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骨髓间质干细胞移植对梗死心肌的影响
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作者 连锋 朱洪生 +3 位作者 薛松 吴学军 张谷兰 王小妹 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期138-141,共4页
目的探讨自体骨髓间质干细胞移植对梗死心肌基本结构及心肌收缩力的影响。方法贵州香猪24只,随机分为对照组和实验组,每组12只。抽取骨髓3 mL,按照W ak itan i方法培养出骨髓间质干细胞,经5-氮胞苷诱导后,5-溴脱氧尿苷标记备用。开胸结... 目的探讨自体骨髓间质干细胞移植对梗死心肌基本结构及心肌收缩力的影响。方法贵州香猪24只,随机分为对照组和实验组,每组12只。抽取骨髓3 mL,按照W ak itan i方法培养出骨髓间质干细胞,经5-氮胞苷诱导后,5-溴脱氧尿苷标记备用。开胸结扎左冠状动脉前降支后,实验组第三代自体骨髓间质干细胞分别注射至结扎的左冠状动脉前降支和远端多点注入急性心肌梗死区域;对照组以同样方法注射DMEM。术后3、6周取标本,组织切片染色,观察组织基本结构;体外药物刺激离体肌条,检测心肌收缩情况。结果VG染色显示实验组胶原纤维融合较少,组织结构排列基本处于有序状态。实验组心肌收缩力明显高于对照组(P<0.001),且随时间推移恢复程度增加(P<0.05)。结论自体骨髓间质干细胞梗死心肌移植可以增加心肌细胞的收缩力,调节组织内胶原纤维的含量和组成,防止心室重构,从而起到对心肌基本结构的保护作用。 展开更多
关键词 骨髓间质干细胞 心肌梗死 胶原纤维 心肌收缩力 骨髓间质干细胞移植
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成人骨髓间质干细胞定向诱导为神经元样细胞的研究 被引量:56
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作者 项鹏 夏文杰 +4 位作者 张丽蓉 陈振光 张秀明 李艳 李树浓 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期385-387,I001,共4页
目的 :体外定向诱导成人骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经元样细胞。方法 :采用Ficoll -Paque液 (1 0 77× 10 3 g/L)离心分离成人MSC ,体外扩增 ,分别采用含巯基乙醇和硫代甘油等试剂的无血清DMEM诱导MSC分化为神经元。免疫组化鉴... 目的 :体外定向诱导成人骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经元样细胞。方法 :采用Ficoll -Paque液 (1 0 77× 10 3 g/L)离心分离成人MSC ,体外扩增 ,分别采用含巯基乙醇和硫代甘油等试剂的无血清DMEM诱导MSC分化为神经元。免疫组化鉴定神经元烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。结果 :成人骨髓间质干细胞在体外扩增 5代可获 5× 10 7个细胞。加入巯基乙醇等或硫代甘油等诱导剂诱导后 ,MSC胞体收缩 ,突起伸出 ;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF表达阳性 ,GFAP阴性。结论 :成人骨髓间质干细胞在体外可以分化为神经元样细胞。 展开更多
关键词 骨髓间质干细胞 神经元 神经系统疾病 MSC
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小鼠骨髓间质干细胞的生物学特点及分化潜能鉴定 被引量:19
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作者 周进明 邹仲敏 +6 位作者 郭朝华 何颖 张勇 王劲 王蒙 罗成基 程天民 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期58-61,共4页
