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优化的SD大鼠小胶质细胞原代培养、纯化及采用高内涵细胞成像分析技术进行的细胞鉴定
被引量：
4
1
作者
刘检
王宇红
+3 位作者
凌佳
刘林
孟盼
杨蕙
《沈阳药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第11期968-973,共6页
目的建立一种优化的大鼠小胶质细胞(microglia,MG)原代培养及纯化方法,采用高内涵细胞成像分析技术(high content analysis,HCA)对其进行细胞鉴定。方法取1 d的新生SD大鼠,解剖显微镜下分离大脑皮质,机械剪碎成1 mm^3组织块,加入质量分...
目的建立一种优化的大鼠小胶质细胞(microglia,MG)原代培养及纯化方法,采用高内涵细胞成像分析技术(high content analysis,HCA)对其进行细胞鉴定。方法取1 d的新生SD大鼠,解剖显微镜下分离大脑皮质,机械剪碎成1 mm^3组织块,加入质量分数为0. 125%的胰蛋白酶和质量分数为0. 1%的胶原酶(体积比为1∶1)消化10 min后进行体外培养,分别观察接种5、7 d后小胶质细胞基本形态结构;采用低速震摇+温和消化+差速贴壁的三联法纯化细胞,分别观察纯化1、3、6 d后小胶质细胞基本形态结构;采用HCA技术对小胶质细胞进行其特异性抗体(ionized calcium binding adapter molecule 1,Iba-1)免疫细胞化学染色鉴定。结果经优化法培养的小胶质细胞,数量多、纯度高、活性好,细胞胞体狭长,突起形状不规则,呈单极、双极、蜘蛛状或其它分枝状,且分别可见静息态与活化态的细胞,并呈现典型的小胶质细胞特征和良好的生长状态;经优化法培养的小胶质细胞,采用HCA进行Iba-1免疫细胞化学染色鉴定,MG纯度质量分数达98%以上。结论建立了一种小胶质细胞原代培养及纯化方法,同时采用HCA技术成功对其进行细胞鉴定,为后续小胶质细胞相关体外研究奠定了良好的实验基础。
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关键词
小胶质
细胞
原代培养
纯化
鉴定
小胶质
细胞
特异性抗体(Iba-1)
高
内涵
细胞
成像
分析
技术
(
hca
)
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职称材料
大鼠脑皮质星形胶质细胞的原代培养、纯化及采用HCA技术进行GFAP鉴定
被引量：
16
2
作者
刘检
王宇红
+2 位作者
徐雅岚
杨蕙
李薇
《沈阳药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第7期581-587,共7页
目的探索大鼠脑皮质星形胶质细胞(astrocyte,AS)的分离、原代培养及纯化方法,采用高内涵细胞成像分析技术(high content analysis,HCA)对其进行胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)鉴定。方法取2、3 d的新生SD大鼠...
目的探索大鼠脑皮质星形胶质细胞(astrocyte,AS)的分离、原代培养及纯化方法,采用高内涵细胞成像分析技术(high content analysis,HCA)对其进行胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)鉴定。方法取2、3 d的新生SD大鼠,体视显微镜下获取大脑皮质,机械分离成1 mm3组织碎块,采用质量分数为0.25%的胰蛋白酶和0.2%的胶原酶(体积比为1∶1)消化后进行体外培养,分别观察接种1 h、3 d、5 d后原代AS基本形态结构,酶消化3 min后,接种30 min,5 d后传代AS基本形态结构;采用多次、多阶段的差速贴壁和震荡相结合的方法纯化细胞;采用HCA技术对AS进行GFAP免疫细胞化学鉴定。结果采用本法培养的大鼠脑皮质星形胶质细胞,数量多、活性佳、纯度高,胞突丰富且细长,并相互交织成网,呈现典型而良好的生长状态;经本法纯化后的星形胶质细胞,细胞纯度明显提高;经HCA技术进行GFAP鉴定,AS纯度质量分数达98%以上,且图片质量佳。结论建立了一种大鼠脑皮质星形胶质细胞原代培养及纯化方法,采用高内涵细胞成像分析技术进行GFAP鉴定的图片质量明显优于传统方法,该技术值得推广和应用。
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关键词
脑皮质
星形胶质
细胞
原代培养
纯化
高
内涵
细胞
成像
分析
技术
(
hca
)
鉴定
胶质纤维酸性蛋白(GFAP)
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职称材料
题名
优化的SD大鼠小胶质细胞原代培养、纯化及采用高内涵细胞成像分析技术进行的细胞鉴定
被引量：
4
1
作者
刘检
王宇红
凌佳
刘林
孟盼
杨蕙
机构
湖南中医药大学第一附属医院
湖南省中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地
出处
《沈阳药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第11期968-973,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(81403379
81573965
+2 种基金
81603604)
