基于高分辨率熔解曲线分析技术鉴别丹参及其混伪品

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作者 赵景莹 张玉娟 +9 位作者 柳展基 赵方洲 汤慧丽 王宪昌 朱彦威 田北京 韩金龙 邬爽 高春华 单成钢 《山东农业科学》 北大核心 2024年第9期116-123,共8页

本研究旨在建立一种基于高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)技术高效鉴别丹参及其混伪品的方法。研究采用硅胶吸附柱法纯化基因组DNA,并针对鼠尾草rDNA ITS2区序列设计特异性引物,通过依次对引物浓度、DNA模板浓度、退火温... 本研究旨在建立一种基于高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)技术高效鉴别丹参及其混伪品的方法。研究采用硅胶吸附柱法纯化基因组DNA,并针对鼠尾草rDNA ITS2区序列设计特异性引物,通过依次对引物浓度、DNA模板浓度、退火温度和循环次数进行系统优化,建立了ITS2熔解曲线模型,并采用HRM技术对不同来源丹参及其混伪品(甘西鼠尾草、云南丹参和鼠尾草)进行鉴别。结果表明,在最适引物浓度为2.5~10.0μmol/L,DNA模板浓度为26.95~53.90 ng/μL,退火温度为58℃,循环数为35~45时可获得稳定、均一、特异的PCR扩增曲线。该方法通过对比熔解温度(Tm)即可实现对丹参与甘西鼠尾草、云南丹参及鼠尾草的真伪鉴别,在丹参及其伪品的快速检测方面具有独特的优势。 展开更多

关键词 高分辨率熔解曲线 分子鉴定 丹参 伪品

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高分辨率熔解曲线分析法检测结直肠癌组织K-ras基因突变及其临床意义 被引量：4

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作者 王倩 顾页 林洁 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2015年第8期840-842,共3页

目的 K-ras基因在结直肠癌的发生、发展以及需要靶向药物治疗的药物选择方面具有重大临床意义。文中旨在探讨高分辨率熔解曲线分析法检测结直肠癌组织K-ras基因突变情况,并分析K-ras基因突变与临床病理参数的关系。方法收集179例结直肠... 目的 K-ras基因在结直肠癌的发生、发展以及需要靶向药物治疗的药物选择方面具有重大临床意义。文中旨在探讨高分辨率熔解曲线分析法检测结直肠癌组织K-ras基因突变情况,并分析K-ras基因突变与临床病理参数的关系。方法收集179例结直肠癌患者的手术标本,检测结直肠癌组织中K-ras基因第12、13位密码子的突变情况,并分析K-ras基因突变与临床病理参数的关系。结果 179例结直肠癌组织标本中,K-ras基因突变率为43.02%（77/179）;在≥60岁组结直肠癌患者中K-ras基因突变率明显高于〈60岁组（55.17%vs 33.70%,P〈0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示,年龄对K-ras基因突变有显著影响（OR=1.506,95%CI：1.028~2.011）。结论结直肠癌患者K-ras基因的突变与年龄相关,与性别、分化程度、病变部位及Dukes分期无关。 展开更多

关键词 高分辨率熔解曲线分析法 结直肠癌 K-RAS基因 突变

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高分辨率熔解曲线分析法检测牦牛脂蛋白脂酶外显子7的多态性及与生长性状相关性分析 被引量：2

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作者 扎西卓玛 郭宪 +10 位作者 阎萍 吴晓云 王宏博 刘建 杨安圈 张德虎 王照忠 王成林 完马单智 诺科加 杨应川 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第7期84-88,共5页

脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)是一个分子质量为54kb的糖蛋白,其活性受营养因素、激素水平等调节,因牦牛生存环境的特殊性,试验拟从分子水平研究天峻县牦牛脂蛋白脂酶外显子7(LPL-Exon7)基因的多态性,并与生长发育性状进行关联分... 脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)是一个分子质量为54kb的糖蛋白,其活性受营养因素、激素水平等调节,因牦牛生存环境的特殊性,试验拟从分子水平研究天峻县牦牛脂蛋白脂酶外显子7(LPL-Exon7)基因的多态性,并与生长发育性状进行关联分析,从而为牦牛营养调控、品种资源保护和遗传育种提供科学理论依据。试验采集青海省海西州天峻县牦牛抗凝血106份,提取血样DNA,并利用PCR技术和高分辨率熔解曲线分析法对候选基因LPL-Exon7进行多态性分析,并于采血的同时对牦牛体重、体斜长、体高、胸围和管围等生长性状指标进行了相关性和遗传效应分析。结果表明,高原牦牛LPL-Exon7基因在高原牦牛和野血牦牛中都表现为多态,存在3种基因型,即AA、AB和BB,由1对等位基因A和B控制,A等位基因均为优势等位基因。经χ2检验,符合哈迪—温伯格(Hardy-Weinberg)定律,处于平衡状态(P>0.05)。该位点在高原牦牛和野血牦牛群体中公、母牦牛的多态信息含量为0.3588和0.2103、0.3219和0.3343,高原牦牛母牛的多态信息含量PIC<0.25,处于低度多态,高原牦牛公牛和野血牦牛公、母牛的多态信息含量均在0.25<PIC<0.50,处于中度多态。LPL-Exon7位点多态对牦牛的体重、体高和管围存在显著影响(P<0.05),对牦牛的体斜长和胸围无显著影响(P>0.05)。因此,初步推断牦牛LPL-Exon7可以作为牦牛标记辅助选择的遗传标记之一。 展开更多

关键词 高原牦牛 脂蛋白脂酶外显子7 PCR 高分辨率熔解曲线分析 多态性 相关性

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高分辨率熔解曲线分析法检测非小细胞肺癌KRAS和BRAF基因突变 被引量：5

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作者 刘丽琴 张海燕 +3 位作者 吴小丽 张伟 陈晓东 王捷 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期253-255,共3页

目的探讨高分辨率熔解曲线分析(HRM)法检测非小细胞肺癌(NSCLC)中KRAS和BRAF基因突变用于临床检测的可行性。方法用HRM法检测64例NSCLC患者KRAS基因第2外显子和BRAF基因第15外显子的突变情况,用直接测序法对结果进行验证。结果 HRM法检... 目的探讨高分辨率熔解曲线分析(HRM)法检测非小细胞肺癌(NSCLC)中KRAS和BRAF基因突变用于临床检测的可行性。方法用HRM法检测64例NSCLC患者KRAS基因第2外显子和BRAF基因第15外显子的突变情况,用直接测序法对结果进行验证。结果 HRM法检测结果表明有9例NSCLC患者发生KRAS基因突变(14.06%)、4例发生BRAF基因突变(6.25%),直接测序法证实两法的结果完全一致;共检测出4种KRAS基因突变类型,G12C(GGT>TGT)的突变率最高(44.4%),BRAF基因突变型均为V600E。结论用HRM法检测临床样本KRAS和BRAF基因突变,具有操作简便、结果准确、成本低的优点,适用于临床检测。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 KRAS基因 BRAF基因 突变 高分辨率熔解曲线

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高分辨率熔解曲线分析应用的研究进展 被引量：4

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作者 刘自增 吴周良 +1 位作者 阎萍 王一文 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第8期105-111,共7页

高分辨率熔解曲线分析(high-resolution melting curve analysis,HRMA)是结合饱和荧光染料、未标记探针和实时荧光定量PCR的一种新的检测基因突变与基因分型的分子诊断技术,具有高通量、低成本、简单快捷、结果准确、灵敏度和特异性高... 高分辨率熔解曲线分析(high-resolution melting curve analysis,HRMA)是结合饱和荧光染料、未标记探针和实时荧光定量PCR的一种新的检测基因突变与基因分型的分子诊断技术,具有高通量、低成本、简单快捷、结果准确、灵敏度和特异性高及真正闭管操作等优点。作者就高分辨率熔解曲线分析应用的研究进展进行综述。 展开更多

关键词 突变检测 熔解曲线分析 核酸

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基于高分辨率熔解曲线分析技术鉴别杭白菊和黄山贡菊的初步研究 被引量：1

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作者 陈绍宁 顾小川 +1 位作者 姜鹏辉 李晴妍 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2018年第3期346-351,共6页

