高效液相体积排阻色谱法定量检测重组猪伪狂犬病毒gD蛋白

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作者 陈晓洁 师小潇 +4 位作者 张承凤 黎明 师伟伟 杨延丽 贺笋 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2025年第1期25-32,共8页

本试验旨在建立高效液相体积排阻色谱(HPSEC)法进行重组猪伪狂犬病毒囊膜糖蛋白gD的定量质控并评价其应用,进一步扩展该方法在兽用疫苗领域的应用范围。制备并鉴定gD蛋白标准品,检测其在保存过程中的稳定性;采用HPSEC法定量检测gD蛋白... 本试验旨在建立高效液相体积排阻色谱(HPSEC)法进行重组猪伪狂犬病毒囊膜糖蛋白gD的定量质控并评价其应用,进一步扩展该方法在兽用疫苗领域的应用范围。制备并鉴定gD蛋白标准品,检测其在保存过程中的稳定性;采用HPSEC法定量检测gD蛋白并鉴定其色谱峰;建立HPSEC法检测gD蛋白标准品的标准曲线,并进行线性、检测限、准确度和精密度验证;考察HPSEC法定量检测细胞培养料液样品、纯化样品和乳化样品中gD蛋白浓度的适用性;对比HPSEC法和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法定量gD蛋白结果的相关性。结果显示,制备的gD蛋白标准品纯度>98%,可稳定存放12个月,浓度偏差为0.01%~2.80%。HPSEC法具有良好的线性(R^(2)=0.9999,n=8);检测限在5.0μg/mL以下;准确度较高,5个浓度的gD蛋白标准品检测准确度为93.2%~104.6%(n=6);精密度良好,5个浓度的gD蛋白标准品6次重复检测的相对标准偏差(RSD)为0.2%~1.6%(n=6);日间精密度良好,3批次细胞培养料液样品3 d各6次重复检测的RSD为1.1%~2.0%(n=6);可应用于细胞培养过程中gD蛋白在细胞培养料液样品中表达量的监测,纯化样品和乳化样品中gD蛋白的检测。分别采用HPSEC法和SDS-PAGE法定量12批细胞培养料液样品中gD蛋白浓度,2种方法结果高度正相关(Rs^(2)=0.9298,n=12),配对t检验无显著性差异(Ps=0.1457)。结果表明,HPSEC法定量检测猪伪狂犬病毒gD蛋白适用性好、重复性好、准确度高,能应用于抗原生产不同阶段样品的质量控制,指导疫苗工艺开发。 展开更多

关键词 高效液相体积排阻色谱(HPSEC) 猪伪狂犬病毒(PRV) gD蛋白 疫苗 定量

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高效体积排阻色谱法测定改性柑橘果胶的分子质量 被引量：12

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作者 张文博 高林 +1 位作者 施秀芳 张启来 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期711-714,共4页

改性柑橘果胶(MCP)是一种具有抗肿瘤细胞生长、侵袭和转移活性的多糖。由于多糖的分子质量对其活性有很大的影响,因而需要测定其分子质量。选择的色谱条件为:TSKG3000PWXL色谱柱,以50mmol/L醋酸铵缓冲液为流动相,流速为0.5mL/min,柱温... 改性柑橘果胶(MCP)是一种具有抗肿瘤细胞生长、侵袭和转移活性的多糖。由于多糖的分子质量对其活性有很大的影响,因而需要测定其分子质量。选择的色谱条件为:TSKG3000PWXL色谱柱,以50mmol/L醋酸铵缓冲液为流动相,流速为0.5mL/min,柱温为40℃,样品质量浓度为10g/L,进样体积为20μL,示差折光检测器检测。采用Pullulan糖标准品,经校正获得回归方程,通过回归方程计算得到的MCP平均相对分子质量为:Mn为21000,Mp为46000,Mw为43000,Mz为66000。MCP的多分散性指数(PD)为2。该方法具有良好的重现性,而且简便、快速,为MCP的生产工艺、质量控制和组效关系等的研究提供了实用的分析检测手段。 展开更多

