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小鼠骨髓源性巨噬细胞诱导及冻存方法的优化
1
作者
魏琼
赵梦竹
+2 位作者
程序
刘梦华
张冬梅
《中国病理生理杂志》
北大核心
2025年第3期611-618,共8页
目的:探讨小鼠骨髓源性巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDMs)诱导及冻存的适宜方法。方法:将小鼠成纤维细胞(L929细胞)于不同温度、接种密度、血清浓度培养条件下培养,ELISA法检测细胞上清中巨噬细胞集落刺激因子(macrophag...
目的:探讨小鼠骨髓源性巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDMs)诱导及冻存的适宜方法。方法:将小鼠成纤维细胞(L929细胞)于不同温度、接种密度、血清浓度培养条件下培养,ELISA法检测细胞上清中巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)浓度;提取小鼠骨髓细胞,细胞差速贴壁法将骨髓细胞预培养4 h,流式细胞术检测骨髓原驻留巨噬细胞比例;使用L929细胞上清或重组M-CSF诱导细胞7 d,倒置显微镜下观察细胞形态变化,流式细胞术检测诱导后细胞F4/80及CD11b双阳性占比;中性红法及ELISA法检测C57BL/6N和C57BL/6J两种亚型来源BMDMs吞噬能力和炎症反应水平;将提取的骨髓细胞即刻冻存后复苏再诱导,或将已成功诱导的BMDMs冻存后复苏,倒置显微镜下观察细胞形态,CCK-8法检测细胞活力,中性红法检测吞噬能力。结果:33℃、10%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)培养7 d条件下的L929细胞上清中富集高浓度M-CSF;骨髓细胞经预培养4 h,贴壁细胞中F4/80+占比显著高于悬浮细胞(P<0.01);经L929上清或重组M-CSF诱导7 d后细胞F4/80+CD11b+占比无显著差异(P>0.05);与C57BL/6J亚型来源BMDMs相比,C57BL/6N亚型来源BMDMs具有更强的吞噬能力(P<0.01),释放较低水平TNF-α(P<0.01)和IL-6(P<0.05),以及较高水平IL-1β(P<0.05);相较于将已成功诱导的BMDMs冻存后复苏,骨髓细胞提取后即刻冻存、复苏再诱导的BMDMs具有更好的巨噬细胞形态,更高的细胞活力(P<0.01)和更强的吞噬能力(P<0.01)。结论:通过33℃、10%FBS培养7 d的L929细胞上清富含更高浓度M-CSF,可成功诱导骨髓细胞分化为小鼠骨髓源性巨噬细胞,细胞差速贴壁法预培养可去除原骨髓驻留巨噬细胞,C57BL/6N和C57BL/6J两种亚型来源BMDMs吞噬能力和炎症反应水平不同,将提取的骨髓细胞即刻冻存后复苏再诱导是较好的BMDMs冻存方法。
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关键词
小鼠
骨髓源性巨噬细胞
原代
细胞
成纤维
细胞
巨
噬
细胞
集落刺激因子
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职称材料
不同代数骨髓源性巨噬细胞增殖及诱导破骨分化的规律研究
被引量：
2
2
作者
陈弘林
沈耿杨
+8 位作者
尚奇
秦威城
余富勇
招文华
张志达
张鹏
唐福宇
江晓兵
任辉
《中国骨质疏松杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第4期481-485,492,共6页
目的探讨不同代数骨髓源性巨噬细胞增殖及诱导破骨分化的规律。方法选取8周龄C57BL/6小鼠P0~P4共5代骨髓源性巨噬细胞,随机选择镜下视野计数杂质细胞与衰老细胞;运用CCK8法检测骨髓源性巨噬细胞的增殖能力;诱导巨噬细胞破骨分化,通过抗...