目的 建立一种体外分离、培养和鉴定小鼠骨髓间质干细胞的方法 ,探讨体外培养中间质干细胞的一些生物学特点 ,为利用MSCs促进创伤修复提供实验基础。方法 分离 5~ 6周龄的小鼠胫骨、股骨 ,用预冷的IMDM培养基冲洗出骨髓 ,经密度梯度... 目的 建立一种体外分离、培养和鉴定小鼠骨髓间质干细胞的方法 ,探讨体外培养中间质干细胞的一些生物学特点 ,为利用MSCs促进创伤修复提供实验基础。方法 分离 5~ 6周龄的小鼠胫骨、股骨 ,用预冷的IMDM培养基冲洗出骨髓 ,经密度梯度离心得到骨髓单个核细胞 ,接种后 1 2~ 1 6d形成单层贴壁的成纤维状细胞。体外多向诱导分化鉴定分离的细胞 ,用传代的细胞进行生长曲线的测定、观察其接种贴壁率、检测细胞周期和超微结构。结果 体外传代培养的MSCs具有分化形成成骨和成脂细胞的能力 ;MSCs倍增时间约为 3 8h ,传代后 1 2h贴壁达 90 %以上 ,细胞周期显示有 80 %细胞处于G0 G1 期 ,并用电镜照片显示其超微结构。结论 在本实验条件下 ,体外培养的MSCs具有多向分化潜能 ,体外生长稳定 ,传代后的细胞适应性强 ,增殖较快 ,超微结构和细胞周期表现出较早期细胞特点。 展开更多
关键词 骨髓间质干细胞 细胞培养 骨髓分化潜能 小鼠 造血干细胞
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成人骨髓间质干细胞定向诱导为脂肪细胞的研究 被引量:29
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作者 项鹏 张丽蓉 +4 位作者 陈振光 夏文杰 张秀明 李艳 李树浓 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第7期598-601,T001,共5页
目的 :体外定向诱导成人骨髓间质干细胞 (MSC)分化为脂肪细胞。方法 :采用Ficoll-Paque淋巴细胞分离液 (1 0 77× 10 3 g/L)离心分离成人MSC ,体外扩增 ,流式细胞仪检测MSC表面抗原表达 ,地塞米松、IBMX、胰岛素、indomethacin定向... 目的 :体外定向诱导成人骨髓间质干细胞 (MSC)分化为脂肪细胞。方法 :采用Ficoll-Paque淋巴细胞分离液 (1 0 77× 10 3 g/L)离心分离成人MSC ,体外扩增 ,流式细胞仪检测MSC表面抗原表达 ,地塞米松、IBMX、胰岛素、indomethacin定向诱导MSC分化为脂肪细胞。油红O检测中性脂肪 ,光镜下细胞计数。结果 :成人骨髓间质干细胞在体外扩增 5代可获得 1× 10 8个细胞。流式细胞仪检测结果显示CD2 9、CD44、CD90、CD10 5、CD16 6表达阳性 ,CD14、CD34、CD45、CD11a为阴性。诱导 48h后 ,细胞内有脂滴出现 ,随着时间延长 ,脂滴逐渐增加并融合为脂泡。细胞由梭形转变为圆形或多角性。细胞计数结果显示 85 %以上细胞转变为脂肪细胞。结论 :成人骨髓间质干细胞在体外可以分化为脂肪细胞。 展开更多
关键词 成人骨髓间质干细胞 脂肪细胞 肥胖症 造血干细胞
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体外定向诱导人骨髓间质干细胞分化为成骨细胞的研究 被引量:23
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作者 张丽蓉 夏文杰 +4 位作者 项鹏 陈振光 张秀明 李艳 李树浓 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第7期745-748,I001,共5页
目的 :建立体外定向诱导成人骨髓间质干细胞 (MSC)分化为成骨细胞的模型。方法 :采用Ficoll-Paque淋巴细胞分离液分离成人MSC ,体外扩增 ,流式细胞仪检测细胞表面抗原的表达 ,应用地塞米松、β -甘油磷酸钠、vitaminC定向诱导MSC分化为... 目的 :建立体外定向诱导成人骨髓间质干细胞 (MSC)分化为成骨细胞的模型。方法 :采用Ficoll-Paque淋巴细胞分离液分离成人MSC ,体外扩增 ,流式细胞仪检测细胞表面抗原的表达 ,应用地塞米松、β -甘油磷酸钠、vitaminC定向诱导MSC分化为成骨细胞 ,检测碱性磷酸酶 (AP)活性、钙沉积、骨桥蛋白的表达鉴定成骨细胞 ,比较P3和P10代MSC成骨分化的能力。结果 :MSC在体外扩增原代可获得 (5 - 6 )× 10 5个细胞 ,10代可获得 2× 10 10个细胞。流式细胞仪检测结果显示CD2 9、CD4 4、CD5 9、CD10 5、CD16 6表达阳性 ,CD11a、CD14、CD33、CD34、CD4 5、CD38、CD80、CD86、CD117表达为阴性。加入成骨诱导剂 ,细胞形态发生变化 ,AP活性增强 ,骨桥蛋白表达阳性 ,钙沉积逐渐出现。P3和P10代的MSC均有良好的分化为成骨细胞的能力。结论 :成人骨髓间质干细胞在体外可分化为成骨细胞。 展开更多
关键词 体外定向诱导 骨髓间质干细胞 成骨细胞 骨组织工程
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诱导骨髓间质干细胞分化为角膜上皮样细胞的初步研究 被引量:13