关键词 高效体积排阻色谱 改性柑橘果胶 多糖 分子质量

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高效凝胶排阻色谱法测定大豆多肽相对分子质量分布及不确定度评估 被引量：2

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作者 武利庆 王晶 杨彬 《计量学报》 CSCD 北大核心 2010年第5期476-480,共5页

采用高效凝胶排阻色谱法测定大豆多肽保健品的肽相对分子质量分布。通过优化标准物质的选择和流动相组成比例等测定条件，考察方法的日内和日间精密度。以相对分子质量标准物质制作标准曲线，对大豆多肽中100～1000分子量范围的多肽分... 采用高效凝胶排阻色谱法测定大豆多肽保健品的肽相对分子质量分布。通过优化标准物质的选择和流动相组成比例等测定条件，考察方法的日内和日间精密度。以相对分子质量标准物质制作标准曲线，对大豆多肽中100～1000分子量范围的多肽分布进行了测定，测定结果的扩展不确定度为9.2，测量结果可表示为（63．3±9．2）％。 展开更多

关键词 计量学 多肽 高效凝胶排阻液相色谱 不确定度 标准物质

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杜氏盐藻多糖的高效体积排阻色谱的保留特性及其分析方法的研究 被引量：12

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作者 戴军 尹鸿萍 +4 位作者 陈尚卫 朱松 顾小红 王旻 汤坚 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期560-565,共6页

通过对从杜氏盐藻中提取出的不同多糖级分在高效体积排阻色谱柱(Waters Ultrahydragel Linear,7.8 mmi.d.×300 mm,2根串联)上的保留特性的考察及其分离分析条件的优化,建立了高效体积排阻色谱分析盐藻多糖平均相对分子质量及其分... 通过对从杜氏盐藻中提取出的不同多糖级分在高效体积排阻色谱柱(Waters Ultrahydragel Linear,7.8 mmi.d.×300 mm,2根串联)上的保留特性的考察及其分离分析条件的优化,建立了高效体积排阻色谱分析盐藻多糖平均相对分子质量及其分布的方法。结果表明:流动相中盐的种类及其浓度、pH值对3种酸性多糖级分(特别是硫酸化多糖级分PD4a)的保留行为有显著影响;在柱温为45℃,流速为0.9 mL/min条件下,使用0.1 mol/L的NaAc水溶液作流动相基本上能消除非特异性吸附作用及分子间缔合等因素的干扰,使各多糖级分基本以非缔合状态按立体排除机制保留和分离。在优化的色谱条件下,测得的盐藻多糖5个级分的重均相对分子质量(Mw)分别为1 548 000,33 000,67 000,424 000,10 000;测得的硫酸化多糖级分PD4a的Mw和峰面积的相对标准偏差分别为1.7%和0.88%(n=5)。 展开更多

关键词 高效体积排阻色谱 相对分子质量分布 多糖 杜氏盐藻

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高效体积排阻色谱测定油脂中氧化甘油三酯聚合物 被引量：33

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作者 曹文明 薛斌 +4 位作者 王文高 陈风香 陈卫栋 金青哲 王兴国 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期57-59,共3页

为了分析甘油三酯氧化产物——氧化甘油三酯及其聚合物的组分分布,研究了高效体积排阻色谱检测高相对分子质量聚合物的方法,建立了采用正相硅胶制备色谱预分离油脂中极性组分,极性组分以高效体积排阻色谱-示差折光检测器测定,标准相对... 为了分析甘油三酯氧化产物——氧化甘油三酯及其聚合物的组分分布,研究了高效体积排阻色谱检测高相对分子质量聚合物的方法,建立了采用正相硅胶制备色谱预分离油脂中极性组分,极性组分以高效体积排阻色谱-示差折光检测器测定,标准相对分子质量聚苯乙烯定性,峰面积归一化法定量的检测方法。油脂中极性组分的典型色谱峰构成是:氧化甘油三酯寡聚合体、氧化甘油三酯二聚体、氧化甘油三酯单体、甘油二酯、游离脂肪酸等。以氧化甘油三酯聚合物鉴别地沟油等深度氧化劣变食用油具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 高效体积排阻色谱 甘油三酯 氧化甘油三酯 氧化甘油三酯聚合物 极性组分 地沟油

