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川陕哲罗鲑髓样分化因子88的克隆、表达及免疫功能分析
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作者 陈叶雨 吴晓雲 +7 位作者 杨焕超 刘钊 陈彦伶 林珏 李华 文典 王渝栋 谭平 《西南农业学报》 北大核心 2025年第1期182-191,共10页
【目的】疾病防控是濒危物种保护管理不可缺少的一个方面,为更深入了解我国一级保护动物川陕哲罗鲑的免疫系统特征,对炎症通路的关键分化因子MyD88(髓样分化因子88)在川陕哲罗鲑中的潜在免疫功能进行研究。【方法】利用川陕哲罗鲑全长... 【目的】疾病防控是濒危物种保护管理不可缺少的一个方面,为更深入了解我国一级保护动物川陕哲罗鲑的免疫系统特征,对炎症通路的关键分化因子MyD88(髓样分化因子88)在川陕哲罗鲑中的潜在免疫功能进行研究。【方法】利用川陕哲罗鲑全长转录组数据库获得MyD88基因的cDNA序列,分析其氨基酸结构及进化关系,同时分析其在健康川陕哲罗鲑各组织及LPS和poly(I:C)刺激下的表达模式。【结果】川陕哲罗鲑MyD88具有典型的死亡结构域和TIR结构域。氨基酸序列比较表明,川陕哲罗鲑MyD88与其他脊椎动物具有较高的同源性,其中与鲑科鱼类的同源性最高。系统发育分析表明,川陕哲罗鲑MyD88与鲑科鱼类聚为一支;此外,它们与其他鱼类的同源基因聚在一起,而哺乳动物的MyD88聚集在一个单独的分支上。组织分布分析显示,MyD88在所有组织中广泛表达,其中在头肾、中肾、脾脏和鳃中均高表达。LPS和poly(I:C)刺激后,头肾和脾脏中MyD88的表达显著上调。【结论】研究揭示了MyD88基因在川陕哲罗鲑免疫应答中的潜在作用,为今后川陕哲罗鲑的疾病防治提供理论依据。 展开更多
关键词 分化因子88 川陕哲罗鲑 组织分布 免疫反应
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红嘴鸥髓样分化因子88基因序列分析、蛋白表达及其多克隆抗体的制备
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作者 张宏莉 王一涵 +2 位作者 马俊蕊 段纲 常华 《福建农业学报》 北大核心 2025年第4期361-369,共9页
【目的】分析红嘴鸥(Larus ridibundus)髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88, MyD88)基因序列并制备多克隆抗体,以期了解红嘴鸥MyD88蛋白的结构和功能,获得针对该物种天然免疫信号通路机制的研究工具。【方法】采用Trizo... 【目的】分析红嘴鸥(Larus ridibundus)髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88, MyD88)基因序列并制备多克隆抗体,以期了解红嘴鸥MyD88蛋白的结构和功能,获得针对该物种天然免疫信号通路机制的研究工具。【方法】采用Trizol法提取红嘴鸥外周血淋巴细胞的总RNA,通过RT-PCR扩增MyD88基因,利用生物信息学软件对红嘴鸥MyD88基因的相似性、亲缘关系、蛋白理化性质、蛋白二级和三级结构等进行分析;构建红嘴鸥MyD88基因重组原核表达载体,转化获得MyD88重组蛋白原核表达菌株并优化诱导条件获得重组表达蛋白。采用Ni柱法、超滤法和梯度透析方式纯化重组蛋白,将其与弗氏佐剂乳化后免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体血清,通过双向琼脂扩散实验测定多抗血清滴度,同时通过SDS-PAGE和Western Blotting对MyD88重组蛋白多克隆抗体的特异性进行鉴定。【结果】红嘴鸥MyD88基因CDS区长921 bp,共编码306个氨基酸;该基因同三趾鸥(Rissa tridactyla)的基因相似性最高,为98.8%,同绿头鸭(Anas platyrhynchos)MyD88基因相似性较低,为84.6%;进化树结果表明,其与三趾鸥亲缘关系最近,同家禽类亲缘关系较远;其编码蛋白的分子大小约34.5 kDa,含1个N-糖基化位点和24个磷酸化位点,无信号肽和跨膜结构,属于亲水性蛋白;MyD88蛋白二级结构以无规则卷曲为主,三级结构与二级结构一致,且蛋白含有完整的死亡结构域和TIR结构域。红嘴鸥MyD88重组蛋白在37℃、1.0 mmoL·L^(-1)IPTG诱导4 h时表达最佳,大小为54 kDa。制备的多克隆抗体血清效价为1∶16,能识别红嘴鸥MyD88重组蛋白,具有较好的特异性。【结论】红嘴鸥MyD88基因编码蛋白为富含磷酸化位点且具有完整死亡结构域和TIR结构域的亲水性蛋白。红嘴鸥MyD88重组蛋白能在体外进行大量表达且具有较好的免疫原性,制备的多克隆抗体具有较好的特异性。 展开更多
关键词 红嘴鸥 分化因子88 序列分析 蛋白原核表达 多克隆抗体
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芒果苷对慢性炎症大鼠外周血单核细胞髓样分化因子88表达的影响 被引量:5
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作者 卫智权 邓家刚 +1 位作者 阎莉 邓静 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期482-486,共5页
