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弓形虫入侵的宿主细胞骨架重塑触发线粒体重新分布 被引量:3
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作者 吴亮 王晓 +5 位作者 苏丹华 刘原 付涛 姜旭淦 陈盛霞 曹建平 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1001-1004,共4页
目的探讨宿主细胞骨架重塑在弓形虫侵入HFF细胞以及触发细胞线粒体重新分布中的作用。方法体外培养HFF细胞,预先用1μg/mL细胞松驰素D(CD)处理30min,接种弓形虫速殖子分别培养1h和20h,Western blotting检测弓形虫表面抗原(surface antig... 目的探讨宿主细胞骨架重塑在弓形虫侵入HFF细胞以及触发细胞线粒体重新分布中的作用。方法体外培养HFF细胞,预先用1μg/mL细胞松驰素D(CD)处理30min,接种弓形虫速殖子分别培养1h和20h,Western blotting检测弓形虫表面抗原(surface antigen,SAG)1蛋白表达。同时用MitoTrackerRed CMXRos荧光探针标记细胞线粒体,激光共聚焦显微镜下观察HFF细胞线粒体在弓形虫侵入前后和CD处理前后聚集和分布情况。结果感染后1h,CD处理组HFF细胞内虫体量与CD未处理组差异不大,20h时CD未处理组细胞内虫体量显著多于CD处理组。此时可见HFF细胞线粒体明显聚集成明亮点状且分布于纳虫泡周围,而未感染组细胞线粒体未见明显聚集分布。CD可以显著抑制弓形虫侵入HFF细胞后引起的线粒体聚集。结论触发宿主细胞骨架重塑是弓形虫侵入宿主细胞并引起细胞线粒体向纳虫泡聚集所必须的。 展开更多
关键词 弓形虫 细胞骨架重塑 侵入 线粒体重新分布
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成纤维细胞生长因子2(FGF-2)诱导大鼠骨髓间充质干细胞骨架重塑 被引量:3
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作者 宁芬茹 李东林 程朋真 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期505-511,共7页
目的探讨成纤维细胞生长因子2(FGF-2)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)形态和骨架的影响。方法采用大鼠动脉内皮细胞(RAEC)和BMSC的TranswellTM隔离共培养体系,通过扫描电镜和罗丹明标记的鬼笔环肽染色观察BMSC的形态和骨架变化,ELISA检测... 目的探讨成纤维细胞生长因子2(FGF-2)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)形态和骨架的影响。方法采用大鼠动脉内皮细胞(RAEC)和BMSC的TranswellTM隔离共培养体系,通过扫描电镜和罗丹明标记的鬼笔环肽染色观察BMSC的形态和骨架变化,ELISA检测细胞上清中的FGF-2含量;实时定量PCR检测单独和共培养后两种细胞的FGF-2 mRNA水平,共培养体系中添加FGF-2受体的抑制剂NVP-BGJ398,阻断FGF-2受体观察其对BMSC骨架的影响;单独BMSC培养基中添加重组FGF-2,验证外源性FGF-2的作用效果。结果与RAEC共培养后,BMSC逐渐拉伸、收缩,产生大量丝状伪足;在共培养体系中FGF-2含量增加且主要由RAEC分泌;FGF-2受体的抑制剂NVP-BGJ398可显著阻断BMSC骨架重塑,细胞多为短梭形,呈旋涡状排列。外源性FGF-2则促进BMSC胞体收缩、边缘拉伸,产生丝状伪足交错分布。结论RAEC分泌FGF-2诱导BMSC骨架重塑。 展开更多
关键词 骨架重塑 成纤维细胞生长因子2(FGF-2) 骨髓间充质干细胞(BMSC) 大鼠动脉内皮细胞(RAEC)
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A549细胞来源外泌体对肺上皮BEAS-2B细胞紧密连接蛋白及骨架重塑的影响 被引量:2
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作者 邓仕华 吴东明 +4 位作者 韩蓉 刘腾 张婷 谢洪祥 许颖 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2017年第10期1035-1040,共6页