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体积排阻高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法同时测定印度芥菜(Brassica Juncea)中镉铜锌形态 被引量：5

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作者 杨红霞 刘崴 +3 位作者 李冰 魏巍 张惠娟 陈登云 《岩矿测试》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期9-13,共5页

建立了体积排阻高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法同时测定印度芥菜中镉、铜、锌形态分析方法。为了防止巯基化合物氧化反应的发生,样品采取液氮保护并在-70℃保存,样品分析全流程采取氮吹防氧化措施。在镉、铜、锌胁迫下,诱导产生... 建立了体积排阻高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法同时测定印度芥菜中镉、铜、锌形态分析方法。为了防止巯基化合物氧化反应的发生,样品采取液氮保护并在-70℃保存,样品分析全流程采取氮吹防氧化措施。在镉、铜、锌胁迫下,诱导产生植物螯合肽(PCs)。在叶片和根部均检测到3种元素的4种形态,植物螯合肽(PC)3-Cd(Cu,Zn)、植物螯合肽(PC)2-Cd(Cu,Zn)、谷胱甘肽(GSH)-Cd(Cu,Zn)、半胱胺酸(Cys)-Cd(Cu,Zn)及其在植物体内的分布规律。结合植物不同部位Cd、Cu、Zn分布规律初步推断,Cd、Cu、Zn在与GSH及Cys的结合上存在竞争。 展开更多

关键词 形态分析 镉 铜 锌 印度芥菜 体积排阻高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法

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应用高效体积排阻色谱法测定市场抽检口蹄疫灭活疫苗中的抗原(146S)含量 被引量：7

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作者 徐嫄 邹兴启 +10 位作者 刘晓东 李翠 朱元源 李阳 万建青 何天慈 徐璐 张乾义 王琴 郑金来 赵启祖 《中国兽药杂志》 2018年第1期7-12,共6页

应用高效体积排阻色谱法对5批市场抽检口蹄疫灭活疫苗中有效抗原(146S)含量进行检测,并使用口蹄疫O型、A型和亚洲1型抗原测试卡对5批疫苗中的抗原进行鉴别。结果显示高效体积排阻色谱法测定146S标准品浓度与峰面积线性关系良好,5批疫苗... 应用高效体积排阻色谱法对5批市场抽检口蹄疫灭活疫苗中有效抗原(146S)含量进行检测,并使用口蹄疫O型、A型和亚洲1型抗原测试卡对5批疫苗中的抗原进行鉴别。结果显示高效体积排阻色谱法测定146S标准品浓度与峰面积线性关系良好,5批疫苗均检测到146S特征吸收峰(R2=0.9937,n=7),经计算得到灭活疫苗中有效抗原含量分别为2.05、3.73、2.03、4.87、3.41μg/m L;使用抗原测试卡鉴别了5批疫苗中的抗原类型。结果表明,高效体积排阻色谱法简便、高效,准确度较高,有望在口蹄疫灭活疫苗的质量控制中发挥重要作用。 展开更多

关键词 高效体积排阻色谱 口蹄疫 灭活疫苗 146S

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高效体积排阻色谱检测口蹄疫灭活疫苗中146S抗原含量的疫苗破乳方法比较

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作者 徐嫄 王兆 +10 位作者 朱元源 李翠 邹兴启 朱利敏 万建青 王琴 郎洪武 夏应菊 徐璐 张乾义 赵启祖 《中国兽药杂志》 2020年第2期22-28,共7页

