目的探讨高三尖杉酯碱(HHT)对HT29人结直肠肿瘤细胞增殖和凋亡调控的分子机制。方法用(0、0.0078125、0.015625、0.03125、0.0625、0.125、0.25、0.5、1、2、4、8)μg/m L HHT分别处理HT29细胞24、48、72 h。CCK-8法检测HT29细胞的增殖...目的探讨高三尖杉酯碱(HHT)对HT29人结直肠肿瘤细胞增殖和凋亡调控的分子机制。方法用(0、0.0078125、0.015625、0.03125、0.0625、0.125、0.25、0.5、1、2、4、8)μg/m L HHT分别处理HT29细胞24、48、72 h。CCK-8法检测HT29细胞的增殖,集落形成实验检测细胞的集落形成能力;Hoechst33258染色观察染色质凝集情况,流式细胞术检测细胞凋亡;实时定量PCR检测BAX、Bcl2、胱天蛋白酶3(caspase-3)、caspase-9、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、丙酮酸脱氢酶激酶(PDK1)、蛋白激酶B(AKT)、雷帕霉素靶蛋白调节相关蛋白(raptor)、雷帕霉素不敏感的伴侣蛋白(rictor)的mRNA水平;Western blot法检测BAX、Bcl2、胱天蛋白酶3前体(pro-caspase-3)、裂解型caspase-3(c-caspase-3)、pro-caspase-9、裂解型caspase-9(c-caspase-9)、多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、裂解型PARP(c-PARP)、mTOR、raptor、rictor、PI3K、PDK1、AKT、p-AKT的蛋白水平。结果与对照组相比,HHT能抑制HT29细胞增殖,诱导细胞核破裂,染色质凝聚,凋亡小体形成;同时,HHT处理能够提高HT29细胞中BAX/Bcl2比值、caspase-3、caspase-9、raptor的mRNA水平,降低PI3K、AKT、rictor的mRNA水平;并上调HT29细胞中c-caspase-3、c-caspase-9、c-PARP、BAX、raptor蛋白水平,下调pro-caspase-3、pro-caspase-9、PARP、PI3K、PDK1、AKT、mTOR、rictor蛋白水平。结论 HHT能够通过阻断mTOR信号通路,进而抑制HT29人结直肠肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡。展开更多
本研究探讨干扰素-α(IFN-α)联合高三尖杉酯碱(HHT)对K562细胞增殖、凋亡、细胞周期及β-环联蛋白(β-catenin)基因表达的影响。用IFN-α、HHT单药或两药联合处理后,K562细胞的增殖、凋亡、细胞周期及β-catenin mRNA表达水平分别用MTT...本研究探讨干扰素-α(IFN-α)联合高三尖杉酯碱(HHT)对K562细胞增殖、凋亡、细胞周期及β-环联蛋白(β-catenin)基因表达的影响。用IFN-α、HHT单药或两药联合处理后,K562细胞的增殖、凋亡、细胞周期及β-catenin mRNA表达水平分别用MTT法,流式细胞术及RT-PCR方法检测。结果显示,单用HHT能明显抑制K562细胞增殖,诱导凋亡,使细胞阻滞在G0/G1期,β-catenin表达下调,呈时间和剂量依赖性,而IFN-α无此作用。HHT组的β-catenin表达水平为0.5576±0.0373,低于空白对照组(0.9369±0.0142)。IFN-α联用HHT组β-catenin表达较单用HHT组下调更显著(0.3737±0.0529 vs 0.5576±0.0373,P<0.05)。HHT联合IFN-α对正常人骨髓单个核细胞未见明显毒性作用。结论:IFN-α联用HHT可明显增强后者的抗K562细胞作用,而β-catenin表达下调可能为其作用机制之一。展开更多
文摘本研究探讨干扰素-α(IFN-α)联合高三尖杉酯碱(HHT)对K562细胞增殖、凋亡、细胞周期及β-环联蛋白(β-catenin)基因表达的影响。用IFN-α、HHT单药或两药联合处理后,K562细胞的增殖、凋亡、细胞周期及β-catenin mRNA表达水平分别用MTT法,流式细胞术及RT-PCR方法检测。结果显示,单用HHT能明显抑制K562细胞增殖,诱导凋亡,使细胞阻滞在G0/G1期,β-catenin表达下调,呈时间和剂量依赖性,而IFN-α无此作用。HHT组的β-catenin表达水平为0.5576±0.0373,低于空白对照组(0.9369±0.0142)。IFN-α联用HHT组β-catenin表达较单用HHT组下调更显著(0.3737±0.0529 vs 0.5576±0.0373,P<0.05)。HHT联合IFN-α对正常人骨髓单个核细胞未见明显毒性作用。结论:IFN-α联用HHT可明显增强后者的抗K562细胞作用,而β-catenin表达下调可能为其作用机制之一。