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作者 黄丹平 葛坚 +2 位作者 高楠 卢蓉 高前应 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期999-1003,共5页
目的:观察人骨髓间质干细胞(MSCs)移植到兔角膜基质后的分化发育情况,探讨MSCs分化为角膜上皮细胞的可行性。方法:24只新西兰兔随机分为2组。实验组:将人MSCs接种在保存人羊膜上培养4d,用5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记后移植到兔角膜基质;... 目的:观察人骨髓间质干细胞(MSCs)移植到兔角膜基质后的分化发育情况,探讨MSCs分化为角膜上皮细胞的可行性。方法:24只新西兰兔随机分为2组。实验组:将人MSCs接种在保存人羊膜上培养4d,用5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记后移植到兔角膜基质;对照组:采用保存羊膜移植到兔角膜基质。分别于移植后1、2、3、4、6和8周,摘取各组实验眼行组织学和免疫组织化学检查,检查移植到兔角膜基质的MSCs的存活、形态变化以及移植局部的反应等情况;免疫组织化学检测移植到角膜基质的带有BrdU标记的细胞角蛋白K3/12(CK3/CK12)和角蛋白K13(CK13)的表达。结果:MSCs接种到羊膜后能在羊膜上生长,与羊膜共培养4d后,MSCs贴附羊膜生长迅速,组织学特征无明显改变。羊膜负载MSCs移植到兔角膜基质表面,术后免疫组织化学检测角膜上皮层CK3/CK12表达阳性,CK13表达阴性,在重建的角膜上皮层可检测到BrdU核阳性细胞并同时表达角膜上皮细胞特异性表面标志蛋白K3/K12,未发生免疫排斥反应,未见异常增殖细胞。结论:羊膜负载MSCs移植到兔眼表角膜基质后,MSCs能存活、增殖并向角膜上皮样细胞分化。 展开更多
关键词 骨髓间质干细胞 羊膜 上皮 角膜 细胞分化
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胎儿骨髓间质干细胞体外诱导为神经细胞的初步实验研究 被引量:11
7
作者 孙晓春 许文荣 +3 位作者 姚堃 胡嘉波 钱晖 张锡然 《中国生物医学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第1期40-43,36,共5页
目的 :体外定向诱导胎儿骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经细胞。方法 :采用Ficoll淋巴细胞分离液分离MSC ,体外扩增、传代 ,采用 β 巯基乙醇等诱导剂诱导MSC分化为神经细胞 ,免疫组化鉴定神经丝蛋白(NF2 0 0 )、神经元烯醇化酶 (NSE)、... 目的 :体外定向诱导胎儿骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经细胞。方法 :采用Ficoll淋巴细胞分离液分离MSC ,体外扩增、传代 ,采用 β 巯基乙醇等诱导剂诱导MSC分化为神经细胞 ,免疫组化鉴定神经丝蛋白(NF2 0 0 )、神经元烯醇化酶 (NSE)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP) ,并且用RT PCR鉴定NF2 0 0、NSE和GFAP的mR NA表达情况。结果 :胎儿骨髓MSC在体外扩增第 5代以后 ,经诱导后 ,形态学上可呈现神经细胞形态特征 ;免疫组化显示诱导出的神经细胞NF2 0 0、NSE和GFAP均有阳性表达 ;RT PCR也显示诱导后表达量明显增加。结论 :胎儿骨髓MSC在体外可以分化为神经细胞。 展开更多
关键词 骨髓间质干细胞 神经细胞 RT-PCR 免疫组化
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PD98059对人骨髓间质干细胞分化为成骨细胞的影响 被引量:10
8
作者 张丽蓉 项鹏 +4 位作者 夏文杰 陈振光 张秀明 李艳 李树浓 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第8期896-899,I003,共5页
目的 :探讨胞外信号调节激酶 (ERK)信号传导途径对骨髓间质干细胞 (MSC)分化为成骨细胞的影响。方法 :采用Ficoll-Paque淋巴细胞分离液分离成人MSC ,体外扩增 ,应用地塞米松、β -甘油磷酸钠、vitaminC定向诱导MSC分化为成骨细胞。在成... 目的 :探讨胞外信号调节激酶 (ERK)信号传导途径对骨髓间质干细胞 (MSC)分化为成骨细胞的影响。方法 :采用Ficoll-Paque淋巴细胞分离液分离成人MSC ,体外扩增 ,应用地塞米松、β -甘油磷酸钠、vitaminC定向诱导MSC分化为成骨细胞。在成骨诱导液中加入不同剂量的PD980 59,观察其对成骨细胞形成的影响。结果 :MSC体外扩增 1 5代可获得 (3 - 4 )× 1 0 1 2 个细胞。在成骨诱导液作用下 ,MSC可在体外定向分化为成骨细胞。不同剂量的PD980 59均可抑制MSC分化为成骨细胞 ,并有剂量依赖关系 ;同时促使部分细胞转化为脂肪细胞。结论 展开更多
