河南省马铃薯Y病毒的分子检测与鉴定 被引量：9

1

作者 吴兴泉 陈士华 +2 位作者 陈涛 薛珍 娄玉华 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2007年第10期64-66,共3页

利用RT-PCR技术对郑州市和信阳市的马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)进行了鉴定。依据PVY p1基因序列设计合成1对引物,以带毒的马铃薯叶片总RNA为模板,RT-PCR扩增得到0.58kb的目的DNA片段,而健康对照无此片段。对PCR产物进行序列测定,Bl... 利用RT-PCR技术对郑州市和信阳市的马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)进行了鉴定。依据PVY p1基因序列设计合成1对引物,以带毒的马铃薯叶片总RNA为模板,RT-PCR扩增得到0.58kb的目的DNA片段,而健康对照无此片段。对PCR产物进行序列测定,Blast分析表明,该DNA序列与PVY N:O株系p1基因序列相似性可达99%,证明所得DNA片段确为PVY p1基因,从而建立了PVY的RT-PCR检测方法。在此基础上,从节省检测时间、优化反应程序及反应体系等方面进行了改进。 展开更多

关键词 河南省 马铃薯y病毒 RT-PCR 检测与鉴定

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河北省马铃薯Y病毒株系分子鉴定及其RT-PCR检测 被引量：12

2

作者 吴志明 时星 +2 位作者 谢晓亮 温春秀 张庆良 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期54-59,共6页

根据马铃薯Y病毒(PotatovirusY,PVY)的外壳蛋白基因序列,设计合成了一对寡核苷酸引物,从感染PVY的马铃薯田间病叶组织中提取出病毒的RNA,进行cDNA合成及PCR扩增,得到一条长度约800bp的特异PCR扩增产物,与理论设计的基因片段大小一致,本... 根据马铃薯Y病毒(PotatovirusY,PVY)的外壳蛋白基因序列,设计合成了一对寡核苷酸引物,从感染PVY的马铃薯田间病叶组织中提取出病毒的RNA,进行cDNA合成及PCR扩增,得到一条长度约800bp的特异PCR扩增产物,与理论设计的基因片段大小一致,本试验建立了快速、灵敏、简便的PVY检测的方法。将RT-PCR扩增产物克隆到质粒pGEM-T上,并进行了序列分析。结果表明,克隆的cDNA片段由801个核苷酸组成,编码267个氨基酸组成的理论分子量为29kD蛋白,与PVY外壳蛋白的大小一致,与基因库登记的代表性株系相比,它们之间的核苷酸序列同源性为89 6%～98 8%,氨基酸序列的同源性为93 3%～98 5%,说明PVYCP基因具有高度的保守性(记为PVY-HBEI),与国内报道的PVY-CHU、PVY-ZHJ和PVY-ZHOU株系的氨基酸序列同源性分别为96 6%、98 5%和97 8%,与PVYN和PVYO株系的氨基酸序列同源性分别为93 6%和97 8%,从分子水平上确定PVY-HBEI归属于普通株系(PVYO株系)。 展开更多

关键词 马铃薯y病毒 反转录-聚合酶链式反应 病毒检测 外壳蛋白基因(CP) 序列分析 株系鉴定

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基因芯片技术检测黄瓜花叶病毒、烟草花叶病毒和马铃薯Y病毒 被引量：19

3

作者 贾慧 王艳辉 +2 位作者 王进忠 王升启 董金皋 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2011年第1期83-86,共4页

黄瓜花叶病毒、烟草花叶病毒和马铃薯Y病毒是世界性分布的重要植物病毒,对农业生产危害较大。农作物感病多为复合侵染,症状表现较为复杂,急需建立快速、准确、能够一次检测多种病毒的检测方法。本研究根据3种病毒的外壳蛋白基因序列,设... 黄瓜花叶病毒、烟草花叶病毒和马铃薯Y病毒是世界性分布的重要植物病毒,对农业生产危害较大。农作物感病多为复合侵染,症状表现较为复杂,急需建立快速、准确、能够一次检测多种病毒的检测方法。本研究根据3种病毒的外壳蛋白基因序列,设计引物和探针,制备基因芯片;用Cy3标记下游引物,RT-PCR扩增产物与芯片杂交,荧光扫描仪检测并分析信号。结果表明,该芯片可以从病毒侵染样本中检测到特异性识别信号,检测灵敏度比RT-PCR高10～100倍,该技术能对植物病毒做出快速、准确的检测。 展开更多

