高分辨率溶解曲线分析技术在大豆Ecotilling中的应用 被引量：8

1

作者 焦丽 刘相国 +3 位作者 杨春明 王虎义 郝东云 王庆钰 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期843-846,850,共5页

将高分辨率溶解曲线(High Resolution Melting,HRM)技术运用在大豆Ecotilling中,对256份栽培大豆的大豆异黄酮合酶基因(IFS1)的外显子区域进行SNP筛查,并采用直接测序的方法对HRM检测结果进行验证。结果表明:模板均一化后的检测效果较... 将高分辨率溶解曲线(High Resolution Melting,HRM)技术运用在大豆Ecotilling中,对256份栽培大豆的大豆异黄酮合酶基因(IFS1)的外显子区域进行SNP筛查,并采用直接测序的方法对HRM检测结果进行验证。结果表明:模板均一化后的检测效果较未均一化的检测效果差异显著,野生型样本与待测样本按1∶1及1∶4比例混样溶解曲线阈值较高,其中1∶4混样适合高通量检测。HRM对IFS1基因外显子区域的检测结果与PCR产物测序的结果比对显示,对IFS1第5段外显子和第7段外显子检测的准确率分别达到91.2%和100%,表明该研究利用HRM技术建立的栽培大豆的Ecotilling技术体系是一种高灵敏度、高通量和低成本检测SNP的新方法。 展开更多

关键词 大豆 高分辨率溶解曲线分析技术 Ecotilling SNP

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高分辨率熔解曲线技术用于结核分枝杆菌临床分离株异烟肼耐药性的快速检测 被引量：14

2

作者 杨彩虹 杨敏 +4 位作者 于璐 包海洋 吴长新 曹旭东 陈创夫 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期403-412,共10页

目的评价高分辨率熔解曲线分析技术(high-resolution melting curve,HRM)检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性的应用价值。方法 1)通过传统比例法药敏实验对本实验室保存的49株结核分枝杆菌进行异烟肼耐药性分析。2)进一步对该结核分枝杆菌进... 目的评价高分辨率熔解曲线分析技术(high-resolution melting curve,HRM)检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性的应用价值。方法 1)通过传统比例法药敏实验对本实验室保存的49株结核分枝杆菌进行异烟肼耐药性分析。2)进一步对该结核分枝杆菌进行异烟肼耐药相关基因KatG基因和inhA基因进行异烟肼耐药决定区测序分析,筛查突变位点。3)根据筛查到的突变位点设计高分辨率熔解曲线分析所用的特异性引物,对异烟肼耐药基因耐药决定区进行高分辨率熔解曲线分析检测DNA突变,评估用高分辨率熔解曲线分析技术对结核分枝杆菌异烟肼耐药性检测的效率。结果 1)比例法药敏结果显示,49株实验菌株中20株为异烟肼耐药株,29株为异烟肼敏感株。2)测序分析结果显示:(1)KatG基因出现了4种突变形式,分别是234单位点突变;234、315双位点突变;234、463双位点突变;234、315、463三位点联合突变。(2)inhA基因检测到3种突变,即-8位、-15位、-152位。3)(1)对耐药株的基因突变进行分析发现:20株异烟肼耐药株中11株存在KatG基因第315位密码子的突变、占异烟肼耐药株的55%;6株存在inhA基因-15(4株)位碱基、-8(1株)位碱基、-152(1株)位碱基的突变,共占异烟肼耐药株的30%;2株同时存在基因KatG315密码子和inhA-15位碱基的突变,占异烟肼耐药株的10%;1株均未检测到KatG基因和inhA基因的突变,占异烟肼耐药株的5%。通过基因突变检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性的敏感性为95%、特异性为100%。(2)用高分辨率溶解曲线检测实验菌株耐药基因突变的结果显示,18株存在基因突变,24株不存在基因突变,检测的灵敏度为94.7%、特异性为80%。(3)以高分辨率熔解曲线检测到突变为耐药的判断标准,检出19株为耐药株,24株为敏感株。以比例法药敏结果为参照,检测的灵敏度为95%、特异性为82.76%。结论高分辨率溶解曲线用于结核分枝杆菌对异烟肼耐药性的检测具有较好的灵敏度,耗时短,在异烟肼耐药结核病的快速诊断方面具有一定的应用价值。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 高分辨率熔解曲线(hrm) DNA测序 耐药性 异烟肼