关键词 PD98059 骨髓间质干细胞 成骨细胞 蛋白激酶类 细胞分化 疏松 难治性骨损伤
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心肌梗死大鼠血清促进大鼠骨髓间质干细胞分化为心肌细胞的作用 被引量:11
9
作者 陈运贤 何敏 +7 位作者 刘建华 陈嘉榆 陈惠珍 张祥忠 朱小玉 陈求刚 项鹏 钟雪云 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期853-857,共5页
目的:探讨急性心肌梗死(AMI)大鼠血清在体外对大鼠骨髓间质干细胞(BMSC)分化为心肌细胞的作用。方法:将大鼠BMSC分为6组进行细胞培养:Ⅰ组为未诱导组(对照组),Ⅱ组为5-aza诱导组,Ⅲ组为5-aza+AMI血清诱导组,Ⅳ组为5-aza+正常大鼠血清诱... 目的:探讨急性心肌梗死(AMI)大鼠血清在体外对大鼠骨髓间质干细胞(BMSC)分化为心肌细胞的作用。方法:将大鼠BMSC分为6组进行细胞培养:Ⅰ组为未诱导组(对照组),Ⅱ组为5-aza诱导组,Ⅲ组为5-aza+AMI血清诱导组,Ⅳ组为5-aza+正常大鼠血清诱导组,Ⅴ组为AMI血清诱导组,Ⅵ组为正常大鼠血清诱导组。培养30d后进行分化细胞鉴定,检测细胞的形态变化和心肌肌钙蛋白(cTnT)、心肌细胞转录因子GATA-4和结蛋白(desmin)的表达。结果:大鼠BMSC经5-aza或5-aza联合血清诱导后,向心肌样细胞分化,其cTnT、GATA-4、desmin表达阳性。对照组和单纯血清诱导组的BMSC未见形态改变,其cTnT亦为阴性,但GATA-4、desmin却呈弱阳性。另外,5-aza联合血清诱导组在诱导2周后可观察到部分细胞呈缓慢而有节律的跳动,而单纯5-aza诱导组未见细胞跳动。结论:单纯用AMI大鼠血清不能诱导BMSC向心肌细胞分化,但AMI血清能促进5-aza诱导的BMSC向心肌细胞分化,并促进分化的心肌细胞成熟。 展开更多
关键词 骨髓间质干细胞 阿扎胞苷 心肌梗死 心肌细胞 大鼠
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腺病毒介导的EGFP基因在大鼠骨髓间质干细胞中的高效表达 被引量:11
10
作者 李红乐 邢飞跃 +5 位作者 孙学刚 曹永宽 宋革 张秀明 姜勇 李树浓 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期293-296,T002,共5页
目的 :研究复制缺陷型腺病毒感染骨髓间质干细胞介导外源基因表达的可行性及感染效率。方法 :在体外低密度扩增大鼠骨髓间质干细胞 (rMSC) ,用细菌同源重组法构建巨细胞病毒 (CMV)驱动的增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因腺病毒载体 (p... 目的 :研究复制缺陷型腺病毒感染骨髓间质干细胞介导外源基因表达的可行性及感染效率。方法 :在体外低密度扩增大鼠骨髓间质干细胞 (rMSC) ,用细菌同源重组法构建巨细胞病毒 (CMV)驱动的增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因腺病毒载体 (pAd -EGFP) ,用 2 93包装细胞制备腺病毒 ,用EGFP重组腺病毒感染rMSC ,观察重组腺病毒携带基因在MSC中的感染和表达情况 ,用细胞计数法和流式细胞仪分析感染效率。用血清撤离加入 β -巯基乙醇诱导Ad -EGFP感染的rMSC向神经样细胞定向分化。结果 :Ad -EGFP可高效感染rMSC ,感染率为 (3 6±2 ) % ,而脂质体法转染质粒pTrack -GFP在rMSC转染效率非常低且不易成功 ;Ad -EGFP感染后的不同扩增代数的rMSC在受到 β -巯基乙醇的诱导分化后在荧光显微镜下呈典型的突触形式。免疫组化鉴定发现这些诱导细胞表达神经元特异烯醇化酶 (NSE) ,表明腺病毒介导外源基因转染后rMSC仍具有分化为神经样细胞的潜能。结论 :腺病毒载体具有较高的介导外源基因表达于rMSC的效率 。 展开更多
关键词 EGFP基因 大鼠 骨髓间质干细胞 腺病毒感染
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供者源性的骨髓间质干细胞对急性移植物抗宿主病的影响 被引量:10
11
作者 李浩威 温冠媚 +5 位作者 肖庆忠 李红乐 段连宁 项鹏 张秀明 李树浓 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期577-580,T001,共5页