关键词 黄瓜花叶病毒 烟草花叶病毒 马铃薯y病毒 基因芯片 检测

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马铃薯Y病毒的RT-PCR检测 被引量：30

4

作者 李浩戈 吴元华 赵秀香 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 1999年第3期244-246,共3页

通过两种方法提取了烟草病叶中PVY病毒的RNA，然后针对PVY^N的CP基因序列，设计合成了一对特异性引物，运用反转录PCR技术对提取的PVY－RNA进行了体外扩增，结果得到与预期大小相一致的780bp片段，而对照未得到任何产物，从而建立了运... 通过两种方法提取了烟草病叶中PVY病毒的RNA，然后针对PVY^N的CP基因序列，设计合成了一对特异性引物，运用反转录PCR技术对提取的PVY－RNA进行了体外扩增，结果得到与预期大小相一致的780bp片段，而对照未得到任何产物，从而建立了运用RT－PCR手段检测植物中PVY的又一有效途径，并运用此方法对东北三省部分地区马铃薯种薯中PVY的带毒情况进行了检测。 展开更多

关键词 反转录PCR 马铃薯 y病毒 检测

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马铃薯野生近缘种抗PVY种质资源分子标记辅助筛选 被引量：1

5

作者 于韶玮 张剑峰 +1 位作者 杨元军 迟胜起 《山东农业科学》 北大核心 2024年第2期23-29,共7页

为拓宽四倍体(2n=4x=48)马铃薯栽培种抗马铃薯Y病毒(PVY)的遗传背景,对56份马铃薯野生近缘种进行了PVY抗性分子标记(RYSC3、YES3-3A和Ry364)辅助筛选。PCR检测结果显示,含有Ry_(adg)抗性基因(源自Solanum tuberosum ssp.andigena)分子标... 为拓宽四倍体(2n=4x=48)马铃薯栽培种抗马铃薯Y病毒(PVY)的遗传背景,对56份马铃薯野生近缘种进行了PVY抗性分子标记(RYSC3、YES3-3A和Ry364)辅助筛选。PCR检测结果显示,含有Ry_(adg)抗性基因(源自Solanum tuberosum ssp.andigena)分子标记RYSC3的材料有13份,其中二倍体(2n=2x=24)3份,四倍体6份,六倍体(2n=6x=72)4份;含有Ry_(sto)抗性基因(源自S.stoloniferum Schlechtdal)分子标记YES3-3A的材料有4份,其中二倍体1份,四倍体2份,染色体倍性未确定材料1份;含有Ry_(chc)抗性基因(源自S.chacoense Bitter)分子标记Ry364的材料有23份,其中二倍体6份,四倍体4份,六倍体13份。含有RYSC3、YES3-3A和Ry364中任意2种标记的材料有7份,同时含有3种标记的材料仅有OCH 14180a(S.stoloniferum Schlechtdal)。这些种质资源可用于马铃薯抗病毒品种选育、种质创新与基因挖掘。 展开更多

关键词 马铃薯野生近缘种 马铃薯y病毒 病毒抗性 分子标记辅助选择

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烟草上马铃薯Y病毒的提纯与检测 被引量：5

6

作者 郭兴启 吕士恩 +2 位作者 朱汉城 王智发 陈瑞泰 《中国烟草科学》 CSCD 1999年第2期5-7,共3页

本文是关于制备马铃薯Ｙ病毒抗血清及ＥＬＩＳＡ检测技术的实验结果。采用垫层差速离心、蔗糖密度梯度离心提纯ＰＶＹ，纯化的ＰＶＹＯＤ２６０／ＯＤ２８０为１．５６，将提纯的病毒制品免疫家兔，制备抗血清，经微量沉淀及环状沉淀试... 本文是关于制备马铃薯Ｙ病毒抗血清及ＥＬＩＳＡ检测技术的实验结果。采用垫层差速离心、蔗糖密度梯度离心提纯ＰＶＹ，纯化的ＰＶＹＯＤ２６０／ＯＤ２８０为１．５６，将提纯的病毒制品免疫家兔，制备抗血清，经微量沉淀及环状沉淀试验，用提纯病毒测定抗血清的效价均为１／２０４８，并对制备的ＰＶＹ—ＩｇＧ作灵敏度及特异性测定。 展开更多

