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Fasudil促进体外培养骨髓源神经干细胞的增殖与存活 被引量:2
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作者 宋国斌 席国萍 +5 位作者 尉杰忠 丰玲 黄建军 肖保国 李艳花 马存根 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1488-1491,1496,共5页
目的探讨法舒地尔(Fasudil)对体外培养骨髓源神经干细胞(BMNSC)增殖和存活的影响。方法取3~4周龄的C57BL/6小鼠,分离骨髓基质细胞并诱导产生细胞球,用免疫荧光染色鉴定细胞类型。羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记细... 目的探讨法舒地尔(Fasudil)对体外培养骨髓源神经干细胞(BMNSC)增殖和存活的影响。方法取3~4周龄的C57BL/6小鼠,分离骨髓基质细胞并诱导产生细胞球,用免疫荧光染色鉴定细胞类型。羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记细胞,检测Fasudil促进BMNSC增殖能力。利用脂多糖(LPS)和γ干扰素(IFN-γ)联合处理BV-2小胶质细胞制备炎性条件培养液处理BMNSC,Fasudil干预,通过流式细胞术检测线粒体膜电位、碘化丙啶(PI)荧光值,探讨Fasudil对BMNSC的保护效果。结果免疫荧光染色证明骨髓源细胞球为神经上皮干细胞蛋白(nestin)阳性的神经干细胞。Fasudil处理明显降低CFSE平均荧光值。在LPS和IFN-γ联合作用下,BV-2小胶质细胞释放更多的白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)等炎性细胞因子,显著高于PBS处理组。该炎性条件培养液导致BMNSC线粒体膜电位明显降低并诱导更多的细胞死亡,而Fasudil处理则显著恢复线粒体膜电位接近正常值,减少细胞死亡,并且具有明显的剂量依赖性。结论Fasudil对体外培养BMNSC的增殖和存活具有显著的促进作用。 展开更多
关键词 法舒地尔(Fasudil) 骨髓源神经干细胞 线粒体膜电位
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Fasudil联合骨髓源神经干细胞对EAE小鼠的神经保护作用 被引量:4
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作者 宋国娬 席国萍 +6 位作者 李艳花 李加善 刘建春 柴智 肖保国 张光先 马存根 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2113-2120,共8页
目的:探讨Rho激酶抑制剂法舒地尔(fasudil)联合骨髓源神经干细胞(bone marrow-derived neural stem cells,BM-NSCs)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠的神经保护作用。方法:32只雌性C57B... 目的:探讨Rho激酶抑制剂法舒地尔(fasudil)联合骨髓源神经干细胞(bone marrow-derived neural stem cells,BM-NSCs)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠的神经保护作用。方法:32只雌性C57BL/6小鼠(8~10周龄),用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)免疫,制备EAE,随机分为对照(dd H_2O)组、fasudil组、BM-NSCs组和fasudil+BM-NSCs组,并分别给予相应处理。免疫后检测小鼠临床症状和相关神经营养因子的表达,Image-Pro Plus 6.0软件进行阳性细胞计数,Graph Pad Prism 5软件统计分析。结果:与dd H_2O组比较,fasudil+BM-NSCs处理组明显延迟小鼠的平均起病时间,降低最高临床评分,并缓解EAE小鼠的临床症状;fasudil组、BM-NSCs组和fasudil+BM-NSCs组中脑源性神经营养因子、胶质细胞源性神经营养因子、神经生长因子、神经营养因子3和睫状神经营养因子阳性细胞数均有不同程度的增加,其中,fasudil+BM-NSCs组上述神经营养因子的表达明显多于dd H_2O组、fasudil组和BM-NSCs组(P<0.01)。结论:Fasudil联合BM-NSCs通过协同和叠加效应促进神经营养因子表达,改善中枢神经系统微环境,发挥神经保护作用,从而缓解EAE的临床症状。 展开更多