目的 :采用大鼠骨髓移植模型探讨共移植供者源性的骨髓间质干细胞 (MSCs)对骨髓移植后急性移植物抗宿主病 (GVHD)的影响。方法 :体外培养Fisher344大鼠骨髓间质干细胞 ,扩增至第 5代用于移植。建立大鼠异基因急性GVHD模型 (F344→Wistar... 目的 :采用大鼠骨髓移植模型探讨共移植供者源性的骨髓间质干细胞 (MSCs)对骨髓移植后急性移植物抗宿主病 (GVHD)的影响。方法 :体外培养Fisher344大鼠骨髓间质干细胞 ,扩增至第 5代用于移植。建立大鼠异基因急性GVHD模型 (F344→Wistar)。受者Wistar大鼠采用致死性全身照射预处理 ,当天移植F344大鼠骨髓细胞和脾细胞。实验组则移植F344大鼠骨髓细胞、脾细胞和第 5代的MSCs。观察各组移植后急性GVHD的发生时间、发病率和存活时间。结果 :共移植MSCs推迟急性GVHD的发病时间 [( 19 1± 1 7)dvs( 15 6± 1 5 )d ,P <0 0 5 ],延长该组的存活时间 [( 35 6± 7 0 )dvs ( 2 5 4± 6 0 )d ,P <0 0 5 ],但无法完全消除急性GVHD的发生。结论 :MSCs在体内具有免疫抑制功能 ,供者来源的MSCs在不使用免疫抑制剂情况下 。 展开更多
关键词 急性移植物抗宿主病 供者源性 骨髓间质干细胞 骨髓移植 大鼠
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成人骨髓间质干细胞在脑梗塞模型鼠的迁移和分化 被引量:8
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作者 姚晓黎 张成 +3 位作者 卢锡林 冯善伟 邓宇斌 刘祖国 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期1056-1060,共5页
目的:探讨成人骨髓间质干细胞(humanmesenchymalstemcells,hMSC)在脑梗塞模型鼠脑内的迁移和分化,是否影响模型大鼠的运动功能。方法:体外扩增培养hMSC,建立左大脑中动脉梗塞模型(MACO)大鼠,将标记Hoeschst33342的hMSC,经参芪液诱导30mi... 目的:探讨成人骨髓间质干细胞(humanmesenchymalstemcells,hMSC)在脑梗塞模型鼠脑内的迁移和分化,是否影响模型大鼠的运动功能。方法:体外扩增培养hMSC,建立左大脑中动脉梗塞模型(MACO)大鼠,将标记Hoeschst33342的hMSC,经参芪液诱导30min后注入模型鼠脑内,观察hMSC在大鼠脑内的存活、迁移、分化,以及能否改善模型鼠运动功能。结果:第5代呈集落生长的hMSC,均一性好。hMSC可在脑内存活6周以上;随着时间的延长,hMSC在脑内迁移的范围越来越大;间接免疫荧光表明hMSC在大鼠脑内表达人神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP);模型鼠的肢体运动功能有明显改善。结论:hMSC可在大鼠脑内分化为神经细胞,有望成为治疗脑梗塞的理想的种子细胞。 展开更多
关键词 骨髓间质干细胞 脑梗塞 细胞分化 细胞运动 参芪液
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骨髓间质干细胞和脑源性神经营养因子联合应用促进兔脊髓外伤性截瘫的修复 被引量:10
13
作者 康德智 王灯亮 +3 位作者 林建华 余良宏 吴朝阳 雷盛民 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2007年第1期60-63,67,共5页
目的:观察骨髓间质干细胞(bone m arrow strom a cells,BM SCs)和脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BD N F)联合应用对兔脊髓外伤性截瘫结构和功能修复的影响,以寻求建立一种更有效的治疗脊髓外伤性截瘫的疗法。方... 目的:观察骨髓间质干细胞(bone m arrow strom a cells,BM SCs)和脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BD N F)联合应用对兔脊髓外伤性截瘫结构和功能修复的影响,以寻求建立一种更有效的治疗脊髓外伤性截瘫的疗法。方法:采用改良A llen打击法建立兔脊髓外伤性截瘫的模型,模型建立成功后观察3d再分别行注射生理盐水(对照组)、BM SCs、BD N F和BM SCs+BD N F干预。脊髓损伤移植后1、3、5周进行改良Tarlov评分及CSEP评测,5周观察脊髓结构的变化。结果:与BM SCs组、BD N F组相比,移植后第5周,BM SCs+BD N F联合移植组脊髓损伤处结构恢复较好,第3周、5周后,BM SCs+BD N F组的CSEP和改良Tarlov评分亦明显好于BM SCs组和BD N F组(P<0.01)。结论:BM SCs和BD N F联合移植对急性脊髓外伤性截瘫的结构和功能有更好的修复作用。 展开更多