为提高高效体积排阻色谱检测口蹄疫灭活疫苗146S抗原含量的准确性、适用性和操作性,分别采用正戊醇、正丁醇和三氯甲烷对9批口蹄疫灭活疫苗进行破乳处理,对三种方法的破乳后水相得率和146S抗原含量的色谱检测结果进行比较。结果表明,破... 为提高高效体积排阻色谱检测口蹄疫灭活疫苗146S抗原含量的准确性、适用性和操作性,分别采用正戊醇、正丁醇和三氯甲烷对9批口蹄疫灭活疫苗进行破乳处理,对三种方法的破乳后水相得率和146S抗原含量的色谱检测结果进行比较。结果表明,破乳后水相得率分别为:正戊醇38%~49%,正丁醇42%~44%,三氯甲烷50%;9批疫苗的色谱结果均检测到146S特征峰,146S含量在0.7~12.5μg/mL,3次测定的相对标准偏差最大值为4.0%,9批疫苗不同前处理方法的检测结果均值具有统计学意义,三氯甲烷组与正戊醇组数据一致性强,正丁醇组测定值偏低。使用三氯甲烷对疫苗进行破乳,不仅操作简便快速,而且破乳水相得率稳定,是最优的破乳方法。实验进一步优化了口蹄疫灭活疫苗146S抗原含量检测的高效体积排阻色谱法,为该方法的科学应用提供了数据支撑。 展开更多

关键词 口蹄疫 灭活疫苗 146S 高效体积排阻色谱 破乳

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高效体积排阻色谱测定氧化甘油三酯聚合物相对分子质量 被引量：4

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作者 薛斌 曹文明 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期87-90,共4页

摘要：通过将油脂的极性组分分离提取后，采用高效体积排阻凝胶色谱技术，以标准相对分子质量的聚苯乙烯为标准对照，对2个精炼餐厨废油脂样品（1个泔水油和1个煎炸老油）的极性组分中氧化甘油三酯二聚物（TGD）、氧化甘油三酯寡聚物（... 摘要：通过将油脂的极性组分分离提取后，采用高效体积排阻凝胶色谱技术，以标准相对分子质量的聚苯乙烯为标准对照，对2个精炼餐厨废油脂样品（1个泔水油和1个煎炸老油）的极性组分中氧化甘油三酯二聚物（TGD）、氧化甘油三酯寡聚物（TGO）和氧化甘油三酯（Ox—TG）单体的相对分子质量进行了间接测定，再用三油酸甘油酯标准物质对测定的相对分子质量进行校正，同时考察TGO、TGD与Ox—TG单体的平均相对分子质量（质均）的关系。结果发现：TGD的平均相对分子质量要比Ox—TG单体平均相对分子质量的2倍小80～105，TGO的平均相对分子质量比Ox—TG单体平均相对分子质量的3倍小180—225。 展开更多

关键词 高效体积排阻色谱 氧化甘油三酯聚合物 相对分子质量 地沟油

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三酰甘油氧化聚合物的制备型快速柱层析-体积排阻色谱测定法 被引量：11

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作者 曹文明 薛斌 +2 位作者 陈凤香 金青哲 王兴国 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期933-939,共7页

建立了一种简便、灵敏、无需内标的检测油脂中三酰甘油氧化聚合物(TGP)的分析方法。以制备型快速层析柱(PFC)(flash硅胶柱,20 g,40～60μm,6 nm)分离1 g油脂样品中极性组分(PC),经高效体积排阻色谱(HPSEC)(GPC柱,Ф7.8 mm×300 mm,... 建立了一种简便、灵敏、无需内标的检测油脂中三酰甘油氧化聚合物(TGP)的分析方法。以制备型快速层析柱(PFC)(flash硅胶柱,20 g,40～60μm,6 nm)分离1 g油脂样品中极性组分(PC),经高效体积排阻色谱(HPSEC)(GPC柱,Ф7.8 mm×300 mm,粒径5μm,孔径10 nm)将PC细分为氧化三酰甘油寡聚物(TGO)、氧化三酰甘油二聚物(TGD)、氧化三酰甘油单体(ox-TGM)、二酰甘油(DG)、游离脂肪酸(FFA)。结合重量法测定油脂中PC、面积归一法测定PC中TGP,可准确定量油脂中的TGP含量。结果表明,TGO、TGD分别在28～1 800、11～2 800 mg/L范围内线性关系良好,相关系数(r2)分别为0.998 2、0.998 7,TGO及TGD的检出限(LOD)分别为28、11 mg/L,定量下限(LOQ)分别为113、44 mg/L;相当于油脂中TGP的LOD为0.01%。PFC-HPSEC法检测油脂TGP的相对标准偏差(RSD)均小于10%。PFC对3个PC加标水平(2.27%、8.47%、30.94%)的平均回收率为95%～98%,相对标准偏差(RSD)均低于4%。PFC-HPSEC方法与经典的硅胶柱-HPSEC方法定量油脂TGP的结果吻合度高,相对误差为0～8.9%。该方法能够在2 h内实现各种油脂中TGP含量的定量检测,包括使用过的废弃油脂与未使用的食用油脂,尤其适用于低含量TGP的初榨油和精炼油脂。 展开更多