关键词 马铃薯y病毒 提纯 ELISA 检测 烟草 病毒

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马铃薯X病毒的分子鉴定与检测技术 被引量：13

7

作者 吴兴泉 陈士华 谢联辉 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2006年第2期72-75,共4页

为建立快速、灵敏、特异的马铃薯X病毒(PVX)分子鉴定与检测技术,利用反转录—聚合酶链式反应(RT—PCR)技术扩增得到了PVXcp基因,并进行序列测定,同时采用RT—PCR方法和核酸斑点杂交(NASH)方法对PVX进行了分子检测。结果表明:利用PVXcp... 为建立快速、灵敏、特异的马铃薯X病毒(PVX)分子鉴定与检测技术,利用反转录—聚合酶链式反应(RT—PCR)技术扩增得到了PVXcp基因,并进行序列测定,同时采用RT—PCR方法和核酸斑点杂交(NASH)方法对PVX进行了分子检测。结果表明:利用PVXcp基因序列及蛋白氨基酸序列分析可准确鉴定PVX,并可分析各分离物间的分子差异。利用PVX特异性引物和DIG标记的PVXcp基因采用RT-PCR技术和NASH技术可对PVX进行准确的检测,其特异性及灵敏度均优于传统方法。 展开更多

关键词 马铃薯 X病毒 分子鉴定 分子检测

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马铃薯Y病毒科分子进化研究进展 被引量：8

8

作者 贺振 陈春峰 +1 位作者 张志想 李世访 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期13-22,共10页

马铃薯Y病毒科Potyviridae包括许多重要的植物病毒。本文综述了近年来该科马铃薯Y病毒属Potyvirus、甘薯病毒属Ipomovirus和禾草病毒属Poacevirus内20余种病毒的分子进化研究现状,从突变、重组、漂移、选择和迁移5个方面探讨了影响该科... 马铃薯Y病毒科Potyviridae包括许多重要的植物病毒。本文综述了近年来该科马铃薯Y病毒属Potyvirus、甘薯病毒属Ipomovirus和禾草病毒属Poacevirus内20余种病毒的分子进化研究现状,从突变、重组、漂移、选择和迁移5个方面探讨了影响该科一些病毒分子进化的因素,并展望了未来的研究方向,以期为该科病毒的有效防控提供理论依据。 展开更多

关键词 马铃薯y病毒科 分子进化

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马铃薯Y病毒云南昭通烟草分离物的检测及年度间差异比较 被引量：4

9

作者 卢训 丁铭 +4 位作者 方琦 黄韡 游堂贵 秦西云 张仲凯 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期56-60,共5页

利用DAS-ELISA检测试剂盒检测昭通烟草脉斑病样品,结果表明存在马铃薯Y病毒O株系和马铃薯Y病毒N株系两个不同株系病毒。利用Sprimer和M4引物扩增、克隆、测序,得到长度为1 771bp目的片段,该片段包含病毒的外壳蛋白基因序列、3′UTR序列... 利用DAS-ELISA检测试剂盒检测昭通烟草脉斑病样品,结果表明存在马铃薯Y病毒O株系和马铃薯Y病毒N株系两个不同株系病毒。利用Sprimer和M4引物扩增、克隆、测序,得到长度为1 771bp目的片段,该片段包含病毒的外壳蛋白基因序列、3′UTR序列以及部分Nib基因序列;序列分析表明与湖南HN-2分离物(GenBankNo.GQ200836)和美国NE-11分离物(GenBank No.DQ157180)核苷酸序列相似性均为98%,系统进化分析表明其具有较近的亲缘关系。 展开更多