目的外泌体与肿瘤细胞的发生发展密切相关,但具体机制不详。文中旨在探讨非小细胞肺癌A549细胞来源外泌体对正常肺上皮BEAS-2B细胞紧密连接蛋白及骨架重塑的影响。方法超速离心法提取A549细胞exosome,透射电镜进行形态学观察,Western b... 目的外泌体与肿瘤细胞的发生发展密切相关,但具体机制不详。文中旨在探讨非小细胞肺癌A549细胞来源外泌体对正常肺上皮BEAS-2B细胞紧密连接蛋白及骨架重塑的影响。方法超速离心法提取A549细胞exosome,透射电镜进行形态学观察,Western blot鉴定表面标志物CD9、CD63。实验分实验组和对照组,实验组为BEAS-2B细胞中加入终浓度为50μg/m L的exosome,对照组为BEAS-2B细胞中加入等量的PBS液,通过免疫荧光实验、Western blot实验、q PCR实验检测exosome对BEAS-2B细胞紧密连接蛋白ZO-1和Occludin蛋白及mRNA表达的影响,phalloidin-FITC荧光染色实验检测exosome对BEAS-2B细胞骨架重塑的影响,Transwell侵袭实验检测exosome处理BEAS-2B后对A549细胞侵袭BEAS-2B细胞能力的影响。结果免疫荧光实验表明,与对照组相比,实验组的ZO-1及Occuldin的表达明显减少;Western blot实验也表明exosome处理BEAS-2B后可显著减少ZO-1和Occuldin蛋白的表达(P<0.05)。q PCR实验表明,与对照组相比,外泌体处理BEAS-2B后可明显下调紧密连接蛋白ZO-1(1.00±0.00 vs 0.45±0.04)和Occuldin mRNA(1.00±0.00 vs 0.52±0.08)水平,差异有统计学意义(P<0.01)。phalloidin-FITC检测结果表明,与对照组相比exosome直接处理后BEAS-2B细胞后F-actin重聚明显增多。Exosome处理BEAS-2B后A549穿过微孔膜的细胞数量[(22.0±4.0)个]明显高于对照组[(10.6±4.5)个],差异有统计学意义(P<0.05)。结论 A549细胞来源exosome可通过下调BEAS-2B细胞紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达,促进BEAS-2B细胞骨架重塑,最终破坏BEAS-2B细胞对肿瘤细胞A549的屏障作用。 展开更多
关键词 A549 紧密连接蛋白 骨架重塑 侵袭
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Lat-B对家兔巩膜胶原重塑的影响
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作者 李卫国 张磊 +3 位作者 宫月荣 雷宁玉 考华婷 何湘珍 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2010年第11期1048-1053,共6页
目的研究latrunculin-B(Lat-B)对兔巩膜通透性的影响,为细胞骨架因子在青光眼治疗中的应用及眼后节疾病的药物传递研究提供新的思路和理论依据。方法 36只家兔随机分为平衡盐液(BSS)组、二甲基亚砜(DMSO)组及Lat-B组,每组12只,分别用BSS... 目的研究latrunculin-B(Lat-B)对兔巩膜通透性的影响,为细胞骨架因子在青光眼治疗中的应用及眼后节疾病的药物传递研究提供新的思路和理论依据。方法 36只家兔随机分为平衡盐液(BSS)组、二甲基亚砜(DMSO)组及Lat-B组,每组12只,分别用BSS、DMSO和Lat-B局部点眼,于用药前1h及用药后1、2、3、4、5、6、24h分别测量眼压,于24h后处死动物并获取部分巩膜组织,自制巩膜滤过装置测试巩膜通透性的变化,部分巩膜组织行免疫组织化学染色以检测前部巩膜组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和组织金属蛋白酶-2抑制剂(TIMP-2)的表达。光学显微镜下观察实验兔眼部各组织结构的形态学变化。结果 Lat-B组、BSS组与DMSO组点眼前后各时间点眼压的总体变化差异有统计学意义(F=25.76,P<0.01),Lat-B点眼后不同时间点与点眼前比较眼压呈下降趋势,差异有统计学意义(Ftime=4.50,P<0.01),点眼后1h即可引起眼压降低,降眼压作用可持续24h;BSS组与DMSO组点眼前后各时间点眼压变化的差异无统计学意义(P>0.05);Lat-B点眼后的前部巩膜对BSS的滤过较BSS组和DMSO组明显增加,3组的总体比较差异有统计学意义(F=47.50,P<0.01);Lat-B组、BSS组和DMSO组MMP-2及TIMP-2表达的吸光度(A)值的总体比较差异均有统计学意义(F=28.70,F=22.30,P<0.01)。MMP-2、TIMP-2的表达Lat-B组与BSS组比较差异有统计学意义(P<0.01),与DMSO组比较二者的表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.01);BSS组和DMSO组间MMP-2及TIMP-2比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 Lat-B能够有效降低眼压,明显提高巩膜的房水流出易度,并可通过上调MMP-2、TIMP-2的表达导致巩膜胶原重塑。 展开更多
关键词 latrunculin-B 眼压 细胞骨架重塑 基质金属蛋白酶 组织金属蛋白酶-2抑制剂
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