目的探讨芒果苷对脂多糖诱导慢性炎症大鼠外周血单核细胞髓样分化因子88表达的调控作用。方法以间断尾静脉注射小剂量脂多糖(200μg.kg-1)建立慢性炎症大鼠模型,大鼠随机分为对照组、模型组、泼尼松(5 mg.kg-1.d-1)组与芒果苷高、中、... 目的探讨芒果苷对脂多糖诱导慢性炎症大鼠外周血单核细胞髓样分化因子88表达的调控作用。方法以间断尾静脉注射小剂量脂多糖(200μg.kg-1)建立慢性炎症大鼠模型,大鼠随机分为对照组、模型组、泼尼松(5 mg.kg-1.d-1)组与芒果苷高、中、低剂量(MGF-H、MGF-M、MGF-L,200、100、50 mg.kg-1.d-1)组,灌胃给药,共4周。第4周末分离外周血单核细胞并经磁珠分选纯化,分别以RT-PCR、流式细胞术检测单核细胞髓样分化因子88的表达水平。结果与模型组比较,MGFH组外周血单核细胞髓样分化因子88过表达被明显抑制,全血白细胞计数与血清超敏C反应蛋白水平明显降低。结论芒果苷可抑制脂多糖诱导慢性炎症大鼠外周血单核细胞髓样分化因子88的过表达,可能与其抗炎作用有关。 展开更多
关键词 芒果苷 慢性炎症 分化因子88 丝裂原激活的蛋白激酶 单核细胞 脂多糖
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新生儿窒息后Toll样受体4及髓样分化因子88表达变化在多器官功能障碍综合征中的意义 被引量:6
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作者 王胜会 董文斌 +2 位作者 黄俊梅 熊安芳 雷小平 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期780-784,共5页
目的研究窒息新生儿外周血单个核细胞(PBMCs)Toll样受体4(TLR4)及其信号转导途径中髓样分化因子88(MyD88)的变化与新生儿窒息后多器官功能障碍综合征(MODS)的关系。方法对窒息后24h之内入院的50例窒息新生儿和10例健康足月新生儿,应用... 目的研究窒息新生儿外周血单个核细胞(PBMCs)Toll样受体4(TLR4)及其信号转导途径中髓样分化因子88(MyD88)的变化与新生儿窒息后多器官功能障碍综合征(MODS)的关系。方法对窒息后24h之内入院的50例窒息新生儿和10例健康足月新生儿,应用免疫组化的方法检测窒息后第1、3、7天(PBMCs)TLR4及MyD88的表达情况,并与窒息后全身炎症反应综合征(SIRS)和MODS的发生及预后情况进行比较。结果①窒息新生儿外周血单个核细胞的TLR4和MyD88的表达在窒息后第1天增强,第3天开始减弱,第7天左右恢复正常。②在窒息后第1天,TLR4和MyD88的表达与新生儿危重症评分呈显著负相关(r=-0.74、-0.73,P均<0.01),TLR4和MyD88两者呈显著正相关(r=0.70,P<0.01);发生SIRS、MODS和预后差的病例,其窒息后第1天TLR4和MyD88的表达呈++~+++的比例增多,与未发生SIRS、MODS和预后好的病例相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论新生儿窒息早期可能激活了TLR4及其信号转导通路MyD88,引起单核巨噬细胞系统释放一系列炎症因子,导致了SIRS和MODS的发生。TLR4及其信号转导通路MyD88可以作为诊断新生儿窒息后SIRS和MODS的早期指标和估计预后的指标之一。 展开更多
关键词 新生儿 窒息Toll受体4 分化因子88 全身炎症反应综合征 多器官功能障碍综合征
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白蛋白治疗对小鼠脑缺血早期脑组织Toll样受体4和骨髓分化因子88mRNA表达的影响 被引量:5
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作者 王敏 王永明 +3 位作者 李海东 沈炳玲 叶静 姚小梅 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2011年第2期164-167,共4页
目的研究人血白蛋白治疗对局灶性脑缺血再灌注小鼠脑组织Toll样受体4(TLR4)和骨髓分化因子88(MyD88)mRNA表达的影响。方法健康雄性成年昆明小鼠54只,随机分为假手术组(14只)、生理盐水组(20只)和白蛋白组(20只),每组又均分为再灌后6、24... 目的研究人血白蛋白治疗对局灶性脑缺血再灌注小鼠脑组织Toll样受体4(TLR4)和骨髓分化因子88(MyD88)mRNA表达的影响。方法健康雄性成年昆明小鼠54只,随机分为假手术组(14只)、生理盐水组(20只)和白蛋白组(20只),每组又均分为再灌后6、24 h 2个时间点。采用左侧大脑中动脉线栓法制备小鼠局灶性脑缺血再灌注模型,RT-PCR法检测左侧脑组织TLR4、MyD88 mRNA的表达水平,并进行神经功能缺损评分。结果生理盐水组和白蛋白组脑缺血再灌注后6、24 h TLR4、MyD88 mRNA表达水平明显高于假手术组,且24 h表达水平升高更明显(P<0.05);但白蛋白组6、24 h TLR4、MyD88 mRNA表达量明显低于生理盐水组(P<0.05);24 h白蛋白组小鼠的神经功能缺损评分与生理盐水组比较有明显改善(P<0.05);24 h TLR4、MyD88 mRNA表达水平与神经功能缺损评分呈正相关(r=0.92,r=0.85,P<0.05)。结论白蛋白治疗可以下调脑缺血早期脑组织高表达的TLR4、MyD88 mRNA的水平,改善脑缺血后小鼠神经功能缺损。 展开更多
关键词 白蛋白类 脑缺血 TOLL受体4 分化因子88 RNA 信使
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灯盏花素对高糖作用下大鼠腹膜间皮细胞髓样分化因子88、肿瘤坏死因子-α表达的影响 被引量:4
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作者 钟晓娟 周伟东 +2 位作者 黄波 潘金英 王艳靖 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第17期2790-2792,共3页