关键词 油脂 三酰甘油氧化聚合物 极性组分 制备型快速柱层析 高效体积排阻色谱 凝胶渗透色谱

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凝胶排阻色谱-多角度激光散射法测定破伤风类毒素相对分子质量分布 被引量：1

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作者 马庆华 朱向国 +2 位作者 郑佳 刘刚 杜琳 《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期739-742,共4页

为更好地表征精制破伤风类毒素(精制TT)相对分子质量分布的情况,利用凝胶排阻色谱与多角度激光散射仪联用法(SEC-MALS法)对精制破伤风类毒素分子质量及其分布进行了初步探索。通过优化实验参数,确定了最佳实验条件:流动相为0.2 mol/L磷... 为更好地表征精制破伤风类毒素(精制TT)相对分子质量分布的情况,利用凝胶排阻色谱与多角度激光散射仪联用法(SEC-MALS法)对精制破伤风类毒素分子质量及其分布进行了初步探索。通过优化实验参数,确定了最佳实验条件:流动相为0.2 mol/L磷酸盐缓冲液-1%异丙醇(pH=7.0)(PBS),样品浓度为2.0 mg/mL,柱温为25℃,流速为0.5mL/min。与聚丙烯酰胺凝胶电泳法相比,SEC-MALS法能够提供准确的精制TT单体分子质量测量值。此外,SEC-MALS法能够得到质均相对分子质量Mw、数均相对分子质量Mn以及二者的比值——多分散性Mw/Mn等重要物理参数,可以更加准确地反映精制TT溶液中单聚体、二聚体、多聚体分布状态,可以量化分子大小批间差异情况,有利于评价精制TT生产过程中的工艺调整或变化对蛋白单体收率的影响,当作为多糖蛋白结合疫苗常用的载体蛋白时,有利于以准确可量化的质量参数参与结合物的关键工艺控制。 展开更多

关键词 破伤风类毒素 相对分子质量分布 凝胶排阻色谱与多角度激光散射仪联用法

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色氨酸在TOYOPEARL HW-40S 凝胶填料上非理想排阻行为的研究 被引量：1

12

作者 饶平凡 刘树滔 +3 位作者 张蓉真 陈躬瑞 郑玉锖 施碧红 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期193-196,共4页

在发现１８种氨基酸特别是色氨酸在ＴＯＹＯＰＥＡＲＬＨＷ－４０Ｓ树脂所填色谱柱上表现出非理想排阻行为的基础上，以色氨酸在ＨＷ柱上的保留时间为指标，探讨不同的流动相改良剂对ＨＷ凝胶与色氨酸之间相互作用的影响，从而阐明这种... 在发现１８种氨基酸特别是色氨酸在ＴＯＹＯＰＥＡＲＬＨＷ－４０Ｓ树脂所填色谱柱上表现出非理想排阻行为的基础上，以色氨酸在ＨＷ柱上的保留时间为指标，探讨不同的流动相改良剂对ＨＷ凝胶与色氨酸之间相互作用的影响，从而阐明这种反常行为是疏水、离子交换以及氢键三者综合作用的结果，而疏水作用是最主要的影响因素。实验结果说明流动相组成对ＨＷ凝胶色谱行为有明显的影响作用，这不但有助于确立ＨＷ凝胶理想的排阻色谱条件，而且为利用其所具有的吸附性能分离分析肽类和氨基酸等小分子物质奠定了基础。 展开更多

