目的检测肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的相关抗原,并予以验证。方法分别提取15例HCC组织及其癌旁组织总蛋白。Western blot分别检测各总蛋白与其HCC患者自体血清的杂交情况。双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE...目的检测肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的相关抗原,并予以验证。方法分别提取15例HCC组织及其癌旁组织总蛋白。Western blot分别检测各总蛋白与其HCC患者自体血清的杂交情况。双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)技术将15例混合总蛋白中的各蛋白进行分离与染色。图像分析法比对染色胶上HCC组织及其癌旁组织蛋白的表达差异,基质辅助激光解吸/电离飞行时间二级质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization-time-of-flight with two mass analyzers for tandem mass spectrometry,MALDI-TOF MS/MS)技术及生物信息学网络数据库分别对表达差异蛋白予以分析鉴定与检索匹配,免疫组织化学与Western blot分别检测该差异蛋白在人HCC组织及其癌旁组织中的变化情况。结果 2-DE染色胶图像分析比对结果显示,HCC及其癌旁组织蛋白表达差异斑点共90个,MALDI-TOF MS/MS与数据库对其中19个蛋白斑点分析鉴定与检索匹配发现15个蛋白表达上调,4个蛋白表达下调。免疫组织化学与Western blot检测结果显示,与对照比较,上调蛋白中的Dna J同源B亚家族成员11(dna J homolog subfamily B member 11,DNAJB11)在HCC组织中的表达明显增强,下调蛋白中的蛋白酶体亚基α3(proteasome subunit alpha type 3,PSMA3)在HCC组织中的表达则相反。结论人原发性肝癌相关抗原DNAJB11在HCC组织中的表达上调,PSMA3在HCC组织中的表达下调。展开更多
目的:研究泛素特异性蛋白酶35(ubiquitin-specific protease 35,USP35)对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(rheumatoid arthritis-fibroblast like synoviocytes,RA-FLS)铁死亡的作用及机制,加深对RA发病机制的理解,并为其治疗提供潜在的...目的:研究泛素特异性蛋白酶35(ubiquitin-specific protease 35,USP35)对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(rheumatoid arthritis-fibroblast like synoviocytes,RA-FLS)铁死亡的作用及机制,加深对RA发病机制的理解,并为其治疗提供潜在的标靶。方法:(1)体外培养RA-FLS,用慢病毒载体感染以构建稳定敲低USP35的细胞系(short hairpin ribonucleic acid of USP35,shUSP35)和其对照细胞系(negtive control of short hairpin ribonucleic acid,shNC),以及稳定过表达USP35的细胞系(overexpression of USP35,USP35 OE)和其对照细胞系(Vector)。为了探究USP35在铁死亡调控中的作用,使用1μmol/L依拉司亭(Erastin)诱导RA-FLS细胞构建铁死亡模型。将细胞分为6组,第一组是shNC细胞,第二组是用Erastin处理shNC细胞(shNC+Erastin),第三组是用Erastin处理shUSP35细胞(shUSP35+Erastin),第四组是Vector细胞,第五组是用Erastin处理Vector细胞(Vector+Erastin),第六组是用Erastin处理USP35 OE细胞(USP35 OE+Erastin)。(2)采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK8)检测细胞活力;(3)分别使用活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测试剂盒、丙二醛(malondialdehyde,MDA)检测试剂盒、谷胱甘肽(glutathione,GSH)和氧化型谷胱甘肽(glutathione sulfide,GSSG)检测试剂盒、亚铁离子含量检测试剂盒检测细胞中ROS、MDA、Fe ^(2+)的含量以及GSH/GSSG比值;(4)采用蛋白免疫印迹实验(Western blotting)检测溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)蛋白的表达水平。结果:(1)与shNC+Erastin组相比,shUSP35+Erastin组的RA-FLS细胞活力显著降低(P<0.001),而与Vector+Erastin组相比,USP35 OE+Erastin组的细胞活力显著升高(P<0.001),表明USP35可显著缓解Erastin对RA-FLS细胞活力的抑制作用。(2)与shNC+Erastin组相比,shUSP35+Erastin组细胞的ROS(P<0.001)、MDA(P<0.05)和Fe ^(2+)水平(P<0.001)显著升高,GSH/GSSG比值显著增加(P<0.05);而与Vector+Erastin组相比,USP35OE+Erastin组细胞的ROS(P<0.001)、MDA(P<0.05)和Fe ^(2+)水平(P<0.05)显著降低,GSH/GSSG比值显著下降(P<0.05),表明USP35可显著抑制Erastin诱导的RA-FLS细胞氧化应激和脂质过氧化。(3)在Erastin诱导的RA-FLS中,USP35的表达与SLC7A11和GPX4蛋白水平呈正相关。结论:USP35抑制RA-FLS的铁死亡,可能与增加SLC7A11和GPX4表达相关。展开更多