目的:研究灯盏花素对高糖作用下大鼠腹膜间皮细胞(rat peritoneal mesothelial cells,RPMCS)髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响。方法:采用腹膜... 目的:研究灯盏花素对高糖作用下大鼠腹膜间皮细胞(rat peritoneal mesothelial cells,RPMCS)髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响。方法:采用腹膜组织块消化法获取RPMCS并进行原代培养,第3代细胞分组培养:(1)对照组;(2)1.5%、2.5%、4.25%葡萄糖组:用1.5%、2.5%、4.25%葡萄糖分别培养细胞4、6、8 h;(3)各浓度组培养细胞6 h后加入灯盏花素干预8 h。MTT法测定各组的OD值,ELISA法检测上清液中MyD88、TNF-α的浓度。结果:腹透液培养后,RPMCS的OD值较对照组显著降低(P<0.01),细胞增殖下降,且葡萄糖浓度越高,刺激时间越长,OD值下降越显著(P<0.05)。加入灯盏花素干预后,各组OD值升高(P<0.05)。各组加入葡萄糖后与对照组比较MyD88、TNF-α表达显著升高(P<0.01),灯盏花素干预后二者的表达下降(P<0.05)。结论:高糖抑制RPMCS增殖,刺激细胞MyD88、TNF-α表达上调,灯盏花素可缓解高糖对细胞增殖的抑制,下调炎症因子的表达,改善腹膜炎症,保护腹膜功能。 展开更多
关键词 灯盏细辛 灯盏花素 腹膜间皮细胞 高糖 分化因子88 肿瘤坏死因子
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人胎盘胎儿来源间充质干细胞通过下调髓样分化因子88和转化生长因子β信号通路减轻小鼠肺纤维化 被引量:2
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作者 陶金 李庆伦 +4 位作者 马晓薇 韩飞 刘晓明 魏军 朱永朝 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1347-1351,共5页
目的探讨无血清培养人胎盘胎儿来源间充质干细胞(hf PMSC)对博来霉素所致小鼠肺纤维化的疗效及分子机制。方法培养并采用流式细胞术鉴定hf PMSC,取无特定病原体级雄性6周龄C57BL/6J小鼠随机分为博来霉素组、hf PMSC治疗组和阴性对照组... 目的探讨无血清培养人胎盘胎儿来源间充质干细胞(hf PMSC)对博来霉素所致小鼠肺纤维化的疗效及分子机制。方法培养并采用流式细胞术鉴定hf PMSC,取无特定病原体级雄性6周龄C57BL/6J小鼠随机分为博来霉素组、hf PMSC治疗组和阴性对照组。博来霉素组和hf PMSC治疗组分别经气管内注入50μL博莱霉素(1 g/L)制备肺纤维化模型,阴性对照组经气管内注入50μL PBS。hf PMSC治疗组,在造模3 d后,经尾静脉注射200μL含5×105个hf PMSC。第21天全部处死各实验组小鼠,取肺组织进行HE染色、Masson染色以及胶原蛋白含量测定;提取各组肺组织总蛋白,Western blot法检测髓样分化因子88(My D88)、转化生长因子β(TGF-β)的表达;ELISA检测各组血清中TGF-β的浓度。结果所培养具有典型的间充质干细胞形态特征并表达表面标志分子CD73、CD90和CD105,而不表达CD14、CD34和CD45。与博来霉素组比较,HE和Masson染色显示,hf PMSC治疗组可显著性降低肺组织纤维化程度、降低肺组织胶原蛋白含量以及My D88和TGF-β蛋白水平。结论hf PMSC可通过My D88下调TGF-β的表达减轻小鼠肺纤维化。 展开更多
关键词 人胎盘 间充质干细胞 肺纤维化 分化因子88(My D88) 转化生长因子β(TGF-β)
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髓样分化因子88基因rs7744多态性与冠状动脉粥样硬化性心脏病易感性及严重程度的关系 被引量:2
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作者 孙丹丹 吴玉鹏 +3 位作者 刘文 闫虹 王红鹄 杨军 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期519-523,共5页
目的探讨中国北方汉族人群髓样分化因子88(MyD88)基因3’非编码区(3’-UTR)rs7744多态性与冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)发病风险及严重程度的关系。方法收集2013年9月至2015年9月中国医科大学附属第一医院血液标本810例。CAD组540例,... 目的探讨中国北方汉族人群髓样分化因子88(MyD88)基因3’非编码区(3’-UTR)rs7744多态性与冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)发病风险及严重程度的关系。方法收集2013年9月至2015年9月中国医科大学附属第一医院血液标本810例。CAD组540例,对照组270例,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测rs7744多态性,并收集临床资料。结果 MyD88基因rs7744符合Hardy-Weiberg平衡(P>0.1)。对MyD88基因rs7744多态性与CAD发病风险的关系进行总体和分层分析。MyD88基因rs7744多态位点,年龄<50岁,AG突变杂合型携带者CAD的发病风险是AA野生纯合型携带者的0.38倍(95%CI:0.17~0.93;P=0.029)。对My D88基因rs7744多态性与CAD严重程度的关系进行冠状动脉病变支数及改良Gensini评分分析。在改良Gensini评分分析中,My D88基因rs7744多态位点,GG突变纯合型携带者的改良Gensini评分显著低于AA野生纯合型携带者(5.23±3.85 vs 7.49±4.96;P=0.011)。结论 MyD88基因3’-UTR区rs7744多态性与CAD发病风险及严重程度存在关联关系。携带rs7744突变基因型的年龄<50岁人群,CAD的发病率比较低。rs7744突变基因型携带者的改良Gensini评分显著低于野生型携带者。 展开更多
