4页
目的 构建TNF受体 (P5 5 )胞外区和IgGFc嵌合蛋白的高效原核表达载体。方法 以人心肌cDNA文库为模板 ,PCR扩增TNF受体 (P5 5 )胞外区全基因 (sTNFR ED) ,亚克隆入pGEM T/IgGFc中构建 pGEM T/sTNFR ED∶Ig GFc重组子 ,然后以其为模板 ... 目的 构建TNF受体 (P5 5 )胞外区和IgGFc嵌合蛋白的高效原核表达载体。方法 以人心肌cDNA文库为模板 ,PCR扩增TNF受体 (P5 5 )胞外区全基因 (sTNFR ED) ,亚克隆入pGEM T/IgGFc中构建 pGEM T/sTNFR ED∶Ig GFc重组子 ,然后以其为模板 ,在上游引物中引入原核细胞高频密码子 ,再次PCR扩增去信号肽TNF受体 (P5 5 )胞外区和IgGFc嵌合基因 (TNFR ED∶IgGFc) ,亚克隆入 pUC19载体 ,经序列测定正确后克隆入原核表达载体 pBV2 2 0中。结果 成功构建了TNF受体 (P5 5 )胞外区和IgGFc嵌合蛋白高效原核表达载体 ,命名为 pBV2 2 0 /TNFR ED∶IgGFc。结论 pBV2 2 0 /TNFR ED∶IgGFc表达载体的构建 ,为进一步表达TNF受体 (P5 5 )胞外区和IgGFc嵌合蛋白及其在中和TNF毒副作用。 展开更多
关键词 TNF受体 IgGFc 嵌合蛋白 高效原核表达 载体 构建
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大豆抗病相关基因SR1正反义植物表达载体的构建及遗传转化研究 被引量:3
19
作者 林世锋 张淑珍 +3 位作者 杨秀红 陈庆山 杨庆凯 李文滨 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期90-94,共5页
实验构建了CaMV35S启动子控制下的大豆抗病相关基因SR1的正反义植物双元表达载体pBISR1(+)和pBISR1(-)。通过根癌农杆菌叶盘转化法,将正义和反义SR1 基因导入烟草Ha vana 425,经卡那霉素筛选,获得了抗性植株。经PCR和PCR-Southern印迹分... 实验构建了CaMV35S启动子控制下的大豆抗病相关基因SR1的正反义植物双元表达载体pBISR1(+)和pBISR1(-)。通过根癌农杆菌叶盘转化法,将正义和反义SR1 基因导入烟草Ha vana 425,经卡那霉素筛选,获得了抗性植株。经PCR和PCR-Southern印迹分析,证明抗性植株中整和了SR1基因,RT-PCR分析进一步表明正义和反义基因皆能转录为完整的mRNA,经疫霉根腐接种及抗病性鉴定表明,转反义基因株系和未转基因株系均轻微感病,而转正义基因株系始终没有出现感病症状。 展开更多
关键词 抗病相关基因 反义植物表达载体 遗传转化 构建 大豆 双元表达载体 35S启动子 抗性植株 反义基因 PCR分析 抗病性鉴定 CaMV 基因导入 卡那霉素 mRNA 正义基因 转化法 株系 转基因 感病 根癌 烟草 接种 根腐 疫霉
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滇龙胆GrWRKY5基因的克隆和植物表达载体构建 被引量:1
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作者 王彩云 李富生 +3 位作者 李涛 李彩霞 张晓东 王元忠 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期741-747,共7页
WRKY蛋白是目前被广泛研究的一类DNA特异结合转录因子,在植物次生代谢物生物合成、植物生长和发育及衰老等生理过程以及生物、非生物防御反应中起重要的调控作用。该研究从滇龙胆幼叶中克隆萜类合成的关键转录因子基因Gr WRKY5,并利用... WRKY蛋白是目前被广泛研究的一类DNA特异结合转录因子,在植物次生代谢物生物合成、植物生长和发育及衰老等生理过程以及生物、非生物防御反应中起重要的调控作用。该研究从滇龙胆幼叶中克隆萜类合成的关键转录因子基因Gr WRKY5,并利用生物信息学方法对基因功能进行预测,构建植物过表达载体。结果表明:根据三年生滇龙胆转录组Gr WRKY5基因序列,设计特异性引物,通过RT-PCR扩增Gr WRKY5 ORF序列,并进行TA克隆、测序和序列分析;构建入门载体p ENTRTM2B-Gr WRKY5,经LR反应后构建植物过表达载体。Gr WRKY5 ORF全长591 bp,编码196个氨基酸,Gen Bank登录号为KF922375,其中第167与170之间的色氨酸(W)、精氨酸(R)、赖氨酸(K)、酪氨酸(Y)组成WRKY蛋白所特有的"WRKY"结构。序列分析表明Gr WRKY5是WRKY超家族的成员。经生物信息学在线软件分析发现,Gr WRKY5的等电点为6.29,脂肪族指数为61.37,不稳定指数为57.80。总平均疏水性为-0.708,为亲水蛋白;含有20种氨基酸,其中天冬氨酸(Asp)和脯氨酸(Pro)含量最高,为8.1%;半胱氨酸(Cys)含量最低,仅为1.0%。氨基酸序列系统发育分析表明,Gr WRKY5与拟南芥中WRKY家族中遗传距离最接近的是WRKY27,属于Ⅱe类成员;与Cr WRKY22和Vv WRKY22蛋白的亲缘关系较近;与Jc WRKY47和Tc WRKY27亲缘关系较远;BLASTp结果显示,Gr WRKY5与欧洲油菜Bn WRKY27-1的同源性最高(为69%);与拟南芥Aa WRKY22的一致性最低(仅为31%)。以Gateway入门载体p ENTR2B和目的载体p K2GW7为基础,成功构建了植物过表达载体p K2-35S-Gr WRKY5,该载体的成功构建为该基因在拟南芥、滇龙胆等植物中的遗传转化奠定了基础,同时为WRKY基因功能的深入研究提供依据。 展开更多
关键词 滇龙胆 GrWRKY5 基因克隆 序列分析 植物表达载体构建
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