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雅致放射毛霉羧肽酶Y在毕赤酵母中的高效分泌表达
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作者 张欢欢 陈昶旭 +1 位作者 刘中美 周哲敏 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1-6,共6页
分别构建以2种启动子表达雅致放射毛霉羧肽酶Y的重组毕赤酵母菌株GS115,通过提高抗生素浓度筛选到具有不同拷贝数羧肽酶Y基因的重组菌株,通过对蛋白表达量的比较筛选出高效分泌表达菌株。在筛选得到的重组菌株中共表达伴侣蛋白binding p... 分别构建以2种启动子表达雅致放射毛霉羧肽酶Y的重组毕赤酵母菌株GS115,通过提高抗生素浓度筛选到具有不同拷贝数羧肽酶Y基因的重组菌株,通过对蛋白表达量的比较筛选出高效分泌表达菌株。在筛选得到的重组菌株中共表达伴侣蛋白binding protein(BIP)、protein disulfide isomerase(PDI)、endoplasmic oxidoreductin 1(ERO1),分别将羧肽酶Y酶原的分泌表达量提高到1. 87倍、1. 72倍和1. 26倍。体外羧肽酶Y酶原可以由胰蛋白酶激活。该研究实现了雅致放射毛霉羧肽酶Y在毕赤酵母中的高效分泌表达,为其工业化应用提供了技术支持。 展开更多
关键词 羧肽酶Y 毕赤酵母 表达 高效分泌表达
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传染性法氏囊病毒免疫原基因在毕赤酵母中的高效分泌表达 被引量:2
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作者 蓝胜芝 徐素珍 +3 位作者 李宝臣 曹玉飞 赵艳敏 金顺福 《中国动物检疫》 CAS 2013年第9期50-55,共6页
从国内分离的鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)众多流行株中获得超强毒株(vvIBDV),应用RT-PCR方法,扩增得到IBDV主要保护性抗原VP2基因的开放编码框,克隆至巴斯德毕赤酵母表达载体pPICZαA,将该重组质粒pPICZαA-VP2以电转化方法转入毕赤酵母X... 从国内分离的鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)众多流行株中获得超强毒株(vvIBDV),应用RT-PCR方法,扩增得到IBDV主要保护性抗原VP2基因的开放编码框,克隆至巴斯德毕赤酵母表达载体pPICZαA,将该重组质粒pPICZαA-VP2以电转化方法转入毕赤酵母X-33感受态细胞中,通过PCR鉴定、表型筛选和抗生素浓度梯度筛选,获得高拷贝阳性重组酵母菌株X-33-pPICZαA-VP2。经摇瓶诱导表达试验获得稳定高效分泌表达的酵母工程菌,表达量为0.459mg/ml,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫印迹(Western-blot)以及动物试验表明,重组酵母工程菌表达的目的蛋白具有鸡传染性法氏囊病病毒天然蛋白的生物活性和免疫原性。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病(IBD) 超强毒株VP2 巴斯德毕赤酵母 高效分泌表达
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融合蛋白和密码子优化策略提高真菌漆酶在黑曲霉中的表达
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作者 张宇鑫 刘雨 +3 位作者 于涛 赵佳东 付欣哲 李杰 《东北农业大学学报》 CSCD 北大核心 2024年第8期151-159,231,共10页
试验通过融合蛋白和密码子优化策略提高2种真菌漆酶,即灵芝(Ganoderma Karst)漆酶和硬毛粗盖孔菌(Funalia trogii)漆酶在黑曲霉中的分泌表达量。通过对重组菌株进行蛋白水平、转录水平、菌体形态学检测,探究融合蛋白和密码子优化策略对... 试验通过融合蛋白和密码子优化策略提高2种真菌漆酶,即灵芝(Ganoderma Karst)漆酶和硬毛粗盖孔菌(Funalia trogii)漆酶在黑曲霉中的分泌表达量。通过对重组菌株进行蛋白水平、转录水平、菌体形态学检测,探究融合蛋白和密码子优化策略对漆酶表达的影响,旨在找出提高蛋白产量的有效策略,构建高效表达漆酶的黑曲霉重组菌株,为低表达蛋白在黑曲霉中的高效表达提供新思路。结果表明:通过融合蛋白策略,以黑曲霉内源高分泌蛋白XynB、FaeA作为载体蛋白,将硬毛粗盖孔菌漆酶的分泌表达量分别提高33.41倍、30.43倍,灵芝漆酶分泌表达量分别提高0.45倍、0.74倍。根据黑曲霉密码子使用偏好性对漆酶基因进行密码子优化,灵芝漆酶分泌表达量提高0.35倍,但硬毛粗盖孔菌漆酶分泌表达量显著降低。 展开更多
关键词 硬毛粗盖孔菌漆酶 灵芝漆酶 黑曲霉 优化表达策略 高效分泌表达
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水产健康养殖防病和促生长用生物制剂
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作者 周志刚 张黎 +1 位作者 杨华莲 徐晓玲 《中国水产》 2017年第7期99-99,共1页
本项目立足于促生长用抗生素替代及药用抗生素减量使用,针对传统抗生素替代品益生菌饲用改善不稳定问题,重点开发防病和促生长用水产动物消化道微生物益生元件,创建信号肽库筛选联合胞内蛋白酶敲除枯草芽孢杆菌高效分泌表达平台,克... 本项目立足于促生长用抗生素替代及药用抗生素减量使用,针对传统抗生素替代品益生菌饲用改善不稳定问题,重点开发防病和促生长用水产动物消化道微生物益生元件,创建信号肽库筛选联合胞内蛋白酶敲除枯草芽孢杆菌高效分泌表达平台,克服后功能基因时代普遍存在的难表达及低分泌表达等产业化障碍,实现淬灭酶(防治细菌病)和几丁质降解酶(防治寄生虫病及促进生长)的产业化生产,淬灭酶AiiO-AIO6具有耐高温、高比活及枯草芽孢中分泌表达的性能,共浴可抑制A.hydrophia毒力因子表达,且不影响其正常生长,具有防治鱼类养殖革兰氏阴性细菌性病害的功能;几丁质酶ChiCD3可显著降解寄生虫孢子壳瓣(共浴破壁率>35%);获得高降解虾壳几丁质的ChiB565和具有几丁质酶和β-1,3-1,4-葡聚糖酶活的高比活双功能酶Chi92,采用枯草芽孢杆菌高分泌的几丁质氧化水解酶极大提高几丁质酶降解几丁质能力,以上研究有效解决我国水产养殖中细菌和寄生虫病害防治以及废弃虾蟹壳粉资源化问题,促进水产健康养殖,提高首都水产品的安全卫生质量,在首都水产养殖业环境保护和保障首都人民健康方面具有重要意义。 展开更多
关键词 水产健康养殖 促生长 生物制剂 防病 高效分泌表达 枯草芽孢杆菌 抗生素替代品 几丁质酶
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