关键词 冠状动脉粥硬化性心脏病 发病风险或易感性 改良Gensini评分 分化因子88 基因多态性
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髓样分化因子88抑制剂ST2825对重组耻垢分枝杆菌感染THP-1细胞自噬的影响 被引量:3
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作者 胡少婷 李升锦 黄秦 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期562-564,572,共4页
目的探讨髓样分化因子88抑制剂ST2825对重组耻垢分枝杆菌感染THP-1细胞自噬的影响。方法使用髓样分化因子88抑制剂ST2825作用于重组耻垢分枝杆菌感染的THP-1细胞,确定ST2825干预的实验组、无ST2825作用的对照组以及空白组。运用荧光显... 目的探讨髓样分化因子88抑制剂ST2825对重组耻垢分枝杆菌感染THP-1细胞自噬的影响。方法使用髓样分化因子88抑制剂ST2825作用于重组耻垢分枝杆菌感染的THP-1细胞,确定ST2825干预的实验组、无ST2825作用的对照组以及空白组。运用荧光显微镜观察自噬小体,RT-PCR检测Beclin-1基因和Bcl-2基因的m RNA的表达。结果与对照组比较,实验组的自噬荧光小点数目明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05);RT-PCR检测结果显示Beclin-1和Bcl-2 m RNA表达较对照组下调。结论髓样分化因子88抑制剂ST2858可能通过干扰Beclin-1和Bcl-2的分离,抑制THP-1细胞自噬。 展开更多
关键词 分化因子88 ST2825 重组耻垢分枝杆菌
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髓样分化因子88在结直肠癌患者癌组织中的表达及其临床意义 被引量:1
10
作者 朱广伟 郑炜 +3 位作者 黄永建 华进 杨树钢 叶建新 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期1047-1051,共5页
目的:分析髓样分化因子88(MyD88)在结直肠癌患者癌组织和癌旁组织中的表达,探讨其表达与结直肠癌患者临床病理参数和预后的关系,阐明MyD88表达的临床意义。方法:收集90例结直肠癌患者的癌组织及其相对应的癌远旁组织标本并分析其临床病... 目的:分析髓样分化因子88(MyD88)在结直肠癌患者癌组织和癌旁组织中的表达,探讨其表达与结直肠癌患者临床病理参数和预后的关系,阐明MyD88表达的临床意义。方法:收集90例结直肠癌患者的癌组织及其相对应的癌远旁组织标本并分析其临床病理资料,免疫组织化学法检测MyD88在结直肠癌及癌远旁组织中的表达,应用Image-Pro Plus 6.0软件半定量分析MyD88在不同组织中的表达水平,采用Kaplan-Meier法对90例结直肠癌患者进行生存分析。结果:MyD88在结直肠癌组织中的表达水平明显高于癌远旁组织(P<0.01);MyD88表达水平与结直肠癌患者年龄、性别、肿瘤大小和组织学分化无明显关联(P>0.05),MyD88表达水平与结直肠癌患者临床分期、T分期、M分期和淋巴结转移状态有关联(P<0.05);MyD88高表达组结直肠癌患者生存率明显低于MyD88低表达组(P<0.05)。结论:MyD88在结直肠癌患者癌组织中高表达,且与患者的临床分期、T分期、M分期和淋巴结转移状态有关联。 展开更多
关键词 结直肠肿瘤 分化因子88 淋巴结转移 预后
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卵巢癌紫杉醇耐药细胞耐药性和髓样分化因子88关系的研究 被引量:1
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作者 袁犁 周琦 +2 位作者 徐发良 李少林 邹冬玲 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期570-574,共5页
目的:研究卵巢癌亲本A2780细胞与卵巢癌紫杉醇耐药细胞A2780/Taxol生物学特性及与髓样分化因子(Myeloid dif-ferentiation factor 88,MyD88)的关系。方法:应用CCK-8法检测A2780细胞和A2780/Taxol细胞的耐药性和耐药指数,采用流式细胞法... 目的:研究卵巢癌亲本A2780细胞与卵巢癌紫杉醇耐药细胞A2780/Taxol生物学特性及与髓样分化因子(Myeloid dif-ferentiation factor 88,MyD88)的关系。方法:应用CCK-8法检测A2780细胞和A2780/Taxol细胞的耐药性和耐药指数,采用流式细胞法检测A2780和A2780/Taxol细胞的细胞周期。应用罗丹明123(Rhodamine 123,Rh123)排出实验测定P-糖蛋白(P-gly-coprotein,P-gp)表达。应用Western blot检测A2780和A2780/Taxol细胞中P-gp的表达情况。应用细胞免疫化学检测A2780和A2780/Taxol细胞中MyD88、P-gp的表达情况。结果:A2780与A2780/Taxol相比,A2780/Taxol生长缓慢,呈G1期阻滞;CCK-8结果显示A2780/Taxol细胞对紫杉醇的IC50为(36.81±2.05)μg/ml,A2780细胞对紫杉醇的IC50为(1.40±0.18)μg/ml;两者的耐药指数(Resistance index,RI)为26.35。Rh123排出实验显示A2780/Taxol平均荧光强度显著降低。Western blot检测发现A2780/Taxol的P-gp表达比A2780明显升高(P<0.05)。细胞免疫化学检测发现A2780/Taxol中的P-gp和MyD88表达明显高于A2780细胞。结论:A2780/Taxol细胞株具有明确的耐药性,紫杉醇耐药与MyD88的表达密切相关,该细胞株可用于卵巢癌紫杉醇耐药的基础研究。 展开更多
