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香蕉线条病毒多重免疫捕获PCR方法的建立及应用
1
作者
卢咏思
刘润沛
饶雪琴
《华中农业大学学报》
北大核心
2025年第1期168-173,共6页
为提高复合感染香蕉的香蕉线条病毒(banana streak virus,BSV)的诊断效率,保障香蕉产业的健康发展,设计基于香蕉线条病毒OL(banana streak OL virus,BSOLV)、香蕉线条病毒GF(banana streak GF virus,BSGFV)的外壳蛋白(coat protein,CP)...
为提高复合感染香蕉的香蕉线条病毒(banana streak virus,BSV)的诊断效率,保障香蕉产业的健康发展,设计基于香蕉线条病毒OL(banana streak OL virus,BSOLV)、香蕉线条病毒GF(banana streak GF virus,BSGFV)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因和香蕉线条病毒IM(banana streak IM virus,BSIMV)的RNase H基因保守序列的特异引物,利用BSV多克隆抗血清捕获病毒为模板,通过对引物浓度、退火温度等条件的优化,建立能够同步检测BSOLV、BSGFV、BSIMV的多重免疫捕获PCR方法。研究结果显示,建成的最优体系为BSOLV、BSGFV、BSIMV上下游引物终浓度(μmol/L)比例0.5∶0.5∶0.5,退火温度为63℃。利用该多重免疫捕获PCR方法可以从1 mg/mL的香蕉粗提液中分别检测出BSOLV、BSGFV和BSIMV。所建立的多重免疫捕获PCR方法与引起相似症状的黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)无交叉反应。对15份田间香蕉样品进行检测,能够明显区分出复合侵染的样品,经测序验证,BSOLV、BSGFV和BSIMV的扩增产物与GenBank相应病毒同源率分别在94%以上。表明该多重免疫捕获PCR方法具有较高的敏感性和特异性,可应用于香蕉种苗以及田间香蕉样品中3种BSV的检测。
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关键词
香蕉
香蕉线条病毒
多重免疫捕获PCR
复合感染
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职称材料
香蕉线条病毒ORF I基因的原核表达及抗体制备
被引量：
2
2
作者
何云蔚
陈秀
+3 位作者
阮小蕾
沈文锦
刘福秀
李华平
《华南农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第3期18-21,共4页
利用PCR方法从含香蕉线条病毒广东分离物(BSV-GD)部分基因组的质粒中扩增该病毒的ORF I基因,将其克隆到pET-28b(+)原核表达载体中进行了融合表达.SDS-PAGE电泳发现,目的融合蛋白与预期大小一致,相对分子质量约为23 000,表达产物主要以...
利用PCR方法从含香蕉线条病毒广东分离物(BSV-GD)部分基因组的质粒中扩增该病毒的ORF I基因,将其克隆到pET-28b(+)原核表达载体中进行了融合表达.SDS-PAGE电泳发现,目的融合蛋白与预期大小一致,相对分子质量约为23 000,表达产物主要以不可溶的包涵体形式存在,将其变性溶解后利用N端的组氨酸标签进行纯化.以纯化产物为抗原免疫兔子制备了香蕉线条病毒的阳性兔抗血清,Western blot和ELISA分析表明,制备的兔抗血清为香蕉线条病毒的高效特异性抗血清,效价高达1∶51 200.
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关键词
香蕉线条病毒
ORF
I
原核表达
抗血清
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职称材料
香蕉线条病毒MP功能域基因的克隆、原核表达及抗血清制备
被引量：
2
3
作者
陈秀
饶雪琴
+1 位作者
阮小蕾
李华平
《华南农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第2期47-52,共6页
[目的]制备香蕉线条病毒广东分离物（ BSV-GD） MP功能域基因编码蛋白的多克隆抗血清，为BSV基因编码蛋白功能的研究提供条件．[方法]对BSV-GD ORF3基因氨基酸序列进行生物信息学分析，得出MP功能域基因序列，克隆该基因并插入载体pET-...