目的探讨不同代数骨髓源性巨噬细胞增殖及诱导破骨分化的规律。方法选取8周龄C57BL/6小鼠P0~P4共5代骨髓源性巨噬细胞,随机选择镜下视野计数杂质细胞与衰老细胞;运用CCK8法检测骨髓源性巨噬细胞的增殖能力;诱导巨噬细胞破骨分化,通过抗酒石酸酸性磷酸酶染色量化破骨细胞数量与破骨细胞面积,比较不同代数之间指标差异。结果P0组、P1组骨髓源性巨噬细胞的杂质较P2组、P3组、P4组更多,且差异有统计学意义;96 h内,P2组骨髓源性巨噬细胞的增殖能力最强,P3组、P4组次之,P0组、P1组最差;诱导破骨分化后,P2组骨髓源性巨噬细胞诱导出破骨细胞数量最多,面积最大,P3组次之,P0组、P1组、P4组诱导出破骨细胞数量少,面积小。结论P2组骨髓源性巨噬细胞的纯度最高,增殖速度最快,破骨分化能力最强。
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关键词
不同代数
骨髓源性巨噬细胞
增殖
破骨分化
规律
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职称材料
题名
小鼠骨髓源性巨噬细胞诱导及冻存方法的优化
1
作者
魏琼
赵梦竹
程序
刘梦华
张冬梅
机构
北京中医药大学东直门医院
海军军医大学中医系
开封市中医院
出处
《中国病理生理杂志》
北大核心
2025年第3期611-618,共8页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.82474445)
北京中医药大学“揭榜挂帅”项目(No.2022-JYB-JBZR-013)。
文摘
目的:探讨小鼠骨髓源性巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDMs)诱导及冻存的适宜方法。方法:将小鼠成纤维细胞(L929细胞)于不同温度、接种密度、血清浓度培养条件下培养,ELISA法检测细胞上清中巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)浓度;提取小鼠骨髓细胞,细胞差速贴壁法将骨髓细胞预培养4 h,流式细胞术检测骨髓原驻留巨噬细胞比例;使用L929细胞上清或重组M-CSF诱导细胞7 d,倒置显微镜下观察细胞形态变化,流式细胞术检测诱导后细胞F4/80及CD11b双阳性占比;中性红法及ELISA法检测C57BL/6N和C57BL/6J两种亚型来源BMDMs吞噬能力和炎症反应水平;将提取的骨髓细胞即刻冻存后复苏再诱导,或将已成功诱导的BMDMs冻存后复苏,倒置显微镜下观察细胞形态,CCK-8法检测细胞活力,中性红法检测吞噬能力。结果:33℃、10%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)培养7 d条件下的L929细胞上清中富集高浓度M-CSF;骨髓细胞经预培养4 h,贴壁细胞中F4/80+占比显著高于悬浮细胞(P<0.01);经L929上清或重组M-CSF诱导7 d后细胞F4/80+CD11b+占比无显著差异(P>0.05);与C57BL/6J亚型来源BMDMs相比,C57BL/6N亚型来源BMDMs具有更强的吞噬能力(P<0.01),释放较低水平TNF-α(P<0.01)和IL-6(P<0.05),以及较高水平IL-1β(P<0.05);相较于将已成功诱导的BMDMs冻存后复苏,骨髓细胞提取后即刻冻存、复苏再诱导的BMDMs具有更好的巨噬细胞形态,更高的细胞活力(P<0.01)和更强的吞噬能力(P<0.01)。结论:通过33℃、10%FBS培养7 d的L929细胞上清富含更高浓度M-CSF,可成功诱导骨髓细胞分化为小鼠骨髓源性巨噬细胞,细胞差速贴壁法预培养可去除原骨髓驻留巨噬细胞,C57BL/6N和C57BL/6J两种亚型来源BMDMs吞噬能力和炎症反应水平不同,将提取的骨髓细胞即刻冻存后复苏再诱导是较好的BMDMs冻存方法。
关键词
小鼠
骨髓源性巨噬细胞
原代
细胞
成纤维
细胞
巨
噬
细胞
集落刺激因子
Keywords
mouse bone marrow-derived macrophages
primary cells
fibroblasts
macrophage colony-stimu-lating factor
分类号
R363 [医药卫生—病理学]
Q813.1 [生物学—生物工程]
Q952.5 [生物学—动物学]
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职称材料
题名
不同代数骨髓源性巨噬细胞增殖及诱导破骨分化的规律研究
被引量：
2
2
作者
陈弘林
沈耿杨
尚奇
秦威城
余富勇
招文华
张志达
张鹏
唐福宇
江晓兵
任辉
机构
广州中医药大学第一附属医院
广州中医药大学
广州中医药大学岭南医学研究中心
柳州市中医医院
出处
《中国骨质疏松杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第4期481-485,492,共6页
基金
国家自然科学基金(81904225,81774338)
广东省教育厅基础研究及应用基础研究重点项目(2018KZDXM021)
+1 种基金
广东省高等学校珠江学者岗位计划资助项目(2018)
广西自然科学基金(桂科计字[2019]259号)。
文摘
目的探讨不同代数骨髓源性巨噬细胞增殖及诱导破骨分化的规律。方法选取8周龄C57BL/6小鼠P0~P4共5代骨髓源性巨噬细胞,随机选择镜下视野计数杂质细胞与衰老细胞;运用CCK8法检测骨髓源性巨噬细胞的增殖能力;诱导巨噬细胞破骨分化,通过抗酒石酸酸性磷酸酶染色量化破骨细胞数量与破骨细胞面积,比较不同代数之间指标差异。结果P0组、P1组骨髓源性巨噬细胞的杂质较P2组、P3组、P4组更多,且差异有统计学意义;96 h内,P2组骨髓源性巨噬细胞的增殖能力最强,P3组、P4组次之,P0组、P1组最差;诱导破骨分化后,P2组骨髓源性巨噬细胞诱导出破骨细胞数量最多,面积最大,P3组次之,P0组、P1组、P4组诱导出破骨细胞数量少,面积小。结论P2组骨髓源性巨噬细胞的纯度最高,增殖速度最快,破骨分化能力最强。
关键词
不同代数
骨髓源性巨噬细胞
增殖
破骨分化
规律
Keywords
different algebraic
marrow derived macrophages
proliferation
osteoclast differentiation
rule
分类号
R336 [医药卫生—人体生理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小鼠骨髓源性巨噬细胞诱导及冻存方法的优化
魏琼
赵梦竹
程序
刘梦华
张冬梅
《中国病理生理杂志》
北大核心
2025
0
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职称材料
2
不同代数骨髓源性巨噬细胞增殖及诱导破骨分化的规律研究
陈弘林
沈耿杨
尚奇
秦威城
余富勇
招文华
张志达
张鹏
唐福宇
江晓兵
任辉
《中国骨质疏松杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022
2
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