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羊乳中牛乳成分的环介导等温扩增高分辨熔解检测 被引量：4

3

作者 张文娟 澹台玮 +2 位作者 李敏康 蔡露阳 徐秦峰 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2020年第21期223-227,共5页

为了提高检测效率,节省时间、试剂和样本,建立了基于高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)的双重环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术用于羊乳中牛乳成分的检测。通过引物设计优化,牛引物目标... 为了提高检测效率,节省时间、试剂和样本,建立了基于高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)的双重环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术用于羊乳中牛乳成分的检测。通过引物设计优化,牛引物目标产物的T m值在80℃,羊引物目标产物的T m值在83℃,由于在传统熔解曲线中峰型有交叉重叠,同时检测存在干扰,因此使用HRM技术,实现了2种不同动物源性成分的有效区分。该方法特异性好,不需要针对牛、羊源性成分单独进行检测,当体系中存在其中一种或两种都存在时都可将其快速检出,且对其他物种没有交叉反应及假阳性现象的发生,成功应用于市售羊乳及其制品的检测。 展开更多

关键词 羊乳 牛乳 环介导等温扩增(LAMP)技术 高分辨率熔解曲线(hrm) 双重检测

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基于PCR-HRM的水稻氮高效基因NRT1.1B功能标记开发及应用

4

作者 房文文 王海凤 +4 位作者 郭涛 薛芳 姜艳芳 张焕霞 张士永 《山东农业科学》 北大核心 2023年第8期21-26,共6页

水稻对氮肥的高效与合理利用是发展绿色农业的重要保障。培育含有氮高效基因的水稻品种,是提高氮肥利用率最经济有效的途径。本研究开发了一个用于HRM(高分辨率熔解曲线)高通量检测硝酸盐转运蛋白基因NRT1.1B的分子功能标记。利用此标记... 水稻对氮肥的高效与合理利用是发展绿色农业的重要保障。培育含有氮高效基因的水稻品种,是提高氮肥利用率最经济有效的途径。本研究开发了一个用于HRM(高分辨率熔解曲线)高通量检测硝酸盐转运蛋白基因NRT1.1B的分子功能标记。利用此标记对78份山东地方水稻品种进行NRT1.1B基因分型,发现有13个水稻品种为含有NRT1.1B的高效单倍型,表明NRT1.1B在山东省水稻品种中分布较少。利用测序分析验证,测序结果与本标记分型结果一致。可见,本研究开发的功能标记能够快速准确鉴定出NRT1.1B基因型,可为筛选和培育氮高效水稻新品种提供有力的技术支撑。 展开更多

关键词 水稻 高分辨率熔解曲线(hrm) 氮高效基因NRT1.1B 分子功能标记

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基于转录组数据的大菱鲆(Scophthalmus maximus)SNP标记开发及多态性分析 被引量：13

5

作者 王婷 黄智慧 +4 位作者 马爱军 马得友 王新安 夏丹丹 马本贺 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1300-1307,共8页

大菱鲆(Scophthalmus maximus)是最具商业价值和养殖前途的海水鱼类之一,雌雄间生长有一定的差异。其高通量雌雄转录组测序的完成为大规模鉴定和开发SNP标记提供了参考序列。本研究基于大菱鲆雌雄转录组测序数据,选择其中45个SNP位点,... 大菱鲆(Scophthalmus maximus)是最具商业价值和养殖前途的海水鱼类之一,雌雄间生长有一定的差异。其高通量雌雄转录组测序的完成为大规模鉴定和开发SNP标记提供了参考序列。本研究基于大菱鲆雌雄转录组测序数据,选择其中45个SNP位点,设计引物63组,其中21个位点(46.7%)应用小片段高分辨率熔解曲线(HRM)技术分型成功。对其进行多态性检测,21个位点均具有二个单倍型。观测杂合度Ho的分布范围为0.256—1.000,期望杂合度He的范围为0.276—0.518,19个位点符合Hardy-Weinberg平衡。14个SNP位点位于基因编码区,其中3个属于非同义突变。含有这些SNP位点的基因大多与信号转导和转录翻译相关。本研究结果表明,高通量转录组测序和小片段HRM适合大规模SNP标记开发,为大菱鲆的分子遗传育种提供了候选标记资源。 展开更多

