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滇龙胆草中香叶醇10-羟化酶基因的克隆、蛋白结构及表达分析
被引量：
2
1
作者
王迎夏
赵赛静
+5 位作者
田维圣
崔晓雪
黄文倩
屠鹏飞
史社坡
刘晓
《天然产物研究与开发》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第9期1542-1553,共12页
本研究基于滇龙胆草转录组数据分析,使用RT-PCR技术克隆获得两条香叶醇10-羟化酶基因,命名为GrG10H1和GrG10H2。使用在线软件对其进行了生物信息学分析,两条基因全长分别为1548 bp、1482 bp。系统进化分析显示该基因与细胞色素P450家族...
本研究基于滇龙胆草转录组数据分析,使用RT-PCR技术克隆获得两条香叶醇10-羟化酶基因,命名为GrG10H1和GrG10H2。使用在线软件对其进行了生物信息学分析,两条基因全长分别为1548 bp、1482 bp。系统进化分析显示该基因与细胞色素P450家族中CYP76B亚家族亲缘关系最近。通过对该蛋白进行三维结构预测、同源模建和分子对接,分析了GrG10H蛋白活性口袋中可能参与催化功能发挥的关键氨基酸残基。荧光定量PCR表明GrG10H1基因在叶中表达水平最高,茎次之,根最低。而GrG10H2基因在根和叶中表达水平较高,在茎中几乎不表达。本研究还建立了能够生产龙胆苦苷的愈伤组织细胞培养体系,为进一步解析龙胆苦苷生物合成机制奠定了基础。
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关键词
滇龙胆草
龙胆苦苷
生物信息学分析
香叶醇10-羟化酶
基因克隆
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职称材料
滇龙胆香叶醇10-羟化酶基因的克隆与表达分析
被引量：
3
2
作者
张晓东
李彩霞
+3 位作者
李爽
刘倩倩
王元忠
王家金
《西南农业学报》
CSCD
北大核心
2017年第7期1499-1506,共8页
【目的】克隆滇龙胆香叶醇10-羟化酶基因Gr G10H(geraniol 10-hydroxylase),分析其生物信息学特征、基因结构、蛋白表达和组织表达情况,为龙胆苦苷生物合成途径解析提供理论依据。【方法】通过RT-PCR及基因克隆方法,从滇龙胆总RNA中克...
【目的】克隆滇龙胆香叶醇10-羟化酶基因Gr G10H(geraniol 10-hydroxylase),分析其生物信息学特征、基因结构、蛋白表达和组织表达情况,为龙胆苦苷生物合成途径解析提供理论依据。【方法】通过RT-PCR及基因克隆方法,从滇龙胆总RNA中克隆得到基因Gr G10H及其基因组序列;使用生物信息学方法分析其DNA序列及其编码蛋白特性,使用Clustal X2.1软件对Gr G10H蛋白质及其同源序列做序列比对,使用MEGA7.0软件进行系统发育树构建;利用定量PCR技术分析Gr G10H基因在滇龙胆根茎叶中的表达水平。【结果】使用RT-PCR方法从滇龙胆叶片中克隆得Gr G10H基因全长为1834 bp,包含2外显子和1内含子,ORF1548 bp,将序列提交至Gen Bank,得到序列号KJ418410。生物信息学分析表明,该基因编码515个氨基酸,分子量为57.74 k D,理论等电点为9.02;该蛋白属于细胞色素P450超家族成员,定位于内质网,其N端含一跨膜螺旋(21~43),其中1~20氨基酸残基位于膜内,44~515位于膜外。该蛋白无信号肽,为亲水稳定蛋白,主要由无规则卷曲(44.85%)和α-螺旋(40.58%)构成。Gr G10H蛋白与川西獐牙菜Sm G10H蛋白具有较高的相似性(87%),且亲缘关系最近。原核表达结果表明,Gr G10H基因在大肠杆菌中表达的重组蛋白相对分子质量约为83.74 k D(含GST标签26.00 k D),与预期蛋白大小一致。组织特异性表达分析结果表明Gr G10H基因主要在叶中表达。【结论】克隆到滇龙胆Gr G10H基因,并成功在大肠杆菌中表达,推测其在主要叶片中起作用。
