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一种基于高内涵成像分析技术的快速检测RhoA蛋白激活的方法
1
作者
周亚男
曲颖
+2 位作者
王劭文
孙毅
苏瑞斌
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
北大核心
2024年第11期839-845,共7页
目的 利用高内涵成像分析系统(HCIS)建立快速检测Ras同源基因家族成员A(RhoA)蛋白激活的方法。方法 将人胚胎肾细胞293(Hek293)或仓鼠卵巢细胞(CHO)接种在96孔板中,待细胞贴壁后进行饥饿处理。Hek293细胞分别使用浓度为0(溶剂对照组),10...
目的 利用高内涵成像分析系统(HCIS)建立快速检测Ras同源基因家族成员A(RhoA)蛋白激活的方法。方法 将人胚胎肾细胞293(Hek293)或仓鼠卵巢细胞(CHO)接种在96孔板中,待细胞贴壁后进行饥饿处理。Hek293细胞分别使用浓度为0(溶剂对照组),10^(-11),10^(-10),10^(-9),10^(-8),10^(-7),10^(-6),10^(-5)和10^(-4)mol·L^(-1)RhoA激动剂诺考达唑孵育3,10和30 min;CHO细胞分别使用相同浓度诺考达唑、溶血磷脂酸(LPA)和钙肽素孵育3,10和30 min。孵育结束用3.7%甲醛溶液进行固定后,使用烟酸己可碱(hoechst)和罗丹明标记鬼笔环肽,室温避光染色,利用HCIS拍照并对图像进行分析和统计,以平均荧光强度(MFI)的变化评估药物对RhoA蛋白的激活。结果 与溶剂对照组相比,处理Hek293细胞3 min后诺考达唑10^(-10)~10^(-6)mol·L^(-1)组MFI显著升高(P<0.01),处理30 min后10^(-10)~10^(-4)mol·L^(-1)组MFI升高(P<0.01),表明RhoA蛋白被激活。在CHO细胞上,与溶剂对照组相比,诺考达唑10^(-10)~10^(-6)mol·L^(-1)处理10和30 min MFI均升高(P<0.05,P<0.01);LPA 10^(-11)~10^(-4)mol·L^(-1)处理3 min和10^(-11),10^(-8)~10^(-4)mol·L^(-1)处理10 min及10^(-11)~10^(-9),10^(-7),10^(-6),10^(-4)mol·L^(-1)处理30 min MFI均升高(P<0.05,P<0.01);钙肽素10^(-11)~10^(-6),10^(-4)mol·L^(-1)处理10 min及10^(-11)和10^(-4)mol·L^(-1)处理30 min MFI均升高(P<0.05,P<0.01),均表明RhoA蛋白被有效激活。结论 成功建立了快速检测RhoA蛋白激活的方法,可实现高通量、快速、高效、便捷地对RhoA蛋白的激活进行检测。
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关键词
Ras同源基因家族成员A
蛋白检测
高内涵成像分析
荧光染色
高
通量
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职称材料
补骨脂素在2D/3D肝细胞模型上的毒性比较及对线粒体融合分裂的影响
被引量：
2
2
作者
赵琳
苏世家
+2 位作者
王嘉瑞
于英莉
周昆
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第12期1853-1859,共7页
目的分别使用二维(2D)和三维(3D)培养的人肝癌细胞(human hepatocellular carcinomas,HepG2)模型评价补骨脂素的毒性并比较其差异。方法采用低吸附U形底多孔板法构建了HepG2细胞的3D细胞模型。补骨脂素处理24 h后,CCK-8法检测细胞存活率...
目的分别使用二维(2D)和三维(3D)培养的人肝癌细胞(human hepatocellular carcinomas,HepG2)模型评价补骨脂素的毒性并比较其差异。方法采用低吸附U形底多孔板法构建了HepG2细胞的3D细胞模型。补骨脂素处理24 h后,CCK-8法检测细胞存活率,试剂盒检测LDH漏出量,TMRM染色检测线粒体膜电位。Q-PCR检测补骨脂素对线粒体融合分裂蛋白DRP1、Mfn-2及OPA1的mRNA的影响。结果3D模型可以长时间保持高水平白蛋白和尿素氮分泌,较2D模型具有更高的CYP1A2、CYP2E1、CYP3A4和UGT1A1表达水平。在3D模型中,补骨脂素较低浓度出现细胞存活率的明显降低,LDH漏出量明显升高以及线粒体膜电位的下降。Q-PCR结果显示补骨脂素诱导线粒体分裂蛋白DRP1表达明显增加,而线粒体融合蛋白OPA1明显下降。结论成功构建了3D HepG2细胞模型并应用于对补骨脂素肝毒性的评价;3D细胞培养模型对补骨脂素毒性反应更为敏感,线粒体在补骨脂素诱导细胞损伤中可能起关键性作用。
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关键词
补骨脂素
肝毒性
线粒体损伤
2D模型
3D模型
高内涵成像分析
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职称材料
题名
一种基于高内涵成像分析技术的快速检测RhoA蛋白激活的方法
1
作者
周亚男
曲颖
王劭文
孙毅
苏瑞斌
机构
南京中医药大学
军事医学研究院国家安全特需药品全国重点实验室
出处
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
北大核心
2024年第11期839-845,共7页
基金
全国重点实验室自主研究课题重点项目(LTMC2022ZZ003)。
文摘