关键词 紫杉醇耐药 卵巢癌 P-糖蛋白 分化因子88
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水牛髓样分化因子88融合蛋白真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达 被引量:1
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作者 匡文华 张晓茹 +7 位作者 成鹰 杜丽 雷明 焦寒伟 张冬琳 郝永昌 祁超 王凤阳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第4期50-54,共5页
将水牛髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)cDNA全长定向克隆至pEGFP-C1真核表达载体,通过酶切和测序鉴定正确后,经脂质体介导将重组质粒转染至HEK293细胞,应用荧光显微镜、流氏细胞术和Westernblotting检测MyD88... 将水牛髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)cDNA全长定向克隆至pEGFP-C1真核表达载体,通过酶切和测序鉴定正确后,经脂质体介导将重组质粒转染至HEK293细胞,应用荧光显微镜、流氏细胞术和Westernblotting检测MyD88蛋白的表达。结果表明,酶切及测序结果证实重组质粒含有MyD88全长CDS序列,融合蛋白读码正确;荧光显微镜、流式细胞术和Western blotting检测证实,水牛EGFP-MyD88融合蛋白真核表达载体能够在HEK293细胞表达。本研究成功构建了pEGFP-C1-MyD88真核表达载体,并使其在HEK293细胞中获得表达,为进一步研究该基因的生物学功能奠定基础。 展开更多
关键词 水牛 分化因子88 EGFP 融合蛋白 真核表达
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髓样分化因子88抑制肽对小鼠脑缺血损伤的保护作用及机制研究 被引量:1
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作者 杨吉平 王亚周 +2 位作者 武胜昔 费琳 苟兴春 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期493-500,共8页
目的:研究髓样分化因子88抑制肽(MIP)对小鼠脑缺血损伤的保护作用及其机制。方法:将45只C57BL/6小鼠随机分为假手术组(sham)、局灶性脑缺血组(FCI)和给药组(MIP)。用光化学法诱导小鼠脑缺血损伤,给药组在缺血后第2 d开始给予MIP腹腔注射... 目的:研究髓样分化因子88抑制肽(MIP)对小鼠脑缺血损伤的保护作用及其机制。方法:将45只C57BL/6小鼠随机分为假手术组(sham)、局灶性脑缺血组(FCI)和给药组(MIP)。用光化学法诱导小鼠脑缺血损伤,给药组在缺血后第2 d开始给予MIP腹腔注射,10 mg/kg·d,连续3 d。分别于缺血后1、3、7和14 d观察前肢运动功能的变化,用HE染色观察梗死体积的变化,TUNEL染色检测缺血损伤区神经元凋亡,免疫荧光染色和Western Blot检测损伤区BDNF的表达。结果:与sham组相比,FCI组小鼠前肢运动能力明显下降(P <0.01),损伤区可见大量TUNEL阳性细胞;与FCI组相比,MIP组小鼠在脑缺血后第7 d,前肢运动功能显著改善(P <0.01);梗死体积明显减小(P <0.05),损伤区TUNEL阳性细胞的数量明显减少(P <0.01),而BDNF的表达显著上调(P <0.01)。结论:MIP对小鼠脑缺血损伤具有保护作用,其机制可能与其减少神经元凋亡,增加局部BDNF的表达有关。 展开更多
关键词 脑缺血 分化因子88抑制肽 凋亡 脑源性神经营养因子 小鼠
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下调丝氨酸/精氨酸富集剪接因子6通过调控髓系分化因子88选择性剪接抑制巨噬细胞炎症反应
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作者 付育 张璐瑶 +3 位作者 程博 石炜业 李霓 王英泽 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期1563-1573,共11页