关键词 大菱鲆 单核苷酸多态性(SNP) 转录组 高分辨率溶解曲线(hrm)

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小麦粒重基因TaGW2-6A等位变异的组成分析及育种选择 被引量：14

6

作者 寇程 高欣 +3 位作者 李立群 李扬 王中华 李学军 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1640-1647,共8页

位于6A染色体的Ta GW2是控制小麦籽粒大小的关键基因,已发现其第8外显子有一个T碱基插入等位变异,其启动子区存在Hap-6A?A及Hap-6A?G等位变异。利用高分辨率熔解曲线分析技术(high resolution melting curve analysis,HRM)和Hap-6A-P1/P... 位于6A染色体的Ta GW2是控制小麦籽粒大小的关键基因,已发现其第8外显子有一个T碱基插入等位变异,其启动子区存在Hap-6A?A及Hap-6A?G等位变异。利用高分辨率熔解曲线分析技术(high resolution melting curve analysis,HRM)和Hap-6A-P1/P2分子标记检测了316份小麦品种(系)的Ta GW2-6A基因在上述2个位点的等位变异,分析了其不同等位变异与粒长、粒宽和千粒重的相关性,并以大面积推广的大粒品种周麦22为例,解析Ta GW2-6A基因优异等位变异在系谱选育中的遗传传递。共检测到61份T碱基插入等位变异(命名为977T基因型)和255份无T碱基插入的等位变异(977?基因型)材料;在977T基因型中,Hap-6A?A(TA)和Hap-6A?G(TG)单倍型材料分别为29份和32份,在977?基因型中,Hap-6A?A(?A)和Hap-6A?G(?G)单倍型材料分别为160份和95份。关联分析表明,977T基因型与977?基因型的粒长(P<0.05)、粒宽(P<0.001)和千粒重(P<0.001)均有显著差异,Hap-6A?A单倍型与Hap-6A?G单倍型的粒长(P<0.05)、粒宽(P<0.05)和千粒重(P<0.001)也有显著差异。Ta GW2-6A基因编码区和启动子区等位变异之间存在相互作用,共同调控小麦籽粒的大小,其中TA单倍型比TG、?A、?G单倍型更能增加小麦的粒宽和粒重,是优异的等位变异组合。周麦22为TA单倍型,系谱分析表明,该等位变异并非来源于亲本周8425B,而是来源于亲本辉县红,且TA单倍型能够稳定遗传,但是在常规育种选择过程中可能会丢失。本研究筛选出的Ta GW2-6A优异等位变异TA单倍型材料及高通量分子检测方法为分子标记辅助育种提供材料和方法依据。 展开更多

关键词 小麦籽粒性状 TaGW2基因 等位变异 高分辨率熔解曲线(hrm) 分子标记辅助选择

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基于SNP标记的黄瓜杂交种纯度鉴定方法 被引量：28

7

作者 兰青阔 张桂华 +5 位作者 王永 赵新 朱珠 崔兴华 郭永泽 程奕 《中国蔬菜》 北大核心 2012年第03X期58-63,共6页

根据国际葫芦科基因组数据库CuGenDB中序列信息,应用高分辨率熔解曲线技术筛选出用于黄瓜杂交种纯度鉴定的SNP位点CLA6(A/G),该位点在33个市售黄瓜品种中的多态信息量为0.401,处于中度多态;结合焦磷酸测序技术,建立基于CLA6位点的SNP-Py... 根据国际葫芦科基因组数据库CuGenDB中序列信息,应用高分辨率熔解曲线技术筛选出用于黄瓜杂交种纯度鉴定的SNP位点CLA6(A/G),该位点在33个市售黄瓜品种中的多态信息量为0.401,处于中度多态;结合焦磷酸测序技术,建立基于CLA6位点的SNP-Pyrosequencing黄瓜杂交种纯度鉴定方法。利用该鉴定方法检测黄瓜杂交种优一90粒种子,结果其种子纯度为96.7%,该结果与CLA0位点及SSR鉴定结果相符,表明该鉴定技术适于黄瓜杂交种纯度鉴定,具有用于DUS测试分析的潜力。 展开更多