湖南省自然科学基金资助项目(2017JJ3241)
湖南省教育厅科学研究一般项目(17C1229)
文摘
目的建立一种优化的大鼠小胶质细胞(microglia,MG)原代培养及纯化方法,采用高内涵细胞成像分析技术(high content analysis,HCA)对其进行细胞鉴定。方法取1 d的新生SD大鼠,解剖显微镜下分离大脑皮质,机械剪碎成1 mm^3组织块,加入质量分数为0. 125%的胰蛋白酶和质量分数为0. 1%的胶原酶(体积比为1∶1)消化10 min后进行体外培养,分别观察接种5、7 d后小胶质细胞基本形态结构;采用低速震摇+温和消化+差速贴壁的三联法纯化细胞,分别观察纯化1、3、6 d后小胶质细胞基本形态结构;采用HCA技术对小胶质细胞进行其特异性抗体(ionized calcium binding adapter molecule 1,Iba-1)免疫细胞化学染色鉴定。结果经优化法培养的小胶质细胞,数量多、纯度高、活性好,细胞胞体狭长,突起形状不规则,呈单极、双极、蜘蛛状或其它分枝状,且分别可见静息态与活化态的细胞,并呈现典型的小胶质细胞特征和良好的生长状态;经优化法培养的小胶质细胞,采用HCA进行Iba-1免疫细胞化学染色鉴定,MG纯度质量分数达98%以上。结论建立了一种小胶质细胞原代培养及纯化方法,同时采用HCA技术成功对其进行细胞鉴定,为后续小胶质细胞相关体外研究奠定了良好的实验基础。
关键词
小胶质
细胞
原代培养
纯化
鉴定
小胶质
细胞
特异性抗体(Iba-1)
高
内涵
细胞
成像
分析
技术
(
hca
)
Keywords
microglias
primary culture
purification
identification
ionized calcium binding adapter molecule 1（Iba-1）
hca
分类号
R96 [医药卫生—药理学]
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职称材料
题名
大鼠脑皮质星形胶质细胞的原代培养、纯化及采用HCA技术进行GFAP鉴定
被引量：
16
2
作者
刘检
王宇红
徐雅岚
杨蕙
李薇
机构
湖南中医药大学第一附属医院
湖南省中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地
出处
《沈阳药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第7期581-587,共7页
基金
国家自然科学基金资助项目(81573965)
国家自然科学基金资助项目(81403379)
湖南省中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验培育基地开放基金资助项目(ZYFT201401)
文摘
目的探索大鼠脑皮质星形胶质细胞(astrocyte,AS)的分离、原代培养及纯化方法,采用高内涵细胞成像分析技术(high content analysis,HCA)对其进行胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)鉴定。方法取2、3 d的新生SD大鼠,体视显微镜下获取大脑皮质,机械分离成1 mm3组织碎块,采用质量分数为0.25%的胰蛋白酶和0.2%的胶原酶(体积比为1∶1)消化后进行体外培养,分别观察接种1 h、3 d、5 d后原代AS基本形态结构,酶消化3 min后,接种30 min,5 d后传代AS基本形态结构;采用多次、多阶段的差速贴壁和震荡相结合的方法纯化细胞;采用HCA技术对AS进行GFAP免疫细胞化学鉴定。结果采用本法培养的大鼠脑皮质星形胶质细胞,数量多、活性佳、纯度高,胞突丰富且细长,并相互交织成网,呈现典型而良好的生长状态;经本法纯化后的星形胶质细胞,细胞纯度明显提高;经HCA技术进行GFAP鉴定,AS纯度质量分数达98%以上,且图片质量佳。结论建立了一种大鼠脑皮质星形胶质细胞原代培养及纯化方法,采用高内涵细胞成像分析技术进行GFAP鉴定的图片质量明显优于传统方法,该技术值得推广和应用。
关键词
脑皮质
星形胶质
细胞
原代培养
纯化
高
内涵
细胞
成像
分析
技术
(
hca
)
鉴定
胶质纤维酸性蛋白(GFAP)
Keywords
cortical
astrocytes
primary culture
purification
hca
identification
glial fibrillary acidic protein（GFAP）
分类号
R96 [医药卫生—药理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
优化的SD大鼠小胶质细胞原代培养、纯化及采用高内涵细胞成像分析技术进行的细胞鉴定
刘检
王宇红
凌佳
刘林
孟盼
杨蕙
《沈阳药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
4
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职称材料
2
大鼠脑皮质星形胶质细胞的原代培养、纯化及采用HCA技术进行GFAP鉴定
刘检
王宇红
徐雅岚
杨蕙
李薇
《沈阳药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
16
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职称材料
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