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基于高分辨率熔解度曲线技术的金银花真伪鉴别方法研究
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作者 肖世昌 赵仲麟 +9 位作者 张富丽 兰璞 陈泽一 王雨 徐石勇 赵清寰 宋君 刘征辉 王永 兰青阔 《天津农业科学》 CAS 2020年第10期11-15,共5页
金银花为常用大宗中药材,具有清热解毒功效,有些不法商家将价格便宜近十倍的山银花当金银花销售和使用,严重危害市场。为鉴别中药材金银花真伪,本研究基于高分辨率熔解曲线技术(High Resolution Melting,HRM),建立了金银花真伪分子鉴定... 金银花为常用大宗中药材,具有清热解毒功效,有些不法商家将价格便宜近十倍的山银花当金银花销售和使用,严重危害市场。为鉴别中药材金银花真伪,本研究基于高分辨率熔解曲线技术(High Resolution Melting,HRM),建立了金银花真伪分子鉴定方法。提取样品总DNA,对金银花及其伪品山银花的叶绿体基因组标志性核酸位点进行PCR扩增及HRM分析,并与标准样品的曲线作对比,判断供试金银花真伪。标志性核酸位点分型包括G/G、A/A两种,其中G/G型为金银花真品,A/A型为金银花伪品。本研究建立的基于HRM技术的金银花真伪鉴别方法具有快速、高通量的优点,为中草药监管和应用提供技术支撑。 展开更多
关键词 金银花 真伪鉴别 高分辨率熔解度曲线技术
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羊乳中牛乳成分的环介导等温扩增高分辨熔解检测 被引量:4
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作者 张文娟 澹台玮 +2 位作者 李敏康 蔡露阳 徐秦峰 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2020年第21期223-227,共5页
为了提高检测效率,节省时间、试剂和样本,建立了基于高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)的双重环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术用于羊乳中牛乳成分的检测。通过引物设计优化,牛引物目标... 为了提高检测效率,节省时间、试剂和样本,建立了基于高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)的双重环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术用于羊乳中牛乳成分的检测。通过引物设计优化,牛引物目标产物的T m值在80℃,羊引物目标产物的T m值在83℃,由于在传统熔解曲线中峰型有交叉重叠,同时检测存在干扰,因此使用HRM技术,实现了2种不同动物源性成分的有效区分。该方法特异性好,不需要针对牛、羊源性成分单独进行检测,当体系中存在其中一种或两种都存在时都可将其快速检出,且对其他物种没有交叉反应及假阳性现象的发生,成功应用于市售羊乳及其制品的检测。 展开更多
关键词 羊乳 牛乳 环介导等温扩增(LAMP)技术 高分辨率熔解曲线(HRM) 双重检测
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基于HRM技术的大白菜InDel标记高效检测技术构建及其应用 被引量:4
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作者 张志刚 司立英 +4 位作者 赵智中 王荣花 王立华 李巧云 刘栓桃 《山东农业科学》 2018年第10期128-133,共6页
高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)分析技术是基于核酸小片段之间的GC含量差异而导致双链核酸解链温度差异的一门检测技术,更多地被用于特定类型的单碱基突变筛查,很少见用于插入/缺失突变的检测。本研究从前期鉴定的可以... 高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)分析技术是基于核酸小片段之间的GC含量差异而导致双链核酸解链温度差异的一门检测技术,更多地被用于特定类型的单碱基突变筛查,很少见用于插入/缺失突变的检测。本研究从前期鉴定的可以有效区分大白菜自交系He102与06-247的593对多态性InDel引物中筛选到271对特异性好、呈共显性分布的InDel引物,采用软件TMUtility_1.5预测了差异目标片段的熔解温度(Tm)值,发现63对标记的Tm差值满足HRM分型的灵敏度(差值绝对值≥0.2℃)要求,进一步采用梯度PCR技术对上述63对引物进行PCR扩增和HRM分型,从中鉴定出20对适宜进行HRM分型的InDel标记。构建了适宜LightScanner-96高分辨率熔解曲线分析仪分析的高效检测体系,并在大白菜种质基因型精准鉴定、杂交种纯度高效鉴定方面得到成功应用。本研究开发的适宜HRM分型的InDel标记还可以作为一种标记储备用于构建遗传连锁图谱和DNA指纹图谱、鉴定杂交种纯度和真实性、关联分析、分子标记辅助育种等。基于此构建的高通量检测方法也为其它动植物材料InDel标记的高通量检测和应用提供借鉴。 展开更多