文摘目的检测肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的相关抗原,并予以验证。方法分别提取15例HCC组织及其癌旁组织总蛋白。Western blot分别检测各总蛋白与其HCC患者自体血清的杂交情况。双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)技术将15例混合总蛋白中的各蛋白进行分离与染色。图像分析法比对染色胶上HCC组织及其癌旁组织蛋白的表达差异,基质辅助激光解吸/电离飞行时间二级质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization-time-of-flight with two mass analyzers for tandem mass spectrometry,MALDI-TOF MS/MS)技术及生物信息学网络数据库分别对表达差异蛋白予以分析鉴定与检索匹配,免疫组织化学与Western blot分别检测该差异蛋白在人HCC组织及其癌旁组织中的变化情况。结果 2-DE染色胶图像分析比对结果显示,HCC及其癌旁组织蛋白表达差异斑点共90个,MALDI-TOF MS/MS与数据库对其中19个蛋白斑点分析鉴定与检索匹配发现15个蛋白表达上调,4个蛋白表达下调。免疫组织化学与Western blot检测结果显示,与对照比较,上调蛋白中的Dna J同源B亚家族成员11(dna J homolog subfamily B member 11,DNAJB11)在HCC组织中的表达明显增强,下调蛋白中的蛋白酶体亚基α3(proteasome subunit alpha type 3,PSMA3)在HCC组织中的表达则相反。结论人原发性肝癌相关抗原DNAJB11在HCC组织中的表达上调,PSMA3在HCC组织中的表达下调。
文摘目的:研究泛素特异性蛋白酶35(ubiquitin-specific protease 35,USP35)对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(rheumatoid arthritis-fibroblast like synoviocytes,RA-FLS)铁死亡的作用及机制,加深对RA发病机制的理解,并为其治疗提供潜在的标靶。方法:(1)体外培养RA-FLS,用慢病毒载体感染以构建稳定敲低USP35的细胞系(short hairpin ribonucleic acid of USP35,shUSP35)和其对照细胞系(negtive control of short hairpin ribonucleic acid,shNC),以及稳定过表达USP35的细胞系(overexpression of USP35,USP35 OE)和其对照细胞系(Vector)。为了探究USP35在铁死亡调控中的作用,使用1μmol/L依拉司亭(Erastin)诱导RA-FLS细胞构建铁死亡模型。将细胞分为6组,第一组是shNC细胞,第二组是用Erastin处理shNC细胞(shNC+Erastin),第三组是用Erastin处理shUSP35细胞(shUSP35+Erastin),第四组是Vector细胞,第五组是用Erastin处理Vector细胞(Vector+Erastin),第六组是用Erastin处理USP35 OE细胞(USP35 OE+Erastin)。(2)采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK8)检测细胞活力;(3)分别使用活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测试剂盒、丙二醛(malondialdehyde,MDA)检测试剂盒、谷胱甘肽(glutathione,GSH)和氧化型谷胱甘肽(glutathione sulfide,GSSG)检测试剂盒、亚铁离子含量检测试剂盒检测细胞中ROS、MDA、Fe ^(2+)的含量以及GSH/GSSG比值;(4)采用蛋白免疫印迹实验(Western blotting)检测溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)蛋白的表达水平。结果:(1)与shNC+Erastin组相比,shUSP35+Erastin组的RA-FLS细胞活力显著降低(P<0.001),而与Vector+Erastin组相比,USP35 OE+Erastin组的细胞活力显著升高(P<0.001),表明USP35可显著缓解Erastin对RA-FLS细胞活力的抑制作用。(2)与shNC+Erastin组相比,shUSP35+Erastin组细胞的ROS(P<0.001)、MDA(P<0.05)和Fe ^(2+)水平(P<0.001)显著升高,GSH/GSSG比值显著增加(P<0.05);而与Vector+Erastin组相比,USP35OE+Erastin组细胞的ROS(P<0.001)、MDA(P<0.05)和Fe ^(2+)水平(P<0.05)显著降低,GSH/GSSG比值显著下降(P<0.05),表明USP35可显著抑制Erastin诱导的RA-FLS细胞氧化应激和脂质过氧化。(3)在Erastin诱导的RA-FLS中,USP35的表达与SLC7A11和GPX4蛋白水平呈正相关。结论:USP35抑制RA-FLS的铁死亡,可能与增加SLC7A11和GPX4表达相关。