关键词 骨髓间质干细胞 脑源性神经营养因子 外伤性截瘫 修复
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大鼠骨髓间质干细胞定向分化为神经元的实验研究 被引量:9
14
作者 王亚柱 邓宇斌 +3 位作者 甘丹卉 叶伟标 叶美红 陈永乐 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期383-387,392,共6页
【目的】研究体外培养骨髓来源的表达nestin的成年大鼠骨髓间质干细胞(MSC)并诱导分化神经元样细胞的潜能,为中枢神经系统疾病的细胞移植治疗提供理想的供体。【方法】采用全骨髓法分离培养成年SD大鼠MSC,传至第6代的MSC接种在前一天涂... 【目的】研究体外培养骨髓来源的表达nestin的成年大鼠骨髓间质干细胞(MSC)并诱导分化神经元样细胞的潜能,为中枢神经系统疾病的细胞移植治疗提供理想的供体。【方法】采用全骨髓法分离培养成年SD大鼠MSC,传至第6代的MSC接种在前一天涂有100μg/L多聚赖氨酸的塑料培养瓶或培养皿中,用含100mL/LFBS的DMEM/F12培养液添加10ng/mL bFGF的培养液培养并以DMSO、BHA与Forskolin等诱导剂联合诱导MSC分化为神经元。流式细胞仪鉴定诱导前MSC的细胞表面抗原,免疫荧光检测诱导前及诱导后6h、12h、24h神经元特异性抗原nestin、NF-200和GFAP表达率。【结果】流式细胞仪检测传至第6代MSC表面抗原CD29和CD44阳性率分为98.8%,96.6%,CD34和CD45阴性。免疫荧光鉴定传至第6代的MSC表达nestin阳性率为57.1%±6.9%,不表达NF-200和GFAP。诱导后30min可见神经元样细胞出现,诱导后6h、12h、24h经nestin和NF-200免疫荧光鉴定,诱导后6h、12h、24 h nestin阳性率分别为96.5%±1.9%,88.1%±5.4%,33.5%±5.4%,NF-200阳性率分别为90.1%±2.9%,97.5%±1.3%,98.1%±1.6%。【结论】骨髓来源的nestin阳性的MSC具有神经祖细胞特性并且可诱导分化为神经元样细胞,可作为种子细胞用于神经系统疾病的治疗。 展开更多
关键词 骨髓间质干细胞 分化 神经元样细胞 神经祖细胞
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胞内cAMP浓度的增加可诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞 被引量:8
15
作者 项鹏 夏文杰 +4 位作者 张丽蓉 陈振光 张秀明 李艳 李树浓 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期1324-1327,I001,共5页
目的 :探讨胞内cAMP浓度的增加与骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经元样细胞的关系。方法 :采用Ficoll-Paque液 (1 0 77g/L)离心分离成人MSC ,体外扩增 ,采用含腺苷酸环化酶激动剂Forskolin及磷脂酶抑制剂 3-异丁基 - 1 -甲基黄嘌呤 (IBMX... 目的 :探讨胞内cAMP浓度的增加与骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经元样细胞的关系。方法 :采用Ficoll-Paque液 (1 0 77g/L)离心分离成人MSC ,体外扩增 ,采用含腺苷酸环化酶激动剂Forskolin及磷脂酶抑制剂 3-异丁基 - 1 -甲基黄嘌呤 (IBMX)的无血清DMEM诱导MSC分化为神经元。免疫组化鉴定神经元烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。结果 :成人骨髓间质干细胞在体外扩增原代可获得 5× 1 0 5,1 0代可获得 2× 1 0 1 0 个细胞。加入Forskolin、IBMX以及两者联用诱导后 ,MSC胞体收缩 ,突起伸出 ,呈典型神经元样形态 ;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF -M表达阳性 ,GFAP阴性。结论 展开更多
关键词 胞内cAMP浓度 骨髓间质干细胞 神经元样细胞 腺苷环-磷酸 福司柯林 诱导分化