杭白菊和贡菊同为药茶两用的药材,种植较多,种质相近。然而两者保健功效、药用成分各有不同,饮用或入药时需加以区分,传统鉴别方法主观性强,往往难以精确区分。文章提出一种中药材分子鉴定方法,采用高分辨率熔解曲线(High resolution me... 杭白菊和贡菊同为药茶两用的药材,种植较多,种质相近。然而两者保健功效、药用成分各有不同,饮用或入药时需加以区分,传统鉴别方法主观性强,往往难以精确区分。文章提出一种中药材分子鉴定方法,采用高分辨率熔解曲线(High resolution melting,HRM),并结合DNA条形码ITS2序列对杭白菊和黄山贡菊进行快速鉴别。以杭白菊及黄山贡菊干燥药材为样品,ITS2序列作为DNA条形码,获得ITS2序列的高分辨率熔解曲线;建立检测鉴定杭白菊与黄山贡菊的HRM-荧光定量PCR方法和杭白菊和黄山贡菊高分辨率熔解曲线模型;在HRMPCR条件下,建立杭白菊和黄山贡菊的标准化高分辨率熔解曲线图、高分辨率熔解曲线衍生差异图,并应用该方法检测市售杭白菊和黄山贡菊共10份样品。结果表明:利用高分辨率熔解曲线技术能够有效地区分开杭白菊和黄山贡菊,为进一步应用高分辨率熔解曲线分析技术鉴定中药材提供理论基础和技术依据。 展开更多

关键词 高分辨率熔解曲线 杭白菊 贡菊 DNA条形码 ITS2序列

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高分辨率熔解曲线分析技术在检测非小细胞肺癌组织和血清EGFR基因突变中的应用 被引量：1

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作者 刘晓蕾 陈英剑 +1 位作者 孙晓明 胡成进 《中国医学工程》 2012年第3期44-45,47,共3页

目的探索高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)分析技术在检测肺癌组织及血清表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变中的应用。方法收集85例非小细胞肺癌石蜡包埋组织(FFPE)标本及对应的39例血清... 目的探索高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)分析技术在检测肺癌组织及血清表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变中的应用。方法收集85例非小细胞肺癌石蜡包埋组织(FFPE)标本及对应的39例血清标本,分别提取DNA,自行设计引物,优化扩增体系,利用HRM技术进行EGFR基因18～21外显子突变检测,对检测出突变阳性的标本扩增片段进行基因测序。统计39例FFPE标本与血清标本突变结果的符合率并分析EGFR基因突变与临床特征的关系。结果 85例FFPE标本中,HRM法检测出EGFR基因突变共48例,总突变率为56.47%,基因测序检测出EGFR基因突变共44例,其中181、9外显子突变类型各一种,基因型分别是G719S和2236-2250Del;20、21外显子突变类型各两种,20外显子突变基因型为插入突变insGGT和无义突变Q787Q,21外显子突变基因型为L861Q和L858R。39例血清与FFPE配对标本,EGFR基因突变阳性标本检出的符合率为92.31%(12/13),阴性标本为100%(26/26)。EGFR突变常发生于女性患者、非吸烟患者、肺腺癌患者(均为P<0.05),临床分期Ⅰ-Ⅱ与Ⅲ-Ⅳ的患者EG-FR基因突变无显著性差异(P=0.159)。结论本研究表明HRM技术能准确检测NSCLC患者组织或血清EGFR基因突变,快速、经济,可有效减少污染,适宜临床推广应用。 展开更多

关键词 高分辨率熔解曲线 EGFR 突变率 基因突变

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基于高分辨率熔解曲线检测MD肿瘤微卫星不稳定性

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作者 史泽风 李翎旭 +5 位作者 郭译文 廖云 孙昭宇 王来荣 杨德吉 姚大伟 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期759-769,共11页

