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驻景丸加减方含药血清调控PINK1/Parkin介导的线粒体自噬对加压诱导大鼠RGCs损伤模型的影响
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作者 高佳 刘红佶 +1 位作者 张丹 汪伟 《眼科新进展》 北大核心 2025年第5期342-347,364,共7页
目的观察驻景丸加减方含药血清对加压诱导大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)损伤模型线粒体自噬及相关蛋白的影响。方法分别使用驻景丸加减方(剂量为10 mL·kg^(-1))和等量生理盐水灌胃雄性SD大鼠各10只制备驻景丸加减方含药血清和空白血... 目的观察驻景丸加减方含药血清对加压诱导大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)损伤模型线粒体自噬及相关蛋白的影响。方法分别使用驻景丸加减方(剂量为10 mL·kg^(-1))和等量生理盐水灌胃雄性SD大鼠各10只制备驻景丸加减方含药血清和空白血清。分别予0、20、40、60、80 mmHg(1 kPa=7.5 mmHg)的压力体外加压培养大鼠RGCs损伤模型,根据加压实验结果,最终选取80 mmHg体外加压培养的大鼠RGCs损伤模型用于后续实验。将大鼠RGCs随机分为对照组(NG组,细胞不做任何处理)、模型组(MG组,损伤模型细胞且不做后续血清干预)、空白血清组(KB组,损伤模型细胞且使用空白大鼠血清干预)以及驻景丸加减方血清组(LVP组,损伤模型细胞且使用驻景丸加减方含药血清干预)。采用流式细胞仪检测干预前后大鼠RGCs凋亡情况;透射电镜观察各组大鼠RGCs线粒体形态;Western blot实验检测各组大鼠RGCs的PINK1、parkin、LC3 II/I以及p62蛋白表达情况。结果透射电镜观察显示,NG组细胞线粒体双膜结构完整,线粒体嵴分布均匀;MG组和KB组细胞可见线粒体双膜结构破坏,线粒体内大量空泡;LVP组细胞线粒体可见双膜结构,线粒体内空泡较MG组和KB组减少,形态基本和NG组细胞一致。流式细胞仪检测结果显示,NG组、MG组、KB组以及LVP组大鼠RGCs凋亡率分别为(4.25±0.55)%、(20.79±3.06)%、(30.07±3.23)%以及(11.42±0.16)%。与NG组相比,MG组大鼠RGCs凋亡率上升,差异有统计学意义(P<0.01);与MG组及KB组相比,LVP组大鼠RGCs凋亡率均下降,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。Western blot检测结果显示,与NG组相比,MG组大鼠RGCs的PINK1、Parkin以及LC3 II/I蛋白相对表达水平均上升,p62蛋白相对表达水平下降,差异均有统计学意义(均为P<0.01);与MG组及KB组相比,LVP组大鼠RGCs的PINK1、Parkin以及LC3 II/I蛋白相对表达水平均下降,p62蛋白相对表达水平均上升,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论驻景丸加减方含药血清可能通过调控PINK1/Parkin介导的线粒体自噬,抑制体外加压培养的大鼠RGCs线粒体自噬,发挥RGCs保护作用。 展开更多
关键词 驻景丸加减方 视网膜神经节细胞 含药血清 线粒体自噬 PINK1/Parkin
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驻景丸加减方治疗肝肾不足型干性年龄相关性黄斑变性的临床研究 被引量:1
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作者 冯思齐 周欣 +6 位作者 张元钟 杨宁 周思齐 熊彩建 金青子 陶康 徐新荣 《南京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期521-526,共6页
目的评价驻景丸加减方治疗肝肾不足型干性年龄相关性黄斑变性(AMD)的临床疗效。方法64例肝肾不足型干性AMD患者随机分为试验组和对照组各32例。对照组予莱视盯胶囊口服治疗,试验组予驻景丸加减方颗粒剂口服治疗,2组疗程均为3个月。治疗... 目的评价驻景丸加减方治疗肝肾不足型干性年龄相关性黄斑变性(AMD)的临床疗效。方法64例肝肾不足型干性AMD患者随机分为试验组和对照组各32例。对照组予莱视盯胶囊口服治疗,试验组予驻景丸加减方颗粒剂口服治疗,2组疗程均为3个月。治疗前后观察2组患者中医证候积分、视力、眼底自发荧光(AF)、黄斑中心凹5 mm内玻璃疣面积变化情况,检测血浆超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)水平变化情况。结果治疗后,试验组中医证候积分均明显减少(P<0.05,P<0.01),中医证候疗效优于对照组(P<0.01);试验组患者视力明显提高、AF显著减弱、玻璃疣的面积减少(P<0.05,P<0.01),均优于对照组(P<0.05);试验组血浆SOD和GSH-Px活性提高、MDA水平显著降低(P<0.05,P<0.01),优于对照组(P<0.05)。结论驻景丸加减方能降低干性AMD患者眼底AF强度、减少黄斑区玻璃疣面积、提高视力、降低中医证候积分,疗效机制可能与其抗氧化作用有关。 展开更多