关键词 黄瓜 种子纯度 高分辨率溶解曲线 SNP标记 焦磷酸测序

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SLC30A8基因rs13266634 C/T单核苷酸多态性与2型糖尿病易感性的相关性研究 被引量：8

8

作者 刘阳 王占友 +1 位作者 池志宏 王涛 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期494-497,共4页

目的 探讨SLC30A8基因rs13266634 C/T单核苷酸多态性（SNP）与锦州地区2型糖尿病（T2DM）易感性之间的相关性。方法 基于病例-对照分析,采用聚合酶链反应（PCR）-高分辨率溶解曲线（HRM）方法对锦州地区136例2型糖尿病患者（T2DM组）和... 目的 探讨SLC30A8基因rs13266634 C/T单核苷酸多态性（SNP）与锦州地区2型糖尿病（T2DM）易感性之间的相关性。方法 基于病例-对照分析,采用聚合酶链反应（PCR）-高分辨率溶解曲线（HRM）方法对锦州地区136例2型糖尿病患者（T2DM组）和145例健康对照（NC组）SLC30A8基因rs13266634位点的单核苷酸多态性进行检测。结果 CC基因型频率T2DM组（38.23%）高于NC组（22.07%）;C等位基因频率T2DM组（61.76%）高于NC组（51.03%）,差异均具有统计学意义（P〈0.05）;等位基因C增加了2型糖尿病1.550倍患病风险（OR=1.550,95%CI：1.108-2.169,P〈0.05）。结论 SLC30A8基因rs13266634 C/T单核苷酸多态性与锦州地区T2DM的发病相关,C是风险等位基因。 展开更多

关键词 SLC30A8基因 单核苷酸多态性 高分辨率溶解曲线 2型糖尿病

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小麦粒重基因TaGW2-6A等位变异的高通量分子检测 被引量：3

9

作者 寇程 李学军 +5 位作者 高欣 吕千 杜登峰 程显 李扬 李立群 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1467-1475,共9页

为了开发出一种高通量的TaGW2-6A基因等位变异分子检测技术,利用高分辨率熔解曲线分析技术(High resolution melting curve analysis,HRM)检测了316份小麦材料的TaGW2-6A基因编码区T碱基插入等位变异以及启动子区Hap-6A-A(-593A和-739G)... 为了开发出一种高通量的TaGW2-6A基因等位变异分子检测技术,利用高分辨率熔解曲线分析技术(High resolution melting curve analysis,HRM)检测了316份小麦材料的TaGW2-6A基因编码区T碱基插入等位变异以及启动子区Hap-6A-A(-593A和-739G)和Hap-6A-G(-593G和-739A)等位变异,同时利用桑格测序和Hap-6A-P1/P2分子标记验证HRM的分析结果。结果表明,HRM技术能够准确、高效的检测TaGW2-6A基因的等位变异。在316份材料中,检测到61份T碱基插入等位变异材料(命名为TT基因型)和255份无T碱基插入的等位变异材料(命名为tt基因型);其中,189份为Hap-6A-A单倍型材料,127份为Hap-6A-G单倍型材料。 展开更多

关键词 小麦 TaGW2-6A基因 等位变异 高分辨率熔解曲线(hrm)

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三种检测内源性基因修饰方法比较

10

作者 李炜杰 杨娇 +3 位作者 何高明 王立民 皮文辉 周平 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期76-83,共8页

为获得准确的突变信息,除直接测序外,实验初步确定了3种人工核酸酶生物学活性检测方法。利用Surveyor nuclease、T7E1(T7 Endonuclease 1)和HRM(High resolution melt),均以变性退火突变型和野生型DNA序列形成扭曲的双螺旋DNA(distorted... 为获得准确的突变信息,除直接测序外,实验初步确定了3种人工核酸酶生物学活性检测方法。利用Surveyor nuclease、T7E1(T7 Endonuclease 1)和HRM(High resolution melt),均以变性退火突变型和野生型DNA序列形成扭曲的双螺旋DNA(distorted duplex DNA)为基础的3种人工核酸酶生物学活性检测方法,确定目标位点是否发生突变。实验成功检测出作用于绵羊MNST基因第一外显子的CRISPR/Cas9和第三外显子的TALEN目标位点发生突变,并对3种检测方法的结果和特点进行了分析比较,得出3种检测方法的优缺点,为实验室分析确定细胞利用非同源末端连接修复DNA双链断裂结果提供参考。 展开更多

