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马γ-干扰素成熟蛋白基因在大肠埃希氏菌中表达及其多克隆抗体制备
被引量：
7
1
作者
白宇
童铁钢
+5 位作者
刘光亮
肖一红
王群
徐树兰
张维军
吴东来
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第11期878-882,共5页
采用RT-PCR从ConA刺激的马外周血单核细胞(PBMC)中扩增获得含信号肽的马γ-干扰素(Equine interferon-γ,EIFN-γ)基因,将其克隆至载体pCR2.1-TOPO中。通过PCR方法从重组质粒(pCR-EIFN-γ)中扩增马干扰素成熟蛋白(Mature EIFN-γ,reEIFN...
采用RT-PCR从ConA刺激的马外周血单核细胞(PBMC)中扩增获得含信号肽的马γ-干扰素(Equine interferon-γ,EIFN-γ)基因,将其克隆至载体pCR2.1-TOPO中。通过PCR方法从重组质粒(pCR-EIFN-γ)中扩增马干扰素成熟蛋白(Mature EIFN-γ,reEIFN-γ)基因,并将其亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)。重组子经测序鉴定正确后转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,对其产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,将纯化后的表达产物免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。结果表明,mEIFN-γ基因全长为441bD,含一个开放阅读框,编码146个氨基酸的成熟蛋白;对其表达产物以可溶性和包涵体两种形式存在,重组蛋白相对分子量约为18Ku,且具有免疫反应活性。mEIFN-γ基因在大肠杆菌中高效表达并在非变性和变性条件下,采用Ni^+亲和层析纯化方法均可获得高纯度的重组马γ-干扰素制备的多克隆抗体,为建立马γ-干扰素检测方法、监测机体免疫状态和研究机体免疫机制奠定了基础。
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关键词
马γ-干扰素
表达
纯化
多克隆抗体
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职称材料
马γ-干扰素双抗体夹心ELISA检测方法的建立
被引量：
2
2
作者
白宇
童铁钢
+4 位作者
张维军
徐树兰
王群
刘光亮
吴东来
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第5期464-466,共3页
目的:建立检测马γ-干扰素的双抗体夹心ELISA,为马传染病的免疫学研究提供新方法。方法:将识别不同表位的抗马γ-干扰素的2株单克隆抗体(mAb,A5和SB10)纯化后,利用生物素标记试剂盒对其中1株纯化的mAb(SB10)进行标记,通过对重组马IFN-...
目的:建立检测马γ-干扰素的双抗体夹心ELISA,为马传染病的免疫学研究提供新方法。方法:将识别不同表位的抗马γ-干扰素的2株单克隆抗体(mAb,A5和SB10)纯化后,利用生物素标记试剂盒对其中1株纯化的mAb(SB10)进行标记,通过对重组马IFN-γ进行ELISA检测来建立马γ-干扰素双抗体夹心ELISA。结果:经过方阵滴定实验确定捕获抗体的最佳浓度为1mg/L,检测抗体的工作效价为1∶1000。利用建立的方法对不同稀释度的重组马γ-干扰素和丝裂原刺激的马外周血单核细胞培养上清进行检测。结论:此方法检测敏感度达到1μg/L,特异性良好,为马的细胞免疫学研究提供了方法,并为建立马γ-干扰素ELISPOT检测方法奠定了基础。
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关键词
马γ-干扰素
夹心ELISA
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职称材料
题名
马γ-干扰素成熟蛋白基因在大肠埃希氏菌中表达及其多克隆抗体制备
被引量：
7
1
作者
白宇
童铁钢
刘光亮
肖一红
王群
徐树兰
张维军
吴东来
机构
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第11期878-882,共5页
基金
黑龙江省自然科学基金项目(ZJN-0602-01)
文摘
采用RT-PCR从ConA刺激的马外周血单核细胞(PBMC)中扩增获得含信号肽的马γ-干扰素(Equine interferon-γ,EIFN-γ)基因,将其克隆至载体pCR2.1-TOPO中。通过PCR方法从重组质粒(pCR-EIFN-γ)中扩增马干扰素成熟蛋白(Mature EIFN-γ,reEIFN-γ)基因,并将其亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)。重组子经测序鉴定正确后转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,对其产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,将纯化后的表达产物免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。结果表明,mEIFN-γ基因全长为441bD,含一个开放阅读框,编码146个氨基酸的成熟蛋白;对其表达产物以可溶性和包涵体两种形式存在,重组蛋白相对分子量约为18Ku,且具有免疫反应活性。mEIFN-γ基因在大肠杆菌中高效表达并在非变性和变性条件下,采用Ni^+亲和层析纯化方法均可获得高纯度的重组马γ-干扰素制备的多克隆抗体,为建立马γ-干扰素检测方法、监测机体免疫状态和研究机体免疫机制奠定了基础。
关键词
马γ-干扰素
表达
纯化
多克隆抗体
Keywords
equine IFN
-
gamma
expression
purification
polycolonal antibody
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
马γ-干扰素双抗体夹心ELISA检测方法的建立
被引量：
2
2
作者
白宇
童铁钢
张维军
徐树兰
王群
刘光亮
吴东来
机构
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第5期464-466,共3页
基金
国家高技术研究发展计划(863)资助项目(2006AA10A203)
黑龙江省自然科学基金重点资助项目(ZJN-0602-01)
文摘
目的:建立检测马γ-干扰素的双抗体夹心ELISA,为马传染病的免疫学研究提供新方法。方法:将识别不同表位的抗马γ-干扰素的2株单克隆抗体(mAb,A5和SB10)纯化后,利用生物素标记试剂盒对其中1株纯化的mAb(SB10)进行标记,通过对重组马IFN-γ进行ELISA检测来建立马γ-干扰素双抗体夹心ELISA。结果:经过方阵滴定实验确定捕获抗体的最佳浓度为1mg/L,检测抗体的工作效价为1∶1000。利用建立的方法对不同稀释度的重组马γ-干扰素和丝裂原刺激的马外周血单核细胞培养上清进行检测。结论:此方法检测敏感度达到1μg/L,特异性良好,为马的细胞免疫学研究提供了方法,并为建立马γ-干扰素ELISPOT检测方法奠定了基础。
关键词
马γ-干扰素
夹心ELISA
Keywords
equine IFN
-
γ
sandwich ELISA
分类号
R392.33 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
马γ-干扰素成熟蛋白基因在大肠埃希氏菌中表达及其多克隆抗体制备
白宇
童铁钢
刘光亮
肖一红
王群
徐树兰
张维军
吴东来
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
7
在线阅读
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职称材料
2
马γ-干扰素双抗体夹心ELISA检测方法的建立
白宇
童铁钢
张维军
徐树兰
王群
刘光亮
吴东来
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008
2
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