关键词 马铃薯y病毒 检测 变异分析

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分子生物学技术在马铃薯病毒检测中的应用 被引量：13

10

作者 吴兴泉 陈士华 +2 位作者 吴祖建 林奇英 谢联辉 《中国马铃薯》 2003年第3期175-179,共5页

直接应用于马铃薯病毒检测的分子生物学技术主要有 :RT PCR检测技术、指示分子 NASBA检测技术、核酸杂交检测技术三大类 ,以RT PCR技术应用最为广泛。另外病毒外壳蛋白基因的克隆与表达、DNA介导的抗体制备及病毒单链抗体片段筛选等技... 直接应用于马铃薯病毒检测的分子生物学技术主要有 :RT PCR检测技术、指示分子 NASBA检测技术、核酸杂交检测技术三大类 ,以RT PCR技术应用最为广泛。另外病毒外壳蛋白基因的克隆与表达、DNA介导的抗体制备及病毒单链抗体片段筛选等技术在马铃薯病毒免疫学检测技术中也有成功的应用 ,并解决了传统免疫学方法难以解决的抗原制备问题 ,使后者更具应用前景。 展开更多

关键词 分子生物学技术 马铃薯 病毒检测 应用 RT-PCR 核酸杂交 指示分子-NASBA

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马铃薯Y病毒的株系种类、分子特征及鉴定方法研究进展 被引量：2

11

作者 吴兴泉 李月 +2 位作者 孙强 李萌萌 王梦科 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2015年第3期5-8,共4页

马铃薯Y病毒(PVY)株系分化现象明显,具有多个株系类型。随着分子生物学技术和免疫学技术逐渐被引入PVY的株系鉴定中,产生了一系列的株系鉴定方法。为此,对PVY的主要株系、亚株系的种类及分类依据、分子特征以及近年来应用于PVY株系鉴定... 马铃薯Y病毒(PVY)株系分化现象明显,具有多个株系类型。随着分子生物学技术和免疫学技术逐渐被引入PVY的株系鉴定中,产生了一系列的株系鉴定方法。为此,对PVY的主要株系、亚株系的种类及分类依据、分子特征以及近年来应用于PVY株系鉴定的传统生物学方法、分子生物学方法、免疫学方法等进行了综述。 展开更多

关键词 马铃薯y病毒 株系 分子特征 鉴定

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陕北地区马铃薯Y病毒的RT-PCR检测及其序列分析 被引量：4

12

作者 冯光惠 杜虎平 +1 位作者 李夏隆 亢福仁 《山西农业科学》 2014年第9期941-944,967,共5页

以陕北地区8个县（区）种植2-3代疑似带毒的马铃薯叶片为材料,Trizol法提取马铃薯叶片总RNA,以已公布的马铃薯Y病毒外壳蛋白（coat protein,CP）基因序列设计1对特异引物,反转录合成cDNA,RT-PCR扩增目的 DNA片段,1.5%的琼脂糖凝胶电泳... 以陕北地区8个县（区）种植2-3代疑似带毒的马铃薯叶片为材料,Trizol法提取马铃薯叶片总RNA,以已公布的马铃薯Y病毒外壳蛋白（coat protein,CP）基因序列设计1对特异引物,反转录合成cDNA,RT-PCR扩增目的 DNA片段,1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。回收纯化CP基因片段并进行克隆和测序,采用DNAstar软件分析序列一致性。结果显示,所有马铃薯叶片中均扩增到与预期大小一致的、长度为400 bp的目的片段,表明这些马铃薯均感染了Y病毒;陕北8个县（区）马铃薯Y病毒CP基因与国内外其他地区12个样品之间的序列一致性为88.4%-99.8%,表明马铃薯Y病毒的CP基因序列比较保守,不易发生变异。RT-PCR方法可快速、准确地检测马铃薯Y病毒,从而为马铃薯茎尖剥离脱毒生产脱毒种苗（薯）提供依据。 展开更多

关键词 马铃薯y病毒 CP基因 RT-PCR检测 序列分析

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宁夏马铃薯Y病毒(PVY)外壳蛋白基因分子变异分析 被引量：2