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关键词
滇龙胆
香叶醇10-羟化酶
基因克隆
表达分析
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职称材料
题名
滇龙胆草中香叶醇10-羟化酶基因的克隆、蛋白结构及表达分析
被引量：
2
1
作者
王迎夏
赵赛静
田维圣
崔晓雪
黄文倩
屠鹏飞
史社坡
刘晓
机构
北京中医药大学中药学院中药现代研究中心
北京中医药大学中药学院
出处
《天然产物研究与开发》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第9期1542-1553,共12页
基金
国家自然科学基金(82173922,81402809)
中央高校基本科研业务费专项(2023-JYB-JBQN-054)
北京市自然科学基金(7192112)。
文摘
本研究基于滇龙胆草转录组数据分析,使用RT-PCR技术克隆获得两条香叶醇10-羟化酶基因,命名为GrG10H1和GrG10H2。使用在线软件对其进行了生物信息学分析,两条基因全长分别为1548 bp、1482 bp。系统进化分析显示该基因与细胞色素P450家族中CYP76B亚家族亲缘关系最近。通过对该蛋白进行三维结构预测、同源模建和分子对接,分析了GrG10H蛋白活性口袋中可能参与催化功能发挥的关键氨基酸残基。荧光定量PCR表明GrG10H1基因在叶中表达水平最高,茎次之,根最低。而GrG10H2基因在根和叶中表达水平较高,在茎中几乎不表达。本研究还建立了能够生产龙胆苦苷的愈伤组织细胞培养体系,为进一步解析龙胆苦苷生物合成机制奠定了基础。
关键词
滇龙胆草
龙胆苦苷
生物信息学分析
香叶醇10-羟化酶
基因克隆
Keywords
Gentiana rigescens
gentiopicroside
bioinformatics analysis
geraniol
10
-
hydroxylase
gene cloning
分类号
R285 [医药卫生—中药学]
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职称材料
题名
滇龙胆香叶醇10-羟化酶基因的克隆与表达分析
被引量：
3
2
作者
张晓东
李彩霞
李爽
刘倩倩
王元忠
王家金
机构
玉溪师范学院资源环境学院
云南省农业科学院药用植物研究所
出处
《西南农业学报》
CSCD
北大核心
2017年第7期1499-1506,共8页
基金
云南省教育厅重点项目(2015Z171)
云南省大学生创新项目(201511390005)
文摘
【目的】克隆滇龙胆香叶醇10-羟化酶基因Gr G10H(geraniol 10-hydroxylase),分析其生物信息学特征、基因结构、蛋白表达和组织表达情况,为龙胆苦苷生物合成途径解析提供理论依据。【方法】通过RT-PCR及基因克隆方法,从滇龙胆总RNA中克隆得到基因Gr G10H及其基因组序列;使用生物信息学方法分析其DNA序列及其编码蛋白特性,使用Clustal X2.1软件对Gr G10H蛋白质及其同源序列做序列比对,使用MEGA7.0软件进行系统发育树构建;利用定量PCR技术分析Gr G10H基因在滇龙胆根茎叶中的表达水平。【结果】使用RT-PCR方法从滇龙胆叶片中克隆得Gr G10H基因全长为1834 bp,包含2外显子和1内含子,ORF1548 bp,将序列提交至Gen Bank,得到序列号KJ418410。生物信息学分析表明,该基因编码515个氨基酸,分子量为57.74 k D,理论等电点为9.02;该蛋白属于细胞色素P450超家族成员,定位于内质网,其N端含一跨膜螺旋(21~43),其中1~