本研究旨在通过高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)方法检测马立克病(Marek′s disease,MD)肿瘤中存在的微卫星不稳定现象(microsatellite instability,MSI)。通过临床症状、病理剖检、组织病理学、PCR及测序确定为马立克... 本研究旨在通过高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)方法检测马立克病(Marek′s disease,MD)肿瘤中存在的微卫星不稳定现象(microsatellite instability,MSI)。通过临床症状、病理剖检、组织病理学、PCR及测序确定为马立克病。采集5只发病鸡的肌肉、肝、脾、血液及肿瘤组织,提取DNA,采用15对扩增微卫星DNA序列的引物进行HRM检测,得到归一化处理的差异熔解曲线,比较分析各组织熔解曲线的差异,分析15个微卫星标记是否存在基因突变(即MSI)。结果表明,发病鸡的各种临床、病理表现符合为马立克病的特征,病毒meq基因序列与近年来国内流行的MDV强毒株有较高的同源性。HRM分析结果显示,MD发病鸡的肌肉、肝、脾、血液、肿瘤组织中微卫星标记PCR扩增后的熔解曲线存在明显的差异,即存在MSI现象,而且不同的病鸡个体和不同的微卫星标记发生MSI的频率不同。15个微卫星标记在5只鸡的病料中存在MSI的微卫星标记的个数分别为14、7、5、3和1。在15个微卫星标记中,MCWO200、MCW0220这两个微卫星标记在所有的病鸡中都存在MSI,而ADL0158微卫星标记在所有的病鸡中都不存在MSI。通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和测序分析进一步证明这些微卫星PCR扩增片段确实存在片段大小不同,碱基序列中存在微卫星重复单位的增多、减少或基因片段的插入或缺失。结果提示,通过HRM分析可以检测MD肿瘤中的MSI现象,是一种灵敏、准确、简便、高通量的方法。 展开更多

关键词 高分辨率熔解曲线 马立克病 微卫星不稳定性 肿瘤

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高分辨率熔解曲线法检测JAK2基因V617F突变及其应用 被引量：1

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作者 郑卫东 方伟 +3 位作者 刘艳辉 罗盈 杜欣 陈志红 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期602-604,共3页

目的探讨实时定量PCR方法和高分辨率熔解曲线法(HRM)在检测JAK2基因V617F突变中的应用。方法以JAK2基因V617F发生纯合突变的人红白血病细胞株(HEL)及不含JAK2基因V617F突变的人白血病细胞株(HL60)为阳性对照和阴性对照,优化HRM法检测条... 目的探讨实时定量PCR方法和高分辨率熔解曲线法(HRM)在检测JAK2基因V617F突变中的应用。方法以JAK2基因V617F发生纯合突变的人红白血病细胞株(HEL)及不含JAK2基因V617F突变的人白血病细胞株(HL60)为阳性对照和阴性对照,优化HRM法检测条件,分别以优化的HRM法和直接测序法对63例临床疑似骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者DNA标本进行JAK2基因V617F突变检测,评价2种检测方法结果的一致性。结果 HRM法可检出系列混合样本中5%的突变型等位基因突变,且重复性较高。以测序法为金标准,HRM法的敏感性和特异性均为100%,两种方法结果一致。结论 HRM法能够在单一闭管体系中实现对JAK2基因V617F突变的检测,具有较高的敏感性和特异性,可用于JAK2基因V617F突变的临床检测。 展开更多

关键词 高分辨率熔解曲线法 JAK2基因 V617F突变 骨髓增殖性肿瘤

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高分辨率熔解曲线技术在筛查琥珀酸半醛脱氢酶缺陷症致病基因突变中的应用 被引量：1

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作者 董昭樱 张新杰 +5 位作者 支秀芳 范文轩 张玉琴 舒剑波 蔡春泉 李东 《生物医学工程与临床》 CAS 2022年第1期81-85,共5页