关键词 驻景丸加减方 年龄相关性黄斑变性 肝肾不足 临床疗效
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驻景丸加减方含药血清对过氧化氢诱导的人RPE细胞上皮-间质转化的抑制作用及其机制 被引量:4
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作者 邵雁 张元钟 +4 位作者 杨宁 杭丽 陈春明 李敏 徐新荣 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期1013-1022,共10页
目的研究驻景丸加减方含药血清对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人视网膜色素上皮(ARPE)-19细胞上皮-间质转化(EMT)的作用及其机制。方法选取2月龄SPF级雌性SD大鼠30只,采用随机数字表法将其随机分为空白对照组和驻景丸加减方组,每组15只,... 目的研究驻景丸加减方含药血清对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人视网膜色素上皮(ARPE)-19细胞上皮-间质转化(EMT)的作用及其机制。方法选取2月龄SPF级雌性SD大鼠30只,采用随机数字表法将其随机分为空白对照组和驻景丸加减方组,每组15只,分别给予生理盐水和驻景丸加减方连续灌胃7 d,以制备空白血清和含药血清。采用SD大鼠制备驻景丸加减方含药血清。将ARPE-19细胞分为正常对照组,模型对照组,空白血清组,2.5%、5.0%、10.0%含药血清组,SB216763组和SB216763+含药血清组;其中前2个组均于正常培养基中培养,后6个组分别于含空白大鼠血清培养基、相应浓度含药血清培养基、10μmol/L GSK-3抑制剂SB216763培养基以及10μmol/L SB216763+10.0%的含药血清培养基中培养;正常对照组常规培养,其他各组先常规培养24 h,后加入终浓度200μmol/L的H_(2)O_(2)继续培养24 h。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞活性;Transwell法检测细胞迁移能力;DCFH-DA法检测细胞内活性氧簇(ROS)含量;硫化巴比妥酸法检测细胞内丙二醛(MDA)含量;Western blot法检测细胞中Nrf2通路相关蛋白核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO-1)和EMT相关蛋白转化生长因子β2(TGF-β2)、蛋白激酶B(AKT)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、snail家族锌指转录因子1(SNAIL1)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。结果空白血清组、2.5%、5.0%、10.0%组细胞存活率总体比较差异无统计学意义(F=0.163,P>0.05)。正常对照组、模型对照组、2.5%含药血清组、5.0%含药血清组、10.0%含药血清组细胞存活率分别为(100.50±5.91)%、(60.87±4.30)%、(73.27±4.46)%、(80.73±5.67)%和(89.90±4.97)%,正常对照组、模型对照组、空白血清组、2.5%含药血清组、5.0%含药血清组和10.0%含药血清组细胞迁移数分别为(84.67±8.33)、(222.33±13.58)、(215.67±10.02)、(174.67±10.60)、(143.67±8.02)和(107.67±6.66)个/视野,总体比较差异均有统计学意义(F=26.628、99.289,均P<0.01)。模型对照组细胞内ROS和MDA含量较正常对照组显著增加,差异均有统计学意义(均P<0.01);各含药血清组细胞内ROS和MDA含量均较模型对照组显著减少,差异均有统计学意义(均P<0.01)。