关键词 凝胶 色氨酸 非理想排阻行为 色谱柱填料

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β-内酰胺抗生素在Superdex peptide凝胶过滤色谱柱上的色谱行为 被引量：32

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作者 蔡姗英 胡昌勤 冯芳 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期157-161,192,共6页

目的 :通过研究 β 内酰胺抗生素与Superdexpeptide凝胶介质的相互作用 ,为建立和优化 β 内酰胺抗生素中高分子杂质的分离分析方法提供理论参考。方法 :考察 8种 β 内酰胺抗生素在Superdexpeptide凝胶介质中不同色谱条件下的色谱行为 ... 目的 :通过研究 β 内酰胺抗生素与Superdexpeptide凝胶介质的相互作用 ,为建立和优化 β 内酰胺抗生素中高分子杂质的分离分析方法提供理论参考。方法 :考察 8种 β 内酰胺抗生素在Superdexpeptide凝胶介质中不同色谱条件下的色谱行为 ,并与其在TSKG2 0 0 0SW亲水性多孔硅胶介质中的色谱行为比较。结果 :β 内酰胺抗生素在Superdexpeptide和TSKG2 0 0 0SW介质中的保留行为受到流动相缓冲盐组分、pH值、离子强度的影响。结论 :β 内酰胺抗生素在凝胶介质中受到分子排阻、吸附作用的共同影响 ,不能简单地以保留体积判定 β 展开更多

关键词 Β-内酰胺抗生素 凝胶过滤色谱 分子排阻 吸附作用 速发型过敏反应 药品质量控制

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高效液相色谱-质谱技术在蛋白质组学中的应用 被引量：3

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作者 刘威 翁凌霄 +1 位作者 高明霞 张祥民 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期601-612,共12页

蛋白质组学研究在生物医学领域发挥了重要作用,然而研究面临的主要难点在于其研究对象的复杂性和多样性。随着质谱技术的快速发展,高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)分离分析复杂生物样品已经成为蛋白质组学研究的基础工具。蛋白质组学的研究... 蛋白质组学研究在生物医学领域发挥了重要作用,然而研究面临的主要难点在于其研究对象的复杂性和多样性。随着质谱技术的快速发展,高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)分离分析复杂生物样品已经成为蛋白质组学研究的基础工具。蛋白质组学的研究从肽段分离,延伸到蛋白质和蛋白质复合物的分离,随着分析物的分子质量不断增大,其结构和组成复杂性也持续增加,分子特性也发生改变。面对不同的蛋白质组学研究对象,选择不同的分离模式、分离条件以及固定相参数是进行深度蛋白质组学研究的关键。本文综述了实验室常用的液相色谱分离模式,包括反相色谱(RPLC)、亲水相互作用色谱(HILIC)、疏水相互作用色谱(HIC)、离子交换色谱(IEC)和体积排阻色谱(SEC),以及其不同的组合模式与质谱联用在自下而上(bottom-up)分析、自上而下(top-down)分析、蛋白-蛋白相互作用分析中应用的研究。具体分析了色谱流动相与被分析对象之间的兼容性问题、色谱流动相与质谱兼容性问题,以及多维色谱中不同色谱模式之间流动相的兼容性问题。重点关注存在不兼容问题时研究者所提出的解决方案。此外,本文还评述了HPLC-MS结合样本前处理的方法在外泌体和单细胞蛋白质组学中的应用研究。总之,文章聚焦于近年来HPLC-MS技术在蛋白质组学中的研究进展,旨在为未来蛋白质组学领域的研究提供参考。 展开更多

关键词 高效液相色谱 反相液相色谱 亲水相互作用色谱 疏水作用色谱 离子交换色谱 体积排阻色谱 蛋白质组学

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空间排阻色谱(SEC)用多孔硅胶载体的研究

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作者 汪勤慰 段晓青 +1 位作者 敬志成 哈惠荣 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS 1985年第6期557-561,共5页