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异体骨结合骨髓间质干细胞移植治疗骨缺损的动物实验 被引量:7
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作者 傅明 梁海翔 +5 位作者 何爱珊 雷磊 林子洪 盛璞义 杨子波 廖威明 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期515-519,572,共6页
【目的】研究使用异体骨混合骨髓间质干细胞移植治疗骨缺损的可行性及动物实验初步结果。【方法】将15只新西兰白兔双侧桡骨造成1 cm骨缺损模型,随机选择同一只动物的一侧为实验侧,自体配对的另一侧为对照侧。将表面脱钙的同种异体骨和... 【目的】研究使用异体骨混合骨髓间质干细胞移植治疗骨缺损的可行性及动物实验初步结果。【方法】将15只新西兰白兔双侧桡骨造成1 cm骨缺损模型,随机选择同一只动物的一侧为实验侧,自体配对的另一侧为对照侧。将表面脱钙的同种异体骨和来源于受体的体外培养增殖的骨髓间质干细胞混合植入实验侧骨缺损,对照侧仅植入同样制作的异体骨。12周后,进行X线检查、生物力学检查和组织学检查,将结果进行对比。【结果】动物在术后12周,实验侧X线片光密度测量结果,破坏载荷时扭矩和扭角测量结果均优于对照侧;组织学评分中,实验侧骨痂量评分优于对照侧,骨连接成熟程度和骨髓发育程度两者没有明显差异。【结论】骨髓间质干细胞可以促进异体骨在移植后的成骨作用,在增多成骨量的同时不影响骨组织发育。 展开更多
关键词 异体骨 骨髓间质干细胞 移植 骨缺损
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小鼠骨髓间质干细胞的体外培养与多向分化潜能的鉴定 被引量:7
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作者 张为西 陈松林 +3 位作者 姚晓黎 周琛 卢锡林 Xingming Shi 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期633-636,共4页
【目的】建立小鼠骨髓间质干细胞(MSC)体外培养、纯化、扩增方法,并进行体外定向诱导条件下的多向分化潜能鉴定。【方法】取3~18月雄性C57BL/6J小鼠(共48只)骨髓细胞,贴壁培养后,用免疫磁珠法纯化,观察纯化后的细胞形态,对3、10、20代... 【目的】建立小鼠骨髓间质干细胞(MSC)体外培养、纯化、扩增方法,并进行体外定向诱导条件下的多向分化潜能鉴定。【方法】取3~18月雄性C57BL/6J小鼠(共48只)骨髓细胞,贴壁培养后,用免疫磁珠法纯化,观察纯化后的细胞形态,对3、10、20代的MSC进行细胞生长曲线绘制;并检测细胞在不同诱导条件下向成骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞的分化能力。【结果】小鼠MSC在体外可以诱导成成骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞。MSC连续传代培养达30代以上,细胞的形态、抗原表达无改变,并保持多向分化潜能。【结论】该方法获得的MSC具有高度增殖、多向分化潜能、生物学特性稳定的特点。 展开更多
关键词 小鼠 骨髓间质干细胞 体外培养 多向分化潜能
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骨髓间质干细胞诱导为神经元样细胞移植治疗脑梗塞模型大鼠后运动功能的改善 被引量:7
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作者 王颖 邓宇斌 +2 位作者 李艳 王晔 那晓东 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期2401-2406,共6页
目的:观察骨髓间质干细胞诱导为神经元样细胞移植对大脑中动脉阻塞模型(MCAO)鼠后运动功能的改善情况。方法:采用分离消化法对F ischer344大鼠的骨髓间质干细胞进行体外培养、纯化鉴定后,进行诱导分化,局部立体定位注射于MCAO大鼠纹状皮... 目的:观察骨髓间质干细胞诱导为神经元样细胞移植对大脑中动脉阻塞模型(MCAO)鼠后运动功能的改善情况。方法:采用分离消化法对F ischer344大鼠的骨髓间质干细胞进行体外培养、纯化鉴定后,进行诱导分化,局部立体定位注射于MCAO大鼠纹状皮质18区,对照组注射无血清L-DMEM基础培养液。分别于诱导细胞移植后第2周及第8周,进行网屏握持试验、抓握牵引试验、平衡木行走试验及Morris水迷宫测试,并取脑组织做2,3,5-三苯四唑化氯(TTC)染色。结果:移植后第2周及第8周对照组、实验组于水迷宫试验中找到目标的时间(s)及路径(cm)均有显著差异(P<0.05);第8周时实验组与对照组相比网屏握持、抓握牵引及平衡木行走等试验的时间(s)亦存在显著差异(P<0.05)。结论:诱导细胞的移植对MCAO模型大鼠的运动功能有明显恢复作用。 展开更多