关键词 法舒地尔 骨髓源神经干细胞 实验性自身免疫性脑脊髓炎 神经营养因子
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缺氧预处理后骨髓源神经干细胞联合脑源性神经生长因子移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的研究 被引量:4
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作者 雷延成 吴世政 +4 位作者 张淑坤 侯倩 才鼎 肖宗宇 陈晓娟 《中国卒中杂志》 2016年第5期360-367,共8页
目的研究缺氧预处理后骨髓源性神经干细胞(source neural stem cells of bone marrow,BMSCsNSCs)联合脑源性神经生长因子(brainderived neurotrophic factor,BDNF)立体定向移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的疗效,为高原地区脑梗死的细胞... 目的研究缺氧预处理后骨髓源性神经干细胞(source neural stem cells of bone marrow,BMSCsNSCs)联合脑源性神经生长因子(brainderived neurotrophic factor,BDNF)立体定向移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的疗效,为高原地区脑梗死的细胞移植治疗提供动物实验基础。方法 72只SD大鼠随机分为缺氧预处理组和常氧组,每组各36只,缺氧预处理组造模前3 d进行低氧预处理(hypoxic preconditioning,HPC)。两组均制作大脑中动脉阻塞再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)模型。每组分为3个亚组(BMSCsNSCs+BDNF组、BMSCsNSCs组和对照组,每组各12只),分别梗死灶同侧尾状核内立体定向移植BMSCsNSCs+BDNF、BMSCsNSCs和DMEM/F12培养基。移植后3 d、7 d、14 d、21 d、28 d、35 d进行神经功能缺损评分,每个时间点每组取2只大鼠,断头取脑后行免疫组织化学染色,观察5-溴脱氧尿嘧啶(5-Bromodeoxyuridine,Brdu)阳性细胞的迁移路径,行CD133、Nestin、微管相关蛋白2(microtubuleassociated protein 2,MAP-2)、兔抗微管蛋白(β-tubulin)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、半乳糖神经酰胺(Galactosylceramidase,Galc)免疫荧光染色,了解骨髓源性神经球分化情况。结果常氧BMSCsNSCs+BDNF组、常氧BMSCsNSCs组、缺氧预处理BMSCsNSCs+BDNF组、缺氧预处理BMSCsNSCs组7 d、14 d、21 d、28 d和35 d的神经功能评分均显著低于同组3 d时的神经功能评分。移植3 d时缺氧预处理对照组神经功能学评分显著低于常氧对照组(P=0.040);移植7 d时缺氧预处理BMSCsNSCs+BDNF组神经功能评分显著低于常氧BMSCsNSCs+BDNF组(P=0.031)。无论缺氧预处理组还是常氧组,BMSCsNSCs+BDNF组CD133、Nestin、MAP-2、β-tubullin、GFAP、Galc免疫荧光染色光密度值(integral optical density,IOD)均显著高于BMSCsNSCs组(均P<0.001);BMSCsNSCs+BDNF组、BMSCsNSCs移植组各检测指标IOD均高于对照组(均P<0.001)。结论大鼠缺氧预处理后BMSCsNSCs联合BDNF立体定向移植可显著提高BMSCsNSCs的效果。缺氧预处理并不能促进外源性BMSCsNSCs分化,但却能明显改善大鼠神经功能。 展开更多