目的对4例琥珀酸半醛脱氢酶缺陷症(SSADHD)患儿家系进行基因突变分析,在明确突变的基础上建立针对醛脱氢酶5家族成员A1基因(ALDH5A1)中常见致病基因突变位点c.1529C> T(p.S510F)的高分辨率熔解(HRM)曲线快速筛查方法。方法先证者4例S... 目的对4例琥珀酸半醛脱氢酶缺陷症(SSADHD)患儿家系进行基因突变分析,在明确突变的基础上建立针对醛脱氢酶5家族成员A1基因(ALDH5A1)中常见致病基因突变位点c.1529C> T(p.S510F)的高分辨率熔解(HRM)曲线快速筛查方法。方法先证者4例SSADHD患儿年龄(5.3±2.2)个月,其中男性3例,女性1例。商品化试剂盒提取4例先证者及其亲属外周血基因组DNA;采用一代测序技术对患者家系的ALDH5A1进行基因突变分析;应用HRM曲线技术随机筛查80例患儿ALDH5A1上c.1529C> T位点突变。结果先证者均有致病基因突变c.1529C> T位点,其中2例为该位点纯合突变,2例杂合携带并伴有其他致病位点的杂合突变。先证者及其家属的HRM分析结果与测序结果一致。随机检测的80例患儿,年龄为(7.5±3.9)岁,其中男性48例,女性32例,均不携带该基因突变。结论推测c.1529C> T位点突变可能是津冀地区SSADHD患儿中ALDH5A1的常见致病基因突变位点,但其在人群中携带频率很低;利用HRM曲线技术可实现对该位点的快速筛查。 展开更多

关键词 高分辨率熔解曲线 琥珀酸半醛脱氢酶缺陷症 醛脱氢酶5家族成员A1基因(ALDH5A1) 儿童

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甲基化敏感性高分辨率熔解曲线检测结直肠癌组织及外周血MGMT基因甲基化 被引量：4

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作者 卫旭宇 张宏莲 +5 位作者 高晓云 王萍 毛红菊 金庆辉 赵建龙 马天乐 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期806-809,816,共5页

目的用甲基化敏感性高分辨率熔解曲线法（MS-HRM）定量检测结直肠癌组织及外周血中MGMT基因甲基化水平,并结合结直肠癌病理参数分析探讨MGMT基因甲基化的临床意义。方法以33例结直肠癌组织和配对的正常黏膜组织以及其中16例患者的外周... 目的用甲基化敏感性高分辨率熔解曲线法（MS-HRM）定量检测结直肠癌组织及外周血中MGMT基因甲基化水平,并结合结直肠癌病理参数分析探讨MGMT基因甲基化的临床意义。方法以33例结直肠癌组织和配对的正常黏膜组织以及其中16例患者的外周血为研究对象,用MS-HRM进行MGMT基因甲基化检测,分析MGMT基因甲基化与结直肠癌临床病理特征的关系和MS-HRM的方法特点。结果 MS-HRM从33例结直肠癌患者的癌组织中检测到12例（36.4%）MGMT基因启动子不同程度的甲基化（甲基化〈5%1例,5%-10%3例,10%-25%3例,25%-50%2例,50%-75%3例）,对应的正常结直肠组织中仅检测到甲基化〈5%1例（3.0%）。16例外周血中检测到甲基化小于〈5%3例（18.8%）。MGMT基因甲基化与患者的年龄、性别、肿瘤部位无相关性（P〉0.05）,但与结直肠癌的病理分期和分化程度的相关性有统计学意义（P〈0.05）。结论 MS-HRM可定量检测结直肠癌MGMT甲基化水平。MGMT基因甲基化与结直肠癌的进展评估有关。 展开更多

关键词 O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶 结直肠癌 甲基化 甲基化敏感性高分辨率熔解曲线

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龟甲的特异性PCR及高分辨率熔解曲线技术鉴别方法研究 被引量：11

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作者 张雪艳 袁媛 +2 位作者 胡启跳 蒋超 方成武 《中国现代中药》 CAS 2019年第9期1215-1220,共6页

目的:建立高效、稳定的龟甲Testudinis Carapax et Plastrum DNA鉴别方法。方法:利用龟甲的特异性聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)鉴别方法和高分辨率熔解曲线(HRM)鉴别方法,根据龟甲及其混伪品COI序列差异,寻找特异性... 目的:建立高效、稳定的龟甲Testudinis Carapax et Plastrum DNA鉴别方法。方法:利用龟甲的特异性聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)鉴别方法和高分辨率熔解曲线(HRM)鉴别方法,根据龟甲及其混伪品COI序列差异,寻找特异性单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点设计鉴别引物,并对PCR反应条件进行优化;并使用通用引物扩增COI区域,产物直接进行HRM分析。结果:当退火温度为60 ℃,循环次数为35,使用设计的龟甲特异性鉴别引物GJ-360.F/R进行PCR扩增,经扩增均获得约360 bp特异性鉴别条带,混伪品皆无条带;使用通用引物RonM-tl和Vl-tl进行PCR扩增,产物使用HRM分析,龟甲药材在模板DNA质量浓度为3.5~87.9 ng ·μL^-1 、引物浓度为0.2 μmol · L ^-1 、镁离子浓度为2.0 mmol · L ^-1 的条件下,龟甲药材标准熔解曲线为双峰,其 T m均值分别为(83.15±0.76)、(87.53±0.69 )℃。结论:特异性PCR和HRM均可作为一种快速准确鉴别龟甲正伪品的鉴定方法。 展开更多