关键词 基因组编辑 Surveyor核酸酶 T7 ENDONUCLEASE I 高分辨率熔解曲线(hrm)

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小麦粒重基因等位变异的高通量分子检测及组合分析 被引量：7

11

作者 仝靖洋 李少鹏 +7 位作者 刘胜杰 张琳雪 梁园园 张哲 聂小军 李学军 王中华 高欣 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1300-1308,共9页

TaCwi-A1、TaGW2-6A及TaSus2-2B基因是调控小麦粒重的基因,目前已发现TaCwi-A1基因存在TaCwi-A1a和TaCwi-A1b两种等位变异,TaGW2-6A存在启动子区Hap-6A-A和Hap-6A-G及编码区一个T碱基插入等位变异,TaSus2-2B存在SUS2-2B-H和SUS2-2B-L两... TaCwi-A1、TaGW2-6A及TaSus2-2B基因是调控小麦粒重的基因,目前已发现TaCwi-A1基因存在TaCwi-A1a和TaCwi-A1b两种等位变异,TaGW2-6A存在启动子区Hap-6A-A和Hap-6A-G及编码区一个T碱基插入等位变异,TaSus2-2B存在SUS2-2B-H和SUS2-2B-L两种等位变异。为了探究小麦粒重基因的综合效应,为粒重基因的分子辅助聚合育种提供方法依据与优异材料,本研究利用高分辨率熔解曲线分析(high-resolution melting curve analysis,HRM)技术分别检测了上述4个位点在262份小麦微核心种质材料中的变异类型,分析了不同变异及变异组合与粒长、粒宽和千粒重的相关性,并对变异组合在我国十个麦区的分布情况进行了分析。结果表明,TaCwi-A1a单倍型品种的千粒重显著高于TaCwi-A1b(P<0.05);Hap-6A-A单倍型与Hap-6A-G单倍型品种的粒长、粒宽及千粒重均无显著差异,T碱基插入等位变异(命名为TT单倍型)材料的粒宽和千粒重显著高于无T碱基插入等位变异(tt)材料(P<0.05);SUS2-2B-H单倍型品种的粒长和粒宽显著(P<0.05)高于SUS2-2B-L单倍型品种,千粒重极显著(P<0.01)高于SUS2-2B-L单倍型品种。对变异组合的分析表明,262份材料中仅出现了8种组合类型,变异组合与粒长及千粒重呈极显著相关(P<0.01),与粒宽相关不显著,其中Ⅳ型组合(TaCwi-A1a/Hap-6A-G/tt/SUS2-2B-H)为最优组合,Ⅲ型组合(TaCwi-A1a/Hap-6A-G/TT/SUS2-2B-L)为最差组合。我国十个麦区中七个麦区Ⅲ型组合分布频率最高,仅青藏麦区Ⅳ型组合分布频率较高。 展开更多

关键词 小麦 粒重基因 等位变异 高分辨率熔解曲线(hrm)

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稻香相关基因OsBADH2在“吉粳88”中的基因编辑研究 被引量：3

12

作者 周岩 郭嘉 +2 位作者 胡玉锋 魏健 李毅丹 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期88-94,共7页

近年来稻米的香味品质受到消费市场的格外重视。水稻OsBADH2基因是影响稻米香味的重要基因,选择优质粳稻品种,针对该基因进行基因编辑,有望创制出香味品质优异的粳稻材料。本研究通过分析OsBADH2基因外显子序列的保守性,选择了3个特异... 近年来稻米的香味品质受到消费市场的格外重视。水稻OsBADH2基因是影响稻米香味的重要基因,选择优质粳稻品种,针对该基因进行基因编辑,有望创制出香味品质优异的粳稻材料。本研究通过分析OsBADH2基因外显子序列的保守性,选择了3个特异性靶点,分别构建了U6启动子驱动的包含不同靶点的gRNA表达盒,并将其连入植物基因编辑表达载体。利用基因枪介导的瞬时转化体系,对非香型粳稻品种"吉粳88"进行遗传转化,T_0代共获得847株再生材料。经高分辨率溶解曲线(High Resolution Melting,HRM)分析和测序验证,24株T_0代材料的OsBADH2基因编辑靶点发生了不同类型的编辑。在T_1代材料中获得了7类不含转基因成分,且OsBADH2基因靶点纯合的基因编辑后代材料。本研究结果表明基于基因枪介导的瞬时转化体系,转化再生过程中省略了抗性筛选过程,并辅以高效的HRM检测,能够在T_1代即获得位点发生纯合编辑且无转基因成分的基因编辑后代材料。本研究获得的OsBADH2基因编辑的"吉粳88"后代材料也为培育香味品质改良的粳稻品种提供了新材料。 展开更多