关键词 骨髓间质干细胞 神经元 脑梗塞 运动活动 移植
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BDNF重组腺病毒的构建及在大鼠骨髓间质干细胞的表达 被引量:7
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作者 李红乐 李浩威 +5 位作者 邢飞跃 孙学刚 邓宇斌 张秀明 姜勇 李树浓 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期438-442,T001,共6页
目的 :利用大肠杆菌细菌内同源重组构建带有增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因的脑源性神经营养因子前体 (proBDNF)和脑源性神经营养因子 (BDNF)重组腺病毒并在大鼠骨髓间质干细胞 (rMSC)高效表达。方法 :采用两步亚克隆的方法将proBDN... 目的 :利用大肠杆菌细菌内同源重组构建带有增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因的脑源性神经营养因子前体 (proBDNF)和脑源性神经营养因子 (BDNF)重组腺病毒并在大鼠骨髓间质干细胞 (rMSC)高效表达。方法 :采用两步亚克隆的方法将proBDNF和BDNF构建入带有EGFP表达盒的腺病毒穿梭质粒pAdTrack -CMV中 ,形成转移载体pAdTrack -proBDNF和pAdTrack -BDNF ,采用化学转化法在大肠杆菌BJ5 183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy- 1同源重组 ,得到重组腺病毒载体pAd -proBDNF和pAd -BDNF ;转染 2 93细胞 ,包装成重组病毒颗粒 ;将重组病毒上清感染rMSC ,用荧光显微镜下观察和Western -blotting鉴定重组病毒在rMSC表达 ;用Ad -proBDNF和Ad -BDNF感染的rMSC在体外诱导向神经样细胞分化 ;用Ad -proBDNF和Ad -BDNF的感染的rMSC接种于裸鼠肌肉内 ,两周后荧光显微镜下直接观察。结果 :成功地构建了proBDNF和BDNF重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒 ,重组病毒能在体外培养的rMSC高效表达并不影响其分化潜能 ,体内移植实验表明Ad -proBDNF和Ad -BDNF感染的rMSC能在体内表达。结论 :重组腺病毒具有较高的介导proBDNF和BDNF基因表达于rMSC的效率 ,带有报告基因EGFP的Ad -proBDNF和Ad -BDNF感染的rMSC可以用于体内移植实验。 展开更多
关键词 BDNF 重组腺病毒 构建 大鼠 骨髓间质干细胞 表达 增强型绿色荧光蛋白 基因融合 脑源性神经营养因子
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人骨髓间质干细胞向造血细胞分化潜能的实验研究 被引量:9
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作者 温冠媚 李浩威 +5 位作者 肖庆忠 陈振光 张秀明 李艳 段连宁 李树浓 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期157-162,共6页
目的 :在体研究人骨髓间质干细胞 (hBMMSCs)向造血细胞分化的潜能。方法 :将hBMMSCs经尾静脉注射给环磷酰胺处理的严重联合免疫缺陷 (SCID)小鼠 ,利用流式激活细胞分析系统 (FACS)检测hBMMSCs输注后存活 35d的SCID小鼠外周血、骨髓和脾... 目的 :在体研究人骨髓间质干细胞 (hBMMSCs)向造血细胞分化的潜能。方法 :将hBMMSCs经尾静脉注射给环磷酰胺处理的严重联合免疫缺陷 (SCID)小鼠 ,利用流式激活细胞分析系统 (FACS)检测hBMMSCs输注后存活 35d的SCID小鼠外周血、骨髓和脾脏中人源性造血细胞的表型和水平。结果 :hBMMSCs输注组外周血 (PB)、骨髓(BM)和脾脏 (spleen)中可检测到人CD45+ /H - 2Dd - 、CD34+ /H - 2Dd - 细胞 ,而对照组PB、BM和脾脏均未检测到上述表型的人造血细胞。结论 展开更多
关键词 骨髓间质干细胞 造血干细胞 分化
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