关键词 缺氧预处理 骨髓源神经干细胞 神经生长因子 立体定向移植
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成人骨髓源性神经干细胞诱导分化实验研究 被引量:21
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作者 姜晓丹 徐如祥 +3 位作者 张世忠 邹雨汐 徐强 柳晓秋 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期947-949,W001,W002,共5页
为探讨成人骨髓分离培养神经干细胞的可行性和有效性 ,无菌条件下行骨穿 ,梯度密度离心分离获取成人骨髓源细胞 ,以“CYTOKINE·神经干细胞培养液”培养 ,确定神经干细胞的最佳体外生存环境。以细胞克隆方法判断神经干细胞增殖情况 ... 为探讨成人骨髓分离培养神经干细胞的可行性和有效性 ,无菌条件下行骨穿 ,梯度密度离心分离获取成人骨髓源细胞 ,以“CYTOKINE·神经干细胞培养液”培养 ,确定神经干细胞的最佳体外生存环境。以细胞克隆方法判断神经干细胞增殖情况 ;以NESTIN、NSE及GFAP免疫细胞化学方法分别鉴定神经干细胞、神经元和神经胶质细胞。细胞培养所涉及的细胞因子主要有GDNF(2 0ng/ml)、LIF(10ng/ml)和RA(0 5 μg/ml)等。结果发现 ,成人骨髓源细胞在相应培养条件下快速分裂增殖为大而圆并含粗大胞质颗粒的神经干细胞 ,后者形成细胞球 (或称“神经球”) ,该细胞球表达特殊的神经干细胞NESTIN抗原 ;若进一步将这些细胞球分离成单细胞并重新以克隆密度培养 ,单个的细胞又很快形成新的神经球。神经干细胞球进一步分化 ,可见到有的细胞胞体增大并出芽 ,逐渐发育成为较成熟的长突起细胞 ,长突起相互连接、交织成网并建立有神经纤维样联系 ,表达NSE或GFAP抗原。说明成年人骨髓在一定条件诱导下可以生成神经干细胞 ; 展开更多
关键词 成人 骨髓神经干细胞 诱导分化 实验研究 骨髓细胞 神经干细胞 细胞分化 细胞培养
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康复训练对脊髓损伤大鼠外源性移植的骨髓源性神经干细胞的影响 被引量:6
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作者 周治来 陈银海 闵少雄 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第17期3103-3106,共4页
目的:研究康复训练对移植到脊髓损伤大鼠体内的骨髓源性神经干细胞的存活、迁移、分化以及大鼠功能恢复的影响。方法:制作40只T10脊髓损伤动物模型,随机分成4组,分别为移植组(Y组)、康复训练组(K组)和康复训练联合细胞移植组(L组)、对照... 目的:研究康复训练对移植到脊髓损伤大鼠体内的骨髓源性神经干细胞的存活、迁移、分化以及大鼠功能恢复的影响。方法:制作40只T10脊髓损伤动物模型,随机分成4组,分别为移植组(Y组)、康复训练组(K组)和康复训练联合细胞移植组(L组)、对照组(C组),在脊髓损伤后第7天将培养并标记好的骨髓源性神经干细胞移植到Y、L组中。分别在脊髓损伤后1、3、7d及2、3、4、5、6周对所有动物进行BBB评分。免疫荧光染色观察移植的细胞在脊髓内的迁移、分化的情况。结果:BBB评分显示,细胞移植2周后,L组评分明显高于其他各组(P<0.01)。免疫荧光染色显示,L组动物的神经干细胞存活率较Y组好,分化为神经元的比例更高。结论:康复训练能够促进移植的神经干细胞在脊髓中的存活并能促进其分化,有益于脊髓损伤大鼠后肢功能的恢复。 展开更多
关键词 脊髓损伤 康复训练 骨髓神经干细胞 细胞移植