13

作者 陈晓军 樊云芳 +3 位作者 王敬东 张丽 石磊 宋玉霞 《湖北农业科学》 北大核心 2014年第22期5558-5561,共4页

马铃薯(Solanum tuberosum)Y病毒(Potato virus Y,PVY)是危害我国马铃薯的主要病毒之一。利用马铃薯Y病毒通用ELISA试剂盒确定所携带Y病毒的试验材料,设计了特异性引物通过反转录PCR获得PVY CP基因序列,通过克隆PVY衣壳蛋白基因(Coat pr... 马铃薯(Solanum tuberosum)Y病毒(Potato virus Y,PVY)是危害我国马铃薯的主要病毒之一。利用马铃薯Y病毒通用ELISA试剂盒确定所携带Y病毒的试验材料,设计了特异性引物通过反转录PCR获得PVY CP基因序列,通过克隆PVY衣壳蛋白基因(Coat protein,CP)序列分析其进化与变异类型。结果表明,分离得到11株病毒,依据其CP序列特性分为4类;宁夏地区主要流行的病毒类型为PVYO进化分枝,同时也可能出现了具有高致病性的PVYNTN新株系,占到被检出病毒分离株的9.1%。结果揭示了宁夏地区PVY的进化与变异类型,有助于针对性地防控PVY。 展开更多

关键词 马铃薯(Solanum tuberosum) 马铃薯y病毒 分子变异

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侵染甘薯的马铃薯Y属病毒及其分子生物学研究进展 被引量：3

14

作者 付振艳 袁虹霞 +2 位作者 陈志申 孙淑君 张振臣 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期221-224,共4页

对甘薯羽状斑驳病毒、甘薯病毒Y、甘薯病毒G、甘薯潜隐病毒、甘薯轻型斑点病毒、甘薯脉花叶病毒6种侵染甘薯的马铃薯Y属(Potyvirus)病毒及其分子生物学进行了综述,并对甘薯病毒的鉴定及甘薯脱毒种苗的检测进行了展望.

关键词 马铃薯y属(Potyvirus)病毒 分子生物学 研究进展

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马铃薯病毒分子检测技术研究进展 被引量：6

15

作者 王文重 张抒 于德才 《中国马铃薯》 2009年第1期40-43,共4页

对种子、苗木和无性繁殖材料以及在发病早期对植株进行快速准确地检测尤为重要。目前国内外马铃薯病毒分子检测技术的研究,主要涉及以蛋白质和核酸为基础的检测方法。以蛋白质为基础的检测方法主要根据免疫学原理,包括酶联免疫吸附反应... 对种子、苗木和无性繁殖材料以及在发病早期对植株进行快速准确地检测尤为重要。目前国内外马铃薯病毒分子检测技术的研究,主要涉及以蛋白质和核酸为基础的检测方法。以蛋白质为基础的检测方法主要根据免疫学原理,包括酶联免疫吸附反应测定法、直接组织斑免疫测定法和胶体金免疫层析法。以核酸为基础衍生的检测方法较多,主要有RT-PCR检测技术、免疫捕捉-RT-PCR检测技术、核酸杂交检测技术、指示分子NAS-BA技术、实时荧光定量PCR技术和基因芯片技术。 展开更多

关键词 马铃薯 病毒 分子检测

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烟草上马铃薯Y病毒的RT-PCR检测 被引量：2

16

作者 王秀芳 任广伟 王凤龙 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 2003年第2期28-30,共3页

本文根据已报道的 PVY CP基因序列 ,设计合成了 2套扩增 PVY CP基因全序列和中间部分序列的寡核苷酸引物 ,用两套程序分别对马铃薯 Y病毒普通株系 (PVYO)和马铃薯 Y病毒坏死株系 (PVYN) CP基因进行 RT- PCR扩增 ,结果分别得到了与预期... 本文根据已报道的 PVY CP基因序列 ,设计合成了 2套扩增 PVY CP基因全序列和中间部分序列的寡核苷酸引物 ,用两套程序分别对马铃薯 Y病毒普通株系 (PVYO)和马铃薯 Y病毒坏死株系 (PVYN) CP基因进行 RT- PCR扩增 ,结果分别得到了与预期大小一致的 80 4和 30 1bp片段 ,健康植株对照中未扩增到任何产物 ,建立了 RT- PCR检测烟草上马铃薯 Y病毒的程序。 展开更多