丝氨酸/精氨酸富集剪接因子6(serine/arginine-rich splicing factor 6,SRSF6)属于SR蛋白家族,主要在RNA剪接中发挥调控作用。SRSF6表达或功能失调能够导致部分基因选择性剪接异常,进而引发肿瘤、糖尿病和胸膜纤维化等炎症性疾病发生发... 丝氨酸/精氨酸富集剪接因子6(serine/arginine-rich splicing factor 6,SRSF6)属于SR蛋白家族,主要在RNA剪接中发挥调控作用。SRSF6表达或功能失调能够导致部分基因选择性剪接异常,进而引发肿瘤、糖尿病和胸膜纤维化等炎症性疾病发生发展,但是SRSF6在炎症中的作用尚未阐明。本研究采用脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7建立炎症反应体系,探究SRSF6在炎症中的表达及作用,初步分析SRSF6在炎症中的靶点和机制。研究发现,LPS刺激肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)等炎症相关因子表达增加,同时,SRSF6 mRNA和蛋白质表达水平均随LPS刺激时间延长而显著增加(P<0.05)。进一步探究SRSF6表达对炎症因子的影响,上调表达SRSF6促进LPS诱导的炎症因子表达增加(P<0.05),而下调SRSF6则抑制炎症因子表达(P<0.05),并且核因子-κB(nuclear factor,NF-κB)和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的激活受到SRSF6下调的抑制(P<0.05),提示SRSF6在巨噬细胞中参与调控炎症反应。髓系分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)是TLR4信号通路中的关键接头分子,MyD 88 mRNA剪接异构体MyD88-L和MyD88-S在炎症反应中分别发挥促炎和抑炎的相反功能。RNA结合蛋白数据库分析和RNA结合蛋白免疫沉淀实验发现,SRSF6蛋白结合MyD 88 mRNA;剪接分析结果显示,下调SRSF6促进抑炎型剪接异构体MyD88-S mRNA表达增多(P<0.01),并且敲低MyD88-S能够恢复SRSF6下调所抑制的炎症因子表达。以上研究结果发现,SRSF6在巨噬细胞中通过调控MyD 88选择性剪接,从而影响炎症信号通路激活及炎症因子表达,这为深入解析SRSF6在炎症性疾病中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 丝氨酸/精氨酸富集剪接因子6 巨噬细胞 炎症反应 分化因子88 选择性剪接
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髓样分化因子88在妊娠期糖尿病发病机制中的作用研究 被引量:1
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作者 任敏 丛林 +4 位作者 袁静 李松 周培 杨琴 高传龙 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期854-858,共5页
目的:通过调控孕妇单核细胞中髓样分化因子88(My D88)的表达水平,研究My D88在妊娠期糖尿病(GDM)发病机制中的作用。方法:30例正常妊娠孕妇为正常组,30例GDM患者为GDM组,两组每个样本处理均相同,每个样本各分为4个组,分别为未处理组、LP... 目的:通过调控孕妇单核细胞中髓样分化因子88(My D88)的表达水平,研究My D88在妊娠期糖尿病(GDM)发病机制中的作用。方法:30例正常妊娠孕妇为正常组,30例GDM患者为GDM组,两组每个样本处理均相同,每个样本各分为4个组,分别为未处理组、LPS组、ST2825组、LPS+ST2825组。采用Western blot法检测并比较各组单核细胞中My D88及核转录因子-κB(NF-κB)/p65的表达量,分析各组中My D88与NF-κB/p65的相关性;采用ELISA法检测并比较各组培养液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)、白介素-10(IL-10)水平。结果:①正常组和GDM组组内的比较:LPS组、ST2825组的My D88及NF-κB/p65的表达水平与同组未处理组相比,差异有统计学意义(P<0.05);LPS+ST2825组的My D88及NF-κB/p65的表达水平明显低于同组的LPS组(P<0.05)。正常组与GDM组组间比较:GDM组各处理组My D88及NF-κB/p65的表达水平均较正常组相同处理组明显升高(P<0.05)。②两组中除未处理组外,其他处理组的My D88与NF-κB/p65的表达水平均呈正相关关系(P<0.05)。③GDM组中未处理组和LPS组中的细胞因子(TNF-α、IL-1、IL-10)的表达水平均高于正常组中未处理组及LPS组(P<0.05);GDM组中LPS组3个细胞因子的表达水平高于其未处理组(P<0.05),ST2825组3个细胞因子的表达水平低于其未处理组(P<0.05)。GDM组中LPS+ST2825组3个细胞因子的表达水平低于其LPS组(P<0.05)。结论:调控GDM孕妇单核细胞中上游My D88的表达水平,下游NF-κB/p65及细胞因子(TNF-α、IL-1、IL-10)水平发生相应变化,提示My D88可能参与了GDM的发生并在其发病机制中起着重要作用。 展开更多
关键词 妊娠期糖尿病 分化因子88 细胞因子 脂多糖刺激 ST2825抑制
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二甲双胍对2型糖尿病大鼠骨骼肌Toll样受体/髓样分化因子88信号通路的影响及机制 被引量:5
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作者 马芳菲 李婷 +3 位作者 单梦婷 田晨光 吕晨燕 高迎 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2018年第8期813-817,共5页