关键词 基因组编辑 高分辨率溶解曲线 OsBADH2 水稻

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基于SNP标记的黄瓜遗传多样性分析 被引量：9

13

作者 姚丹青 楼坚锋 +2 位作者 朱文莹 张微微 夏建明 《上海农业学报》 CSCD 2017年第1期21-30,共10页

通过查询NCBI、葫芦科基因组网站数据库获得42个黄瓜候选SNP位点。应用高分辨率溶解曲线技术对71个市售黄瓜品种进行SNP位点筛选,并通过焦磷酸测序进行SNP基因分型分析,探索SNP标记在黄瓜品种鉴定中的应用前景。结果表明:42个SNP位点中... 通过查询NCBI、葫芦科基因组网站数据库获得42个黄瓜候选SNP位点。应用高分辨率溶解曲线技术对71个市售黄瓜品种进行SNP位点筛选,并通过焦磷酸测序进行SNP基因分型分析,探索SNP标记在黄瓜品种鉴定中的应用前景。结果表明:42个SNP位点中有30个位点的多态信息量为0.027-0.528,平均为0.247;71个黄瓜品种两两间的遗传相似系数分布在0.4032-0.9839,即30个SNP位点的基因分型数据信息可以将71份黄瓜品种区分开。 展开更多

关键词 黄瓜 遗传多样性 SNP标记 高分辨率溶解曲线 焦磷酸测序

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三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)CTL基因SNP位点E4-205 C/T与抗溶藻弧菌相关性分析

14

作者 郝贵杰 林锋 +6 位作者 母昌考 雷宁 黄爱霞 崔雁娜 沈亚芳 张海琪 文菁 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1434-1443,共10页

C-型凝集素(C-typelectin,CTL)是甲壳类动物体液免疫中重要的免疫因子之一。但CTL基因在溶藻弧菌对三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)感染的过程中的表达及抗病机制尚有待进一步研究。为初步阐明CTL基因SNP E4-205 C/T位点与抗溶藻... C-型凝集素(C-typelectin,CTL)是甲壳类动物体液免疫中重要的免疫因子之一。但CTL基因在溶藻弧菌对三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)感染的过程中的表达及抗病机制尚有待进一步研究。为初步阐明CTL基因SNP E4-205 C/T位点与抗溶藻弧菌感染相关的分子机制,对不同基因型梭子蟹进行溶藻弧菌感染,通过绝对定量方法分析不同基因型梭子蟹肝胰腺、肌肉组织中溶藻弧菌的复制情况。发现溶藻弧菌感染后12 h内梭子蟹肝胰腺、肌肉组织中C/C组细菌数量显著高于T/T组,结果表明T/T组梭子蟹抗感染能力显著高于C/C组。进一步对该位点非同义突变(ACT-ATT)导致的一个氨基酸改变(Thr-Ile)的两种蛋白进行体外重组表达,并对两种重组蛋白CTL-ATT及CTL-ACT进行活性分析。发现两种重组蛋白对溶藻弧菌生长均具有一定的抑制作用,CTL-ATT的抑菌活性显著高于CTL-ACT。重组蛋白CTL-ATT与PAMPs的结合活性高于CTL-ACT与PAMPs的结合活性,同时两种蛋白与PAMPs和溶藻弧菌的结合活性具有浓度依赖性。结果表明三疣梭子蟹CTL基因参与机体感染溶藻弧菌后的免疫应答过程,其单核苷酸多态性与抗溶藻弧菌感染存在一定的关联性,三疣梭子蟹CTL基因SNPE4-205C/T位点为T/T基因型时的抗溶藻弧菌感染能力强于C/C型。 展开更多

关键词 三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus) 溶藻弧菌 单核苷酸多态性 凝集素 高分辨率溶解曲线

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