关键词 龟甲 特异性聚合酶链式反应 分子鉴定 高分辨率熔解曲线

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猪流行性腹泻病毒经典株与变异株高分辨率熔解曲线方法的建立 被引量：1

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作者 刘向楠 饶丹 +7 位作者 丛锋 练月晓 曾繁文 黄韧 张钰 郭鹏举 罗满林 陈梅丽 《动物医学进展》 北大核心 2018年第3期1-4,共4页

为了建立鉴别检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)经典株与变异株的高分辨率溶解曲线方法,基于PEDV经典株与变异株在S基因上序列的差异设计1对PCR引物用于RT-PCR扩增,扩增产物通过高分辨率熔解曲线(HRM)分析,建立鉴别PEDV经典株与变异株的PCR-HR... 为了建立鉴别检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)经典株与变异株的高分辨率溶解曲线方法,基于PEDV经典株与变异株在S基因上序列的差异设计1对PCR引物用于RT-PCR扩增,扩增产物通过高分辨率熔解曲线(HRM)分析,建立鉴别PEDV经典株与变异株的PCR-HRM分析方法。通过此方法检测了10份临床样品,PCR-HRM结果表明,4份为PEDV经典毒株,6份为PEDV变异毒株。该方法特异性好,灵敏度高,PCR后无需开盖分析,避免了污染问题,是一种新型的鉴别检测方法。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 经典株 变异株 高分辨率熔解曲线

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RT-PCR结合高分辨率熔解曲线对两种致病菌的快速检测 被引量：2

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作者 姚艳玲 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2020年第4期205-210,共6页

为建立食品中金黄色葡萄球菌、单核增生李斯特氏菌的双重快速检测方法。用缓冲蛋白胨水(buffered peptone water,BPW)对两种目标菌进行增菌培养,采用直接提取法提取样本DNA,比较实时聚合酶链式反应体系(real-time polymerase chain reac... 为建立食品中金黄色葡萄球菌、单核增生李斯特氏菌的双重快速检测方法。用缓冲蛋白胨水(buffered peptone water,BPW)对两种目标菌进行增菌培养,采用直接提取法提取样本DNA,比较实时聚合酶链式反应体系(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)中的退火温度,调整高分辨率熔解曲线(high-resolution melting curve,HRM)分析条件,建立同时检测金黄色葡萄球菌、单核增生李斯特氏菌的方法。结果表明,PCR扩增最佳退火温度为58℃,两种目标菌的Tm值分别为金黄色葡萄球菌77.05℃,单核增生李斯特氏菌79.39℃;试验灵敏度分别可以达到102、103 CFU/g。 展开更多

关键词 实时聚合酶链式反应(RT-PCR) 高分辨率熔解曲线 金黄色葡萄球菌 单核增生李斯特氏菌 双重反应

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浅谈高分辨率熔解曲线快速鉴定侵袭性真菌的发展

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作者 张随法 王云霞 《临床医药实践》 2012年第2期111-113,共3页

侵袭性真菌感染指真菌侵入人体组织、器官或血液中生长繁殖，导致炎症反应和组织器官损伤的病理生理过程。随着社会老龄化、抗生素的滥用、激素及免疫抑制剂的长期使用、骨髓及器官移植的广泛开展、侵人性治疗手段的不断增多和获得性免... 侵袭性真菌感染指真菌侵入人体组织、器官或血液中生长繁殖，导致炎症反应和组织器官损伤的病理生理过程。随着社会老龄化、抗生素的滥用、激素及免疫抑制剂的长期使用、骨髓及器官移植的广泛开展、侵人性治疗手段的不断增多和获得性免疫缺陷综合征（AIDS）的流行，侵袭性真菌感染（IFI）的发病率正在迅速增长，严重威胁人类的健康与生命安全，已成为住院患者感染及死亡的主要原因之一。因此，准确且快速地鉴定侵袭性真菌对降低住院患者感染及死亡具有重要意义。 展开更多