目的 2型糖尿病的发病机制复杂,分子水平发病机制仍不明确。文章从免疫炎症的角度探究二甲双胍对2型糖尿病大鼠骨骼肌Toll样受体(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)信号通路的影响及作用机制,阐述二甲双胍的抗炎机制。方法 SD雄性大鼠按随机... 目的 2型糖尿病的发病机制复杂,分子水平发病机制仍不明确。文章从免疫炎症的角度探究二甲双胍对2型糖尿病大鼠骨骼肌Toll样受体(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)信号通路的影响及作用机制,阐述二甲双胍的抗炎机制。方法 SD雄性大鼠按随机数字表法分为4组,每组10只:正常饮食组、模型组、胰岛素组、二甲双胍组,正常饮食组给予饲喂普通饲料,后3组给予高脂高糖饮食并于第8周末联合腹腔注射STZ(30 mg/kg)构建2型糖尿病大鼠模型。造模成功后给予胰岛素组胰岛素(1 IU/d)皮下注射4周,二甲双胍组给予二甲双胍灌胃[200 mg/(d·kg)]4周。计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。ELISA法检测血清中IL-23含量;Western blot法测骨骼肌AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)、TLR4、MyD88、NFκB;RT-PCR法测骨骼肌组织MyD88mRNA、TLR4 mRNA。结果与正常饮食组HOMA-IR(1.56±0.04)相比,模型组、胰岛素组、二甲双胍组(4.55±0.22、4.32±0.32、1.79±0.15)升高(P<0.05);与模型组相比,二甲双胍组HOMA-IR显著降低(P<0.05);与胰岛素组相比,二甲双胍组HOMA-IR下降(P<0.05)。与正常饮食组IL-23[(0.788±0.193)μg/L]相比,模型组、胰岛素组、二甲双胍组[(2.279±0.472、1.886±0.233、1.205±0.398)μg/L]升高(P<0.05);与模型组相比,二甲双胍组IL-23表达降低(P<0.05);与胰岛素组相比,二甲双胍组IL-23表达下降(P<0.05)。模型组HOMA-IR与血清IL-23呈正相关(r=0.716,P<0.05);二甲双胍组HOMA-IR与血清IL-23呈正相关(r=0.725,P<0.05)。与正常饮食组TLR4-mRNA、MyD88-mRNA TLR4、MyD88、NFκB比较,模型组、胰岛素组、二甲双胍组的表达增加(P<0.05);与模型组相比,胰岛素组、二甲双胍组表达均降低(P<0.05);与胰岛素组相比,二甲双胍组表达下降(P<0.05)。与正常饮食组、模型组、胰岛素组的AMPK相比,二甲双胍组表达增加(P<0.05)。结论二甲双胍通过激活AMPK抑制骨骼肌TLR4/MyD88/NFκB通路,下调炎症因子IL-23表达水平,起到抗炎及改善骨骼肌胰岛素抵抗的作用。 展开更多
关键词 TOLL受体-4 分化因子88 IL-23 二甲双胍 AMP依赖的蛋白激酶
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枸杞多糖对髓样分化因子88基因敲除小鼠2型糖尿病模型炎症因子的影响 被引量:12
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作者 王凌霄 刘婷婷 +2 位作者 杨晓辉 姚智卿 蔡慧珍 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期136-141,共6页
目的·研究枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide,LBP)对髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88基因敲除(MyD88-/-)小鼠2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)模型炎症因子的影响。方法·采用不同浓... 目的·研究枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide,LBP)对髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88基因敲除(MyD88-/-)小鼠2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)模型炎症因子的影响。方法·采用不同浓度LBP(20、40、80 mg/kg)干预MyD88-/-T2DM小鼠,ELISA法检测小鼠血清中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、IL-8、转化生长因子β1(TGF-β1)及IL-10的水平。采用不同浓度(25、50、100μg/mL)LBP预处理小鼠巨噬细胞系Raw264.7细胞,然后用脂多糖诱导炎症状态,Western blotting检测各组细胞核因子κB(NF-κB)的核转位变化,以及NF-κB抑制蛋白(IκB)和磷酸化IκB的蛋白水平。结果·LBP能够降低MyD88-/-T2DM小鼠血清IL-1β和TGF-β1的水平(均P<0.05)。体外实验表明,LBP可以剂量依赖性地抑制巨噬细胞中由脂多糖诱发的NF-κB核转位,同时高剂量的LBP可以抑制IκB磷酸化。结论·LBP可以抑制MyD88-/-T2DM小鼠部分促炎症因子,这种调节作用可能与其弱化巨噬细胞IκB磷酸化,抑制NF-κB核转位有关。 展开更多
关键词 枸杞多糖 分化因子88 基因敲除 2 型糖尿病 巨噬细胞 炎症因子 因子κ B
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不同动物髓样分化因子88基因的功能研究及应用
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作者 林杉 段纲 +3 位作者 罗倩敏 吴胜 项勋 常华 《动物医学进展》 北大核心 2019年第11期123-126,共4页