模型对照组细胞内SNAIL1、α-SMA、TGF-β2、p-AKT及p-GSK-3β蛋白相对表达量明显多于正常对照组和各浓度含药血清组,E-cadherin蛋白相对表达量明显少于正常对照组和各浓度含药血清组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与正常对照组比,模型对照组细胞质Nrf2蛋白相对表达量降低,细胞核Nrf2、HO-1和NQO-1蛋白相对表达量升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);与模型对照组比,各含药血清组细胞质Nrf2蛋白相对表达量降低,细胞核Nrf2、HO-1和NQO-1蛋白相对表达量升高,差异均有统计学意义(均P<0.01)。与模型对照组相比,SB216763组细胞质Nrf2蛋白相对表达量降低,细胞核Nrf2蛋白相对表达量升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);与SB216763组相比,SB216763+含药血清组细胞质Nrf2、SNAIL1和α-SMA蛋白相对表达量降低,细胞核Nrf2和E-cadherin蛋白相对表达量升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论驻景丸加减方含药血清抑制H_(2)O_(2)诱导的ARPE-19细胞EMT,可能与AKT/GSK-3β通路的抑制及Nrf2信号通路的激活有关。 展开更多
关键词 黄斑变性 氧化应激 上皮-间质转化 驻景丸加减方 视网膜色素上皮细胞
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驻景丸加减方对干性年龄相关性黄斑变性模型小鼠视网膜的保护作用 被引量:9
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作者 柯玲玲 周欣 +6 位作者 张元钟 刘雨露 仲路 孙化萍 杭丽 金青子 徐新荣 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2021年第9期812-816,共5页
目的探讨驻景丸加减方对干性年龄相关性黄斑变性(AMD)模型小鼠视网膜的保护作用以及对核因子E2相关因子2(Nrf2)通路和自噬的影响。方法取6月龄健康雄性C57BL/6小鼠90只,将小鼠随机分为年龄对照组(正常饮食)、溶媒对照组(高脂饮食+氢醌)... 目的探讨驻景丸加减方对干性年龄相关性黄斑变性(AMD)模型小鼠视网膜的保护作用以及对核因子E2相关因子2(Nrf2)通路和自噬的影响。方法取6月龄健康雄性C57BL/6小鼠90只,将小鼠随机分为年龄对照组(正常饮食)、溶媒对照组(高脂饮食+氢醌)、对照药物组(高脂饮食+氢醌+莱视盯)及中药组(高脂饮食+氢醌+驻景丸加减方,分低、中、高三个剂量组)6组,每组15只。莱视盯主要成分叶黄素、β-胡萝卜素、葡萄糖酸锌(每100 g含叶黄素2.20 g、β-胡萝卜素0.86 g、锌1.50 g)。各组小鼠灌胃给药,每天1次,持续3个月。动物观察期满处死并摘取眼球,透射电镜观察视网膜组织,测量视网膜色素上皮(RPE)下沉积物面积及Bruch膜厚度,检测视网膜匀浆活性氧自由基(ROS)、丙二醛(MDA)含量,Western blot检测Nrf2、血红素加氧酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶-1(NQO-1)、p62和LC3蛋白表达水平。结果与年龄对照组相比,溶媒对照组RPE下沉积物面积显著增大、Bruch膜明显增厚,差异均有统计学意义(均为P<0.01);与溶媒对照组相比,中药中、高剂量组RPE下沉积物面积减小、Bruch膜厚度变薄,差异均有统计学意义(均为P<0.01);与溶媒对照组相比,中药低剂量组和对照药物组RPE下沉积物面积也均减小,差异均有统计学意义(均为P<0.05),但Bruch膜厚度变化不明显。与溶媒对照组相比,中药中、高剂量组ROS、MDA含量显著降低(均为P<0.01),中药低剂量组和对照药物组ROS、MDA含量也均降低(均为P<0.05);与溶媒对照组相比,中药中、高剂量组细胞质Nrf2蛋白表达显著下调,细胞核Nrf2蛋白表达上调(均为P<0.01),中药低剂量组和对照药物组细胞质Nrf2蛋白表达下调,细胞核Nrf2蛋白表达上调(均为P<0.05);与溶媒对照组相比,中药中、高剂量组HO-1、NQO-1、p62和LC3 II蛋白表达均显著上调(均为P<0.01),中药低剂量组HO-1、p62和LC3 II蛋白表达均上调(均为P<0.05),对照药物组HO-1和LC3 II蛋白表达均上调(均为P<0.05)。结论驻景丸加减方可激活Nrf2通路,上调下游靶基因酶HO-1、NQO-1表达,快速清除ROS、MDA;增强自噬,加快清除氧化损伤的细胞器,对干性AMD模型小鼠视网膜有保护作用。 展开更多
关键词 年龄相关性黄斑变性 驻景丸加减方 氧化损伤 Nrf2通路 自噬
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