关键词 侵袭性真菌感染 快速鉴定 熔解曲线 高分辨率 获得性免疫缺陷综合征 组织器官损伤 病理生理过程 住院患者

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陈家庄地区馆陶组高分辨率层序地层分析及沉积微相研究 被引量：9

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作者 国景星 《石油大学学报（自然科学版）》 EI CSCD 北大核心 2005年第2期1-5,10,共6页

为了搞清陈家庄地区馆陶组沉积微相特征及含气层位,从岩心观察入手,利用岩心资料识别了陈家庄地区馆陶组短期旋回,建立了岩电关系模板,在此基础上,利用大量的测井资料,根据短期旋回在测井曲线上的响应,识别了中期旋回并进行了横向对比,... 为了搞清陈家庄地区馆陶组沉积微相特征及含气层位,从岩心观察入手,利用岩心资料识别了陈家庄地区馆陶组短期旋回,建立了岩电关系模板,在此基础上,利用大量的测井资料,根据短期旋回在测井曲线上的响应,识别了中期旋回并进行了横向对比,建立了高分辨率层序地层格架。研究结果表明,陈家庄地区馆陶组发育4个中期旋回16个短期旋回,旋回叠加样式主要有退积式、加积式。对该层序地层格架内不同准层序沉积相平面分布及其随时间的变化特征分析认为,陈家庄地区馆陶组沉积体系从早至晚经历了冲积扇辫状河沉积、辫状河广泛发育期和辫状河向曲流河演化3个阶段。 展开更多

关键词 高分辨率 馆陶组 层序地层分析 沉积微相 层序地层格架 变化特征分析 辫状河 微相特征 岩心资料 测井资料 测井曲线 研究结果 叠加样式 平面分布 沉积体系 旋回 短期 沉积相 准层序 冲积扇 曲流河 发育期 识别 中期 积式

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高分辨熔解曲线分析法检测急性髓细胞白血病IDH2基因突变

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作者 薛娣 邵睿 +8 位作者 林江 肖高飞 钱军 姚冬明 柴海彦 李云 杨静 王翠竹 陈星星 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期664-667,共4页

目的建立高分辨熔解曲线分析(HRMA)技术检测急性髓细胞白血病(AML)中可溶性异柠檬酸脱氢酶2(IDH2)基因突变。方法针对IDH2突变位点设计PCR扩增引物,建立带有温度内标校准品的PCR扩增体系,对98例AML患者标本进行PCR扩增,用HRMA技术对PCR... 目的建立高分辨熔解曲线分析(HRMA)技术检测急性髓细胞白血病(AML)中可溶性异柠檬酸脱氢酶2(IDH2)基因突变。方法针对IDH2突变位点设计PCR扩增引物,建立带有温度内标校准品的PCR扩增体系,对98例AML患者标本进行PCR扩增,用HRMA技术对PCR产物进行突变分析,并通过DNA测序技术对HRMA结果进行验证。结果对98例AML样本的PCR产物进行HRMA检测,发现5例存在异常熔解曲线,对此5例标本及随机选择的HRMA显示为野生型的35例IDH2标本进行DNA测序验证,结果表明,存在异常熔解曲线的5例标本为4例R140Q突变和1例R172K突变,其余35例经DNA测序证实为野生型IDH2;对不同浓度梯度的R140Q质粒HRMA检测结果表明其灵敏度为2%。结论成功建立HRMA技术检测IDH2突变,其可用于AML标本的临床检测。 展开更多

关键词 高分辨熔解曲线分析 可溶性异柠檬酸脱氢酶2 基因突变 急性髓细胞白血病

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高分辨熔解曲线分析技术临床应用研究进展 被引量：3

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作者 李宗波 《临床医药实践》 2020年第2期143-146,共4页