目的 利用高内涵成像分析系统(HCIS)建立快速检测Ras同源基因家族成员A(RhoA)蛋白激活的方法。方法 将人胚胎肾细胞293(Hek293)或仓鼠卵巢细胞(CHO)接种在96孔板中,待细胞贴壁后进行饥饿处理。Hek293细胞分别使用浓度为0(溶剂对照组),10^(-11),10^(-10),10^(-9),10^(-8),10^(-7),10^(-6),10^(-5)和10^(-4)mol·L^(-1)RhoA激动剂诺考达唑孵育3,10和30 min;CHO细胞分别使用相同浓度诺考达唑、溶血磷脂酸(LPA)和钙肽素孵育3,10和30 min。孵育结束用3.7%甲醛溶液进行固定后,使用烟酸己可碱(hoechst)和罗丹明标记鬼笔环肽,室温避光染色,利用HCIS拍照并对图像进行分析和统计,以平均荧光强度(MFI)的变化评估药物对RhoA蛋白的激活。结果 与溶剂对照组相比,处理Hek293细胞3 min后诺考达唑10^(-10)~10^(-6)mol·L^(-1)组MFI显著升高(P<0.01),处理30 min后10^(-10)~10^(-4)mol·L^(-1)组MFI升高(P<0.01),表明RhoA蛋白被激活。在CHO细胞上,与溶剂对照组相比,诺考达唑10^(-10)~10^(-6)mol·L^(-1)处理10和30 min MFI均升高(P<0.05,P<0.01);LPA 10^(-11)~10^(-4)mol·L^(-1)处理3 min和10^(-11),10^(-8)~10^(-4)mol·L^(-1)处理10 min及10^(-11)~10^(-9),10^(-7),10^(-6),10^(-4)mol·L^(-1)处理30 min MFI均升高(P<0.05,P<0.01);钙肽素10^(-11)~10^(-6),10^(-4)mol·L^(-1)处理10 min及10^(-11)和10^(-4)mol·L^(-1)处理30 min MFI均升高(P<0.05,P<0.01),均表明RhoA蛋白被有效激活。结论 成功建立了快速检测RhoA蛋白激活的方法,可实现高通量、快速、高效、便捷地对RhoA蛋白的激活进行检测。
关键词
Ras同源基因家族成员A
蛋白检测
高内涵成像分析
荧光染色
高
通量
Keywords
RhoA
protein detection
high-content imaging analysis
fluorescent staining
high-throughput
分类号
R965 [医药卫生—药理学]
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职称材料
题名
补骨脂素在2D/3D肝细胞模型上的毒性比较及对线粒体融合分裂的影响
被引量：
2
2
作者
赵琳
苏世家
王嘉瑞
于英莉
周昆
机构
天津中医药大学中医药研究院
天津中医药大学省部共建组分中药国家重点实验室
出处
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第12期1853-1859,共7页
基金
组分中药国家重点实验室资助课题(No QMJJ202104)
国家自然科学基金资助项目(No 81673826)。
文摘
目的分别使用二维(2D)和三维(3D)培养的人肝癌细胞(human hepatocellular carcinomas,HepG2)模型评价补骨脂素的毒性并比较其差异。方法采用低吸附U形底多孔板法构建了HepG2细胞的3D细胞模型。补骨脂素处理24 h后,CCK-8法检测细胞存活率,试剂盒检测LDH漏出量,TMRM染色检测线粒体膜电位。Q-PCR检测补骨脂素对线粒体融合分裂蛋白DRP1、Mfn-2及OPA1的mRNA的影响。结果3D模型可以长时间保持高水平白蛋白和尿素氮分泌,较2D模型具有更高的CYP1A2、CYP2E1、CYP3A4和UGT1A1表达水平。在3D模型中,补骨脂素较低浓度出现细胞存活率的明显降低,LDH漏出量明显升高以及线粒体膜电位的下降。Q-PCR结果显示补骨脂素诱导线粒体分裂蛋白DRP1表达明显增加,而线粒体融合蛋白OPA1明显下降。结论成功构建了3D HepG2细胞模型并应用于对补骨脂素肝毒性的评价;3D细胞培养模型对补骨脂素毒性反应更为敏感,线粒体在补骨脂素诱导细胞损伤中可能起关键性作用。
关键词
补骨脂素
肝毒性
线粒体损伤
2D模型
3D模型
高内涵成像分析
Keywords
psoralen
hepatotoxicity
mitochondrial damage
2D model
3D model
high content imaging analysis
分类号
R284.1 [医药卫生—中药学]
R322.47 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
R329.24 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
R363-332 [医药卫生—病理学]
R994.2 [医药卫生—毒理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
一种基于高内涵成像分析技术的快速检测RhoA蛋白激活的方法
周亚男
曲颖
王劭文
孙毅
苏瑞斌
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
北大核心
2024
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
补骨脂素在2D/3D肝细胞模型上的毒性比较及对线粒体融合分裂的影响
赵琳
苏世家
王嘉瑞
于英莉
周昆
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
2
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职称材料
已选择
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