我们的工作是制备多孔硅球表面键合带有羟基基团的亲水性SEC刚性载体.研究结果表明,此种SEC载体能适用于聚乙烯醇、明胶、蛋白质、右旋糖酐等多种水溶液体系的SEC分析.空间排阻色谱(SEC)水溶性体系多以葡聚糖凝胶(Sephadex)、琼脂糖凝胶... 我们的工作是制备多孔硅球表面键合带有羟基基团的亲水性SEC刚性载体.研究结果表明,此种SEC载体能适用于聚乙烯醇、明胶、蛋白质、右旋糖酐等多种水溶液体系的SEC分析.空间排阻色谱(SEC)水溶性体系多以葡聚糖凝胶(Sephadex)、琼脂糖凝胶(Sepharose)等作为固定相,此类载体有质软、尺寸稳定性差,机械强度低,不能加压等缺点. 展开更多

关键词 羟基基团 水溶液体系 葡聚糖凝胶 右旋糖酐 琼脂糖凝胶 尺寸稳定性 排阻色谱 多孔硅

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胰蛋白酶水解全酪蛋白反应过程中的色谱分析 被引量：16

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作者 齐崴 何明霞 +1 位作者 何志敏 史德青 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期1-5,共5页

将高效凝胶排阻色谱 (HPSEC)技术与水解度 (DH)概念相结合 ,对酪蛋白 胰蛋白酶水解体系的酶解反应过程进行色谱分析 ,得到定量表征复杂酶解反应进程和不同DH值时多样性酶解产物相对分子质量分布的二维图线 ;依据蛋白质结构信息 ,结合HP... 将高效凝胶排阻色谱 (HPSEC)技术与水解度 (DH)概念相结合 ,对酪蛋白 胰蛋白酶水解体系的酶解反应过程进行色谱分析 ,得到定量表征复杂酶解反应进程和不同DH值时多样性酶解产物相对分子质量分布的二维图线 ;依据蛋白质结构信息 ,结合HPSEC实验谱图 ,对胰蛋白酶作用于酪蛋白时的酶解断裂位点进行剖析 ,初步推断反应历程 ,并得到理论酶解肽段的相对分子质量分布图及酶解物中活性多肽酪蛋白磷酸肽 (CPPs)肽谱。 展开更多

关键词 胰蛋白酶 水解度 酪蛋白 色谱分析 胰蛋白酶 酶促水解 高效凝胶排阻色谱 酪蛋白磷酸肽 肽谱

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金属硫蛋白异构体及亚型异构体的液相色谱分离与质谱鉴别 被引量：2

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作者 卢素格 沈金灿 +1 位作者 庄峙厦 王小如 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期164-167,共4页

建立了金属硫蛋白(MT)异构体及亚型异构体的色谱分离与质谱鉴别方法。将金属硫蛋白混合物通过弱阴离子DEAESephadexA 25离子交换柱,结合离线电感耦合等离子体质谱(ICP MS)对锌诱导金属硫蛋白的两个异构体MT 1和MT 2进行分离和检测;利用S... 建立了金属硫蛋白(MT)异构体及亚型异构体的色谱分离与质谱鉴别方法。将金属硫蛋白混合物通过弱阴离子DEAESephadexA 25离子交换柱,结合离线电感耦合等离子体质谱(ICP MS)对锌诱导金属硫蛋白的两个异构体MT 1和MT 2进行分离和检测;利用SephadexG 25凝胶排阻色谱柱对得到的两个金属硫蛋白异构体进行脱盐;探索脱盐后的金属硫蛋白异构体在不同色谱条件下的C18反相色谱柱上的保留行为,进而实现各个亚型异构体的分离;通过在线电喷雾质谱检测实现了对金属硫蛋白各个亚型异构体的鉴别。结果表明,通过优化色谱条件,由离子交换色谱及凝胶排阻色谱得到的金属硫蛋白各亚型异构体在酸性条件下均得到了良好的分离,质谱检测结果与前人的文献报道结果一致。该方法可使金属硫蛋白各异构体均达到最佳的分离效果。 展开更多