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dsRNA阻断大鼠骨髓源性神经干细胞Hes5表达的实验研究 被引量:3
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作者 王海燕 徐如祥 +1 位作者 姜晓丹 罗深秋 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第1期35-38,41,共5页
目的 观察外源性短双链RNA(dsRNA)在转录后水平即mRNA水平降低基因表达的效率,并对其影响因素进行初步探讨。方法 将体外分离培养的大鼠骨髓基质细胞,通过由本实验室配制的特殊培养基诱导成神经干细胞,应用人工合成的dsRNA于不同浓... 目的 观察外源性短双链RNA(dsRNA)在转录后水平即mRNA水平降低基因表达的效率,并对其影响因素进行初步探讨。方法 将体外分离培养的大鼠骨髓基质细胞,通过由本实验室配制的特殊培养基诱导成神经干细胞,应用人工合成的dsRNA于不同浓度转染神经干细胞,Western bloting检测dsRNA是否能阻断转录因子Hes5的表达,0.5%锥虫蓝法测定各浓度组中培养细胞活力。结果 200、300nmol/L浓度的dsRNA能特异有效地阻断Hes5的表达,而50~200nmol/L浓度的dsRNA有利于干细胞存活。结论 dsRNA能在神经干细胞内启动RNA干扰作用,适宜浓度的dsRNA能在特异有效地阻断内源性基因的表达的同时,最大限度地保持细胞活力。 展开更多
关键词 DSRNA 大鼠 骨髓神经干细胞 Hes5 实验 性短双链RNA 基因表达
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神经生物学
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《中国医学文摘(基础医学)》 CSCD 2005年第4期203-208,共6页
大鼠纹状体边缘区和海马空间学习功能比较的研究;脂质体介导的VEGF质粒脑室内注射促进缺血再灌注损伤大鼠脑的修复;DNA修复蛋白PARP在大鼠脑缺血再灌注损伤中的表达时程观察;慢性锂处理对大鼠海马NOS表达的影响;成年大鼠纹状体海人... 大鼠纹状体边缘区和海马空间学习功能比较的研究;脂质体介导的VEGF质粒脑室内注射促进缺血再灌注损伤大鼠脑的修复;DNA修复蛋白PARP在大鼠脑缺血再灌注损伤中的表达时程观察;慢性锂处理对大鼠海马NOS表达的影响;成年大鼠纹状体海人藻酸损伤后nestin的表达;丙戊酸钠影响癫痫大鼠脑细胞凋亡的剂量;帕金森病患者血浆同型半胱氨酸水平及其代谢相关酶基因多态性分析;帕金森病MPTP处理小鼠下丘脑和海马IL-1β和IL-6水平变化;胶质瘤细胞端粒结合因子与ING1基因表达关系的研究;转染XRCC3基因的人脑胶质瘤细胞增加烷化剂类抗癌药耐药性;p53基因对胶质瘤细胞系U251生长抑制作用的研究;星形胶质细胞瘤中PTEN、P16及P53蛋白的表达和意义;神经细胞膜NMDA受体蛋白激光共聚焦显微镜亚细胞定位研究;癫痫灶中凋亡调控基因Bcl-2和Bax的表达;亚低温治疗犬颅脑枪弹伤后局部脑组织c-jun蛋白的表达;S-100、HLA-DR双阳性树突状细胞在重症肌无力患者胸腺中的变化;骨骼肌25000蛋白分布于Ⅰ型肌纤维;小鼠单纯疱疹病毒Ⅰ型脑内潜伏感染的实验研究;高葡萄糖对施万细胞CGT和GalC表达的影响;宽叶缬草对血管性痴呆小鼠学习记忆及海马区神经元病理学改变的影响;百草枯与lactacystin对黑质细胞协同毒性作用;新霉素联合苯丁酸钠对脑胶质瘤抑制作用的机制研究;氟桂利嗪对杏仁核点燃鼠海马Bax mRNA表达的影响;丙戊酸对癫痫大鼠海马兴奋性氨基酸类神经递质动态释放的影响;成人骨髓源性神经干细胞的致瘤性研究;体外培骨髓养源性神经干细胞的细胞遗传学分析;骨髓基质细胞分泌物促进PC12细胞的分化和存活;大鼠免疫细胞及器官的固有胆碱能系统;大鼠脑积水模型的建立;S100β与血管性认知损害的关系。 展开更多
关键词 神经生物学 骨髓神经干细胞 脑缺血再灌注损伤 单纯疱疹病毒Ⅰ型 DNA修复蛋白 血浆同型半胱氨酸 激光共聚焦显微镜 氨基酸类神经递质 纹状体边缘区
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