髓样分化因子88(myeloid differentiation factor88,MyD88)作为Toll样受体信号通路中的关键转接分子,在多种疾病的发生和免疫调控中发挥重要作用。论文就Toll样受体信号通路中MyD88的结构、表达、免疫调控功能、单核苷酸多态性位点、与... 髓样分化因子88(myeloid differentiation factor88,MyD88)作为Toll样受体信号通路中的关键转接分子,在多种疾病的发生和免疫调控中发挥重要作用。论文就Toll样受体信号通路中MyD88的结构、表达、免疫调控功能、单核苷酸多态性位点、与动物肠道疾病发病机制研究的相关性及其应用进行综述。 展开更多
关键词 分化因子88 信号通路 免疫调控
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髓样分化因子促进卵巢癌细胞耐药性的机制研究 被引量:1
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作者 邹冬玲 王冬 +1 位作者 徐发良 周琦 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第19期2041-2045,共5页
目的探讨髓样分化因子(myeloid differentiation factor88,MyD88)参与调节卵巢癌细胞耐药性的具体机制。方法在卵巢癌耐药细胞株A2780/Taxol中采用特异性小干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)抑制MyD88的表达,通过CCK-8试剂盒检测细... 目的探讨髓样分化因子(myeloid differentiation factor88,MyD88)参与调节卵巢癌细胞耐药性的具体机制。方法在卵巢癌耐药细胞株A2780/Taxol中采用特异性小干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)抑制MyD88的表达,通过CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况以及细胞在紫杉醇处理后的存活情况。Western blot检测磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、X-连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)以及多药耐药蛋白(multidrug resistance 1,MDR1)的表达情况。进一步在A2780/Taxol细胞中通过LY294002抑制PKB/Akt信号通路,通过小干扰RNA抑制MDR1的表达,CCK-8试剂盒检测细胞在紫杉醇处理后的存活情况。结果在A2780/Taxol细胞株中抑制MyD88的表达,细胞的增殖速度明显低于对照组(P<0.05)。A2780/Taxol细胞对紫杉醇的耐药性也明显降低,半数抑制浓度(IC50)降低至对照组的50%(P<0.01),且p-Akt、XIAP和MDR1在药物刺激下的升高也被明显抑制。同时抑制p-Akt通路的活性或抑制MDR1的表达后A2780/Taxol细胞的耐药性也出现明显下降,IC50分别降低至对照组的80%和50%,且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 MyD88蛋白通过调节PKB/Akt信号通路、XIAP抗凋亡蛋白以及MDR1的表达参与卵巢癌细胞对紫杉醇的耐药性。通过抑制MyD88可望改善卵巢癌治疗中的耐药现状。 展开更多
关键词 卵巢癌 分化因子 蛋白激酶B 多药耐药蛋白
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模式识别受体NOD2在髓样分化蛋白88缺陷小鼠抗分枝杆菌感染中的作用机制 被引量:1
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作者 梁锦屏 陈少红 +3 位作者 张倩 汤业珍 韩怀钦 魏军 《中国感染与化疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期38-41,共4页
目的探讨模式识别受体NOD2信号在髓样分化蛋白88缺陷(MyD88-/-)小鼠中的表达与免疫功能。方法通过PCR技术鉴定MyD88^(-/-)小鼠、野生型C57BL/6小鼠,分别用分枝杆菌减毒株(卡介苗,BCG)经气管滴入建立肺部感染模型,以磷酸缓冲盐溶液(PBS)... 目的探讨模式识别受体NOD2信号在髓样分化蛋白88缺陷(MyD88-/-)小鼠中的表达与免疫功能。方法通过PCR技术鉴定MyD88^(-/-)小鼠、野生型C57BL/6小鼠,分别用分枝杆菌减毒株(卡介苗,BCG)经气管滴入建立肺部感染模型,以磷酸缓冲盐溶液(PBS)气管滴入为阴性对照,感染24h后,收集外周血,无菌取肺脏。利用荧光定量PCR技术、Western Blot技术检测小鼠中NOD2基因与蛋白的表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测小鼠外周血中白介素6(IL-6)含量。结果与PBS对照组相比,BCG感染组NOD2蛋白表达量显著升高;而MyD88^(-/-)小鼠相比野生型小鼠NOD2蛋白表达量更高;两种小鼠中BCG感染组均比PBS对照组NOD2蛋白表达量更高;两种小鼠中BCG感染后外周血IL-6的含量比PBS对照组高,差异有统计学意义。结论 MyD88依赖途径功能缺失时,BCG可激活NOD2信号通路。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 卡介苗 模式识别受体NOD2 分化蛋白88 白介素6
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