关键词 马铃薯y病毒(PVy) RT—PCR 检测

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马铃薯病毒病分子检测技术研究进展 被引量：7

17

作者 袁青 殷幼平 王中康 《中国马铃薯》 2003年第1期33-36,共4页

快速、准确地定性或定量检测马铃薯植株中病毒、类病毒的种类和数量是有效地控制马铃薯病毒病害的需要 ,也是马铃薯种薯品质的重要保证。

关键词 病毒病 分子检测技术 马铃薯 病毒 RT-PCR 核酸斑点杂交技术 聚合酶链式反应

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NCM-ELISA检测马铃薯Y病毒(PVY)技术的研究及应用 被引量：3

18

作者 吕典秋 李学湛 +2 位作者 吕文河 于德才 李辉 《中国马铃薯》 2006年第6期339-342,共4页

血清学方法是病毒检测的主要手段。本试验通过对马铃薯Y病毒(PVY)的提纯,免疫家兔制备PVY抗血清,并提取PYV免疫球蛋白IgG作为NCM-ELISA反应为一抗,以市售羊抗兔抗血清为二抗,在硝酸纤维素膜(NCM)上进行NCM-ELISA反应检测PVY,建立PVY NCM... 血清学方法是病毒检测的主要手段。本试验通过对马铃薯Y病毒(PVY)的提纯,免疫家兔制备PVY抗血清,并提取PYV免疫球蛋白IgG作为NCM-ELISA反应为一抗,以市售羊抗兔抗血清为二抗,在硝酸纤维素膜(NCM)上进行NCM-ELISA反应检测PVY,建立PVY NCM-ELISA检测反应体系。试验结果显示,NCM-ELISA具有反应特异性强,灵敏度高的优点,检测植物叶片样品的最高稀释度可达到1:250。通过对田间40份样品的NCM-ELISA和DAS-ELISA检测比较,其检测结果吻合率达到100%。由于NCM-ELISA方法可以将样品点在硝酸纤维素膜上,并且可贮存几个星期或将膜送到其他实验室进行检测,因此具有操作简单,使用方便,检测成本低等优点。 展开更多

关键词 硝酸纤维素膜-酶联免疫分析 马铃薯y病毒 检测

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马铃薯Y病毒属病毒与植物互作的分子生物学 被引量：1

19

作者 王秀芳 郭兴启 +1 位作者 孟祥兵 温孚江 《山东农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2002年第3期386-390,共5页

马铃薯Y病毒属 (Potyvirus)是植物病毒中最大的属 ,其基因组为一单链正义RNA ,只包含一个开放阅读框架。基因表达的策略为先将基因组的开放阅读框架翻译成一大的多聚肽 ,再由病毒编码的蛋白酶将其切割成各个小的肽段。表达的产物在病毒... 马铃薯Y病毒属 (Potyvirus)是植物病毒中最大的属 ,其基因组为一单链正义RNA ,只包含一个开放阅读框架。基因表达的策略为先将基因组的开放阅读框架翻译成一大的多聚肽 ,再由病毒编码的蛋白酶将其切割成各个小的肽段。表达的产物在病毒的系统侵染、传播、症状表达中起不同的作用。本文综述了该属病毒与寄主植物之间互作的分子生物学基础研究进展 ,并在此基础上就植物对该属病毒的抗病性等方面的研究进展进行了讨论。 展开更多

关键词 马铃薯 y病毒属病毒 植物互作 分子生物学 系统侵染 抗性

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马铃薯Y病毒病的检测技术及防治策略 被引量：7

20

作者 贾霁 肖启明 +3 位作者 刘剑峰 周志成 刘双清 唐前君 《园艺与种苗》 CAS 2013年第1期1-5,47,共6页

从简述烟草马铃薯Y病毒病的发生及侵染规律出发,总结了指示植物法、酶联免疫吸附法、聚合酶链式反应、核酸杂交及基因芯片检测技术等几种烟草马铃薯Y病毒的检测技术,提出了烟草马铃薯Y病毒病以预防为主、综合防治的防治策略。

关键词 马铃薯y病毒 分子检测技术 PCR ELISA 防治策略

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