[目的]制备香蕉线条病毒广东分离物（ BSV-GD） MP功能域基因编码蛋白的多克隆抗血清，为BSV基因编码蛋白功能的研究提供条件．[方法]对BSV-GD ORF3基因氨基酸序列进行生物信息学分析，得出MP功能域基因序列，克隆该基因并插入载体pET-28b（＋）构建原核表达载体，经IPTG诱导表达后，采用超声波裂解法进行蛋白可溶性分析，利用组氨酸标签纯化试剂盒对目的融合蛋白进行纯化和回收，然后以纯化的目的蛋白为抗原免疫健康家兔制备其多克隆抗血清；通过Western-blot分析该抗血清的特异性，间接ELISA法检测该抗血清的效价．[结果和结论]MP功能域基因在ORF3中的序列为61～311 aa处，核酸序列长753 bp．试验克隆了该基因并成功构建了其原核表达载体pET28b-MP，经IPTG诱导1 h后表达了相对分子质量约为30800的融合蛋白6His＆#183; MP．可溶性分析表明该融合蛋白以包涵体形式存在，纯化获得了高纯度的目的融合蛋白，以其为抗原成功制备了BSV-GD MP功能域基因编码蛋白的多克隆抗血清；分析表明该抗血清具有很强的特异性，其效价高达204800倍以上．
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关键词
香蕉线条病毒
MP功能域基因
原核表达
抗血清
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职称材料
题名
香蕉线条病毒多重免疫捕获PCR方法的建立及应用
1
作者
卢咏思
刘润沛
饶雪琴
机构
华南农业大学植物保护学院/广东省微生物信号与病害防治重点实验室
出处
《华中农业大学学报》
北大核心
2025年第1期168-173,共6页
基金
国家现代农业产业技术体系项目(CARS-31)。
文摘
为提高复合感染香蕉的香蕉线条病毒(banana streak virus,BSV)的诊断效率,保障香蕉产业的健康发展,设计基于香蕉线条病毒OL(banana streak OL virus,BSOLV)、香蕉线条病毒GF(banana streak GF virus,BSGFV)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因和香蕉线条病毒IM(banana streak IM virus,BSIMV)的RNase H基因保守序列的特异引物,利用BSV多克隆抗血清捕获病毒为模板,通过对引物浓度、退火温度等条件的优化,建立能够同步检测BSOLV、BSGFV、BSIMV的多重免疫捕获PCR方法。研究结果显示,建成的最优体系为BSOLV、BSGFV、BSIMV上下游引物终浓度(μmol/L)比例0.5∶0.5∶0.5,退火温度为63℃。利用该多重免疫捕获PCR方法可以从1 mg/mL的香蕉粗提液中分别检测出BSOLV、BSGFV和BSIMV。所建立的多重免疫捕获PCR方法与引起相似症状的黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)无交叉反应。对15份田间香蕉样品进行检测,能够明显区分出复合侵染的样品,经测序验证,BSOLV、BSGFV和BSIMV的扩增产物与GenBank相应病毒同源率分别在94%以上。表明该多重免疫捕获PCR方法具有较高的敏感性和特异性,可应用于香蕉种苗以及田间香蕉样品中3种BSV的检测。
关键词
香蕉
香蕉线条病毒
多重免疫捕获PCR
复合感染
Keywords
banana
banana streak virus
multiplex immunocapture PCR
co-infection
分类号
S432.4 [农业科学—植物病理学]
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职称材料
题名
香蕉线条病毒ORF I基因的原核表达及抗体制备
被引量：
2
2
作者
何云蔚
陈秀
阮小蕾
沈文锦
刘福秀
李华平
机构
华南农业大学植物病毒研究室
出处
《华南农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第3期18-21,共4页
基金
国家自然科学基金(30671358)
国家农业公益性行业科研专项(nyhyzx07-029)
文摘
利用PCR方法从含香蕉线条病毒广东分离物(BSV-GD)部分基因组的质粒中扩增该病毒的ORF I基因,将其克隆到pET-28b(+)原核表达载体中进行了融合表达.SDS-PAGE电泳发现,目的融合蛋白与预期大小一致,相对分子质量约为23 000,表达产物主要以不可溶的包涵体形式存在,将其变性溶解后利用N端的组氨酸标签进行纯化.以纯化产物为抗原免疫兔子制备了香蕉线条病毒的阳性兔抗血清,Western blot和ELISA分析表明,制备的兔抗血清为香蕉线条病毒的高效特异性抗血清,效价高达1∶51 200.
关键词
香蕉线条病毒
ORF
I
原核表达
抗血清
Keywords
Banana streak virus
ORF I
prokaryotic expression
antiserum
分类号
S432.1 [农业科学—植物病理学]
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职称材料
题名
香蕉线条病毒MP功能域基因的克隆、原核表达及抗血清制备
被引量：
2
3
作者
陈秀
饶雪琴
阮小蕾
李华平
机构
博罗县农业科学研究所
华南农业大学资源环境学院
出处
《华南农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第2期47-52,共6页
基金
国家自然科学基金(30671358)
广东省自然科学基金(C036845)
文摘
[目的]制备香蕉线条病毒广东分离物（ BSV-GD） MP功能域基因编码蛋白的多克隆抗血清，为BSV基因编码蛋白功能的研究提供条件．[方法]对BSV-GD ORF3基因氨基酸序列进行生物信息学分析，得出MP功能域基因序列，克隆该基因并插入载体pET-28b（＋）构建原核表达载体，经IPTG诱导表达后，采用超声波裂解法进行蛋白可溶性分析，利用组氨酸标签纯化试剂盒对目的融合蛋白进行纯化和回收，然后以纯化的目的蛋白为抗原免疫健康家兔制备其多克隆抗血清；通过Western-blot分析该抗血清的特异性，间接ELISA法检测该抗血清的效价．[结果和结论]MP功能域基因在ORF3中的序列为61～311 aa处，核酸序列长753 bp．试验克隆了该基因并成功构建了其原核表达载体pET28b-MP，经IPTG诱导1 h后表达了相对分子质量约为30800的融合蛋白6His＆#183; MP．可溶性分析表明该融合蛋白以包涵体形式存在，纯化获得了高纯度的目的融合蛋白，以其为抗原成功制备了BSV-GD MP功能域基因编码蛋白的多克隆抗血清；分析表明该抗血清具有很强的特异性，其效价高达204800倍以上．
关键词
香蕉线条病毒
MP功能域基因
原核表达
抗血清
Keywords
Banana streak virus
movement protein domain
prokaryotic expression
antiserum
分类号
S432.41 [农业科学—植物病理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
香蕉线条病毒多重免疫捕获PCR方法的建立及应用
卢咏思
刘润沛
饶雪琴
《华中农业大学学报》
北大核心
2025
0
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职称材料
2
香蕉线条病毒ORF I基因的原核表达及抗体制备
何云蔚
陈秀
阮小蕾
沈文锦
刘福秀
李华平
《华南农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
2
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下载PDF
职称材料
3
香蕉线条病毒MP功能域基因的克隆、原核表达及抗血清制备
陈秀
饶雪琴
阮小蕾
李华平
《华南农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
2
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