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骨转移性LUAD细胞通过HGF/YAP信号通路促进血管生成的机制研究
1
作者
邓妍
仇荣
+3 位作者
刘星羽
苏英洋
薛阳
杜玉珍
《中国肺癌杂志》
CSCD
北大核心
2024年第11期805-814,共10页
背景与目的肿瘤骨转移早期与骨微环境血管生态位改变密切相关,异常的血管生成加速肿瘤转移进展,但骨微环境中肺腺癌细胞对血管生态位的作用及其机制仍不清楚。本研究通过探讨骨微环境驯化的肺腺癌细胞株对内皮细胞及血管生成的影响及机...
背景与目的肿瘤骨转移早期与骨微环境血管生态位改变密切相关,异常的血管生成加速肿瘤转移进展,但骨微环境中肺腺癌细胞对血管生态位的作用及其机制仍不清楚。本研究通过探讨骨微环境驯化的肺腺癌细胞株对内皮细胞及血管生成的影响及机制,为骨微环境肿瘤细胞对血管生态位的影响提供参考。方法用骨微环境驯化的肺腺癌细胞A549-GFP-LUC-BM3(BM3)培养上清(BM3-CM)和A549-GFP-LUC(A549)培养上清(A549-CM)分别作用于人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC),用克隆形成实验、划痕实验及血管生成实验比较HUVEC增殖、迁移及血管生成能力的变化;基因富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)、逆转录定量聚合酶链反应(reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)以及酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)用于检测与细胞血管生成密切相关的肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)的表达;进一步使用重组蛋白、中和抗体、信号通路抑制剂、免疫荧光染色(immunofluorescence staining,IF)及Westernblot等技术验证HGF的关键作用以及分子机制。结果BM3-CM比A549-CM具有更强的促HUVEC增殖、迁移及血管生成作用;生物信息学结合体外实验筛选发现分泌型蛋白HGF在BM3细胞及BM-CM中显著增高(P<0.05);BM3-CM中加入HGF中和抗体可抑制BM3-CM对HUVEC的促进作用(P<0.05),A549-CM中加入HGF重组蛋白可重现BM3-CM对HUVEC的促进作用(P<0.05);BM3细胞分泌HGF可促进HUVEC的YAP(Yes相关蛋白)活化,该促进作用可能通过激活Src,使YAP入核活化实现(P<0.05);且促YAP活化作用可被HGF中和抗体所抑制(P<0.05),A549-CM中加入HGF重组蛋白可复现BM3-CM对HUVEC中YAP的活化(P<0.05)。结论骨微环境驯化的高骨转移肺腺癌细胞BM3通过HGF/YAP轴促进HUVEC增殖、迁移及血管生成,可能对血管生态位的改变具有重要作用。
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关键词
骨转移肺腺癌细胞
血管生成
HGF
YAP
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题名
骨转移性LUAD细胞通过HGF/YAP信号通路促进血管生成的机制研究
1
作者
邓妍
仇荣
刘星羽
苏英洋
薛阳
杜玉珍
机构
上海海洋大学水产与生命学院
上海交通大学医学院附属第六人民医院医学检验科
出处
《中国肺癌杂志》
CSCD
北大核心
2024年第11期805-814,共10页
基金
国家自然科学基金项目(No.81974315)资助。
文摘
背景与目的肿瘤骨转移早期与骨微环境血管生态位改变密切相关,异常的血管生成加速肿瘤转移进展,但骨微环境中肺腺癌细胞对血管生态位的作用及其机制仍不清楚。本研究通过探讨骨微环境驯化的肺腺癌细胞株对内皮细胞及血管生成的影响及机制,为骨微环境肿瘤细胞对血管生态位的影响提供参考。方法用骨微环境驯化的肺腺癌细胞A549-GFP-LUC-BM3(BM3)培养上清(BM3-CM)和A549-GFP-LUC(A549)培养上清(A549-CM)分别作用于人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC),用克隆形成实验、划痕实验及血管生成实验比较HUVEC增殖、迁移及血管生成能力的变化;基因富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)、逆转录定量聚合酶链反应(reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)以及酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)用于检测与细胞血管生成密切相关的肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)的表达;进一步使用重组蛋白、中和抗体、信号通路抑制剂、免疫荧光染色(immunofluorescence staining,IF)及Westernblot等技术验证HGF的关键作用以及分子机制。结果BM3-CM比A549-CM具有更强的促HUVEC增殖、迁移及血管生成作用;生物信息学结合体外实验筛选发现分泌型蛋白HGF在BM3细胞及BM-CM中显著增高(P<0.05);BM3-CM中加入HGF中和抗体可抑制BM3-CM对HUVEC的促进作用(P<0.05),A549-CM中加入HGF重组蛋白可重现BM3-CM对HUVEC的促进作用(P<0.05);BM3细胞分泌HGF可促进HUVEC的YAP(Yes相关蛋白)活化,该促进作用可能通过激活Src,使YAP入核活化实现(P<0.05);且促YAP活化作用可被HGF中和抗体所抑制(P<0.05),A549-CM中加入HGF重组蛋白可复现BM3-CM对HUVEC中YAP的活化(P<0.05)。结论骨微环境驯化的高骨转移肺腺癌细胞BM3通过HGF/YAP轴促进HUVEC增殖、迁移及血管生成,可能对血管生态位的改变具有重要作用。
关键词
骨转移肺腺癌细胞
血管生成
HGF
YAP
Keywords
Bone-metastatic LUAD cells
Angiogenesis
HGF
YAP
分类号
R734.2 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
骨转移性LUAD细胞通过HGF/YAP信号通路促进血管生成的机制研究
邓妍
仇荣
刘星羽
苏英洋
薛阳
杜玉珍
《中国肺癌杂志》
CSCD
北大核心
2024
0
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