高分辨熔解曲线分析技术(HRM)是在2002年由Utah大学Wittwer实验室和Idaho公司合作研发,它的原理是在PCR基础上加入饱和荧光染料、监测扩增产物熔解曲线变化的新兴核酸分析技术[1]。高分辨熔解曲线分析技术已经应用到临床的各个领域,对... 高分辨熔解曲线分析技术(HRM)是在2002年由Utah大学Wittwer实验室和Idaho公司合作研发,它的原理是在PCR基础上加入饱和荧光染料、监测扩增产物熔解曲线变化的新兴核酸分析技术[1]。高分辨熔解曲线分析技术已经应用到临床的各个领域,对遗传病、肿瘤的诊断和细菌的鉴定及药敏试验、药物的鉴定等发挥了重要作用。 展开更多

关键词 高分辨熔解曲线分析 核酸分析技术 熔解曲线 荧光染料 药敏试验 遗传病 合作研发 扩增产物

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一种基于多重实时荧光聚合酶链式反应熔解曲线分析的肉及肉制品掺假鉴别方法 被引量：11

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作者 周彤 李家鹏 +5 位作者 李金春 乔晓玲 黄鑫 陈曦 杨君娜 郭雅 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第12期217-222,共6页

为实现肉及肉制品掺假快速鉴别,分别以猪、牛线粒体DNA的COXⅠ,绵羊、山羊、狗、狐狸、貉线粒体DNA的16S rRNA及鸡、鸭线粒体DNA的12S rRNA基因为靶位点,设计扩增产物熔解温度(T_m值)具有显著性差异的特异性引物,建立一种用于快速鉴别... 为实现肉及肉制品掺假快速鉴别,分别以猪、牛线粒体DNA的COXⅠ,绵羊、山羊、狗、狐狸、貉线粒体DNA的16S rRNA及鸡、鸭线粒体DNA的12S rRNA基因为靶位点,设计扩增产物熔解温度(T_m值)具有显著性差异的特异性引物,建立一种用于快速鉴别肉或肉制品中猪、牛、绵羊、山羊、鸡、鸭、狗、狐、貉9种源性成分的5重实时荧光聚合酶链式反应熔解曲线分析方法,通过特异性、灵敏度及市售样品的检测,对该方法进行检验和评价。结果表明:方法具有良好的特异性及灵敏度,单物种DNA检出限为0.001~1 ng,多物种混合DNA检出限均为0.1 ng,通过市售样品检测表明该方法可用于实际样品(包括生鲜样品和熟制样品)掺假的快速鉴别。 展开更多

关键词 肉类掺假 多重实时荧光聚合酶链式反应 熔解曲线分析 SYBR Green染料 动物源性成分

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SYBR greenⅠ结合熔解曲线分析快速检测GSTM1基因多态性 被引量：1

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作者 王小飞 王惠民 +2 位作者 王跃国 施英娟 张冬雷 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期100-102,共3页

目的建立一种快速检测人类谷胱甘肽S转移酶(GST)基因多态性的方法并初步应用。方法反应体系中加入新型荧光染料SYBR greenⅠ,应用多重PCR同时扩增GSTM1基因及内参照CYP1A1基因。PCR反应结束后,以0.1℃/s的速度从65℃到95℃检测并记录反... 目的建立一种快速检测人类谷胱甘肽S转移酶(GST)基因多态性的方法并初步应用。方法反应体系中加入新型荧光染料SYBR greenⅠ,应用多重PCR同时扩增GSTM1基因及内参照CYP1A1基因。PCR反应结束后,以0.1℃/s的速度从65℃到95℃检测并记录反应管荧光的变化,根据得到的熔解曲线分析GSTM1基因型。结果GSTM1基因携带型(GSTM1+)熔解曲线出现两个峰带,GSTM1基因空白型(GSTM1-)只出现一个峰带,两峰峰尖所对应的温度值与预期值相同,琼脂糖凝胶电泳显示PCR产物分子量与预期分子量一致。DNA抽提后整个检测在L ightCyc ler扩增仪上1 h内完成。结论SYBR greenⅠ结合熔解曲线分析是一种简单、快速、准确的分析GSTM1基因多态性的方法。 展开更多

关键词 SYBR green Ⅰ 熔解曲线分析 基因 多态性

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