关键词 离子交换色谱 凝胶排阻色谱 反相高效液相色谱 金属硫蛋白 异构体

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酪蛋白酶解反应复杂产物的色谱定量分析 被引量：1

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作者 于艳军 齐崴 何志敏 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期183-185,共3页

根据酪蛋白酶解产物的高效凝胶排阻色谱(HPSEC)定性分析结果,选取不同截留相对分子质量的超滤膜对酶解产物进行截分,制得 3种相对分子质量分布相对集中的区间组分;建立各组分峰面积与质量浓度之间的线性关系,由此定量计算不同反应时间... 根据酪蛋白酶解产物的高效凝胶排阻色谱(HPSEC)定性分析结果,选取不同截留相对分子质量的超滤膜对酶解产物进行截分,制得 3种相对分子质量分布相对集中的区间组分;建立各组分峰面积与质量浓度之间的线性关系,由此定量计算不同反应时间的酶解产物中相应相对分子质量区间组分的质量浓度。研究表明,将膜分离方法与色谱分析相结合可实现对蛋白质、多肽等复杂体系相对精确的定量分析。 展开更多

关键词 酪蛋白 酶促水解 高效凝胶排阻色谱 复杂体系 膜分离 定量分析

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增强型绿色荧光蛋白的色谱分离和纯化 被引量：5

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作者 侯清华 宋淑亮 +2 位作者 梁浩 王伟莉 吉爱国 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期151-154,共4页

增强型绿色荧光蛋白(EGFP)是生物领域常用的标记物。在前期成功克隆表达EGFP的基础上,本实验建立了两步分离纯化EGFP的色谱方法,并验证其分离纯化效果,检验EGFP的活性。首先用金属螯合亲和色谱柱His-Trap HP对EGFP的重组菌体破碎上清液... 增强型绿色荧光蛋白(EGFP)是生物领域常用的标记物。在前期成功克隆表达EGFP的基础上,本实验建立了两步分离纯化EGFP的色谱方法,并验证其分离纯化效果,检验EGFP的活性。首先用金属螯合亲和色谱柱His-Trap HP对EGFP的重组菌体破碎上清液进行初步分离,再用葡聚糖凝胶排阻色谱柱Sephadex G-10 HR对其进行脱盐纯化。采用丙烯葡聚糖凝胶排阻色谱柱Sephacryl S-300 HR和十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测分离纯化后的EGFP纯度。最后通过荧光分光检测器和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)验证分离纯化后的EGFP是否具有荧光活性。结果表明该方法可以简便快速地分离纯化EGFP,纯度超过98%,同时保持了EGFP的荧光活性。 展开更多

关键词 金属螯合亲和色谱 凝胶排阻色谱 增强型绿色荧光蛋白 分离 纯化

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基因重组可溶性非融合血管生成抑制剂Kringle5的色谱分离和纯化 被引量：2

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作者 马丽娜 吴丹 边六交 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期822-826,共5页

Kringle 5是血纤维蛋白溶酶原中特异抑制内皮细胞增生和迁移活性最高的一种血管生成抑制剂。该实验在前期成功克隆和表达可溶性非融合血管生成抑制剂Kringle 5的基础上,建立了一种两步色谱法分离纯化Kringle5的方法。首先用SP Sepharose... Kringle 5是血纤维蛋白溶酶原中特异抑制内皮细胞增生和迁移活性最高的一种血管生成抑制剂。该实验在前期成功克隆和表达可溶性非融合血管生成抑制剂Kringle 5的基础上,建立了一种两步色谱法分离纯化Kringle5的方法。首先用SP Sepharose Fast Flow强阳离子交换色谱柱对Kringle 5重组菌体破碎上清液进行初步分离,然后再用丙烯葡聚糖凝胶S-100HR凝胶排阻色谱柱对其进行进一步的纯化。采用本方法得到的可溶性非融合血管生成抑制剂Kringle 5经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和高效凝胶排阻色谱检测其纯度大于98%,通过鸡胚尿囊膜法确定这种蛋白质具有抑制内皮毛细血管生长的活性。 展开更多

关键词 阳离子交换色谱 凝胶排阻色谱 血管生长抑制剂Kringle5 分离 纯化

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