关键词 大白菜 插入/缺失标记 高分辨率熔解曲线分析 高效检测技术
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维生素D受体基因BsmI及FokI位点单核苷酸多态性与维生素D缺乏性佝偻病的相关性 被引量:11
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作者 郭敏 李宇宁 +3 位作者 凌继祖 姜莉 马建英 张俊芳 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1047-1050,共4页
目的探讨东乡族婴幼儿维生素D受体(VDR)基因BsmI、Fokl位点单核苷酸多态性(SNP)与维生素D缺乏性佝偻病(佝偻病)的关系,研究东乡族婴幼儿该病的遗传易感性。方法选取东乡族佝偻病患儿69例和东乡族健康婴幼儿72例作为研究对象,应... 目的探讨东乡族婴幼儿维生素D受体(VDR)基因BsmI、Fokl位点单核苷酸多态性(SNP)与维生素D缺乏性佝偻病(佝偻病)的关系,研究东乡族婴幼儿该病的遗传易感性。方法选取东乡族佝偻病患儿69例和东乡族健康婴幼儿72例作为研究对象,应用高分辨率熔解曲线分析技术(HRM)、基因测序方法检测并比较两组中VDR基因Bsml、Fokl位点SNP各基因型分布频率及其与佝偻病的关系。结果东乡族婴幼)LVDR基因BsmI位点SNP的不同基因型在病例组和对照组中的分布差异无统计学意义(x^2=o.19,P〉0.05);VDR基因Fokl位点SNP的不同基因型在两组中的分布差异有统计学意义(x^2=13.72,P〈0.05),其中T/T基因型罹息佝偻病的危险度高(OR=3.63,95%(7/:1.92-6.86),C/C基因型罹患佝偻病的危险度低(OR=0.39,95%CI:0.21-0.72)。结论东乡族婴幼儿VDR基因FokI位点SNP与佝偻病发病相关,此位点T/T基因型是佝偻病的危险基因型,C/C基因型是佝偻病的保护基因型。 展开更多
关键词 高分辨率熔解曲线技术 佝偻病 单核苷酸多态性 维生素D受体基因
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137例上海地区出生新生儿家系G6PD基因突变分析 被引量:13
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作者 许洪平 王燕敏 田国力 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期833-836,共4页
目的了解上海地区出生的新生儿及其家系葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症基因突变特点,探讨该病的发病机制,提高诊断水平。方法用高分辨率熔解曲线分析(HRM)技术对中国人常见的突变类型G1388A、G1376T、A95G、G392T、G871A、C1311T、C10... 目的了解上海地区出生的新生儿及其家系葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症基因突变特点,探讨该病的发病机制,提高诊断水平。方法用高分辨率熔解曲线分析(HRM)技术对中国人常见的突变类型G1388A、G1376T、A95G、G392T、G871A、C1311T、C1024T、C406T进行分析鉴定。结果 137例新生儿的家系中258例患者有213例检出突变类型,45例未检出突变类型。单个位点突变184例,G1376T,66例(30.9%);G1388A,64例(30%);A95G,25例(11.7%);C1024T,16例(7.5%);G392T,10例(4.7%);C406T,3例(1.4%)。复合位点突变共29例,G871A+C1311T+IVS11 93T→C,10例(4.7%);G1376T+IVS11 93T→C,7例(3.3%);C1311T+IVS11 93T→C,5例(2.3%);C406T+C1311T,2例(0.9%);G1388A+IVS11 93T→C,2例(0.9%);G1376T+C1311T+IVS11 93T→C,1例(0.5%);A95G+C1311T+IVS11 93T→C,1例(0.5%);C1024T+IVS11 93T→C,1例(0.5%)。结论随着外来人口的流入和通婚的增多,上海地区的G6PD基因突变也在发生变化,基因诊断是对该病分子水平的诊断,有利于杂合子的检测,以便做好产前筛查,同时对研究人口迁徙与遗传病分布之间的关系有一定意义。 展开更多
关键词 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 基因突变 高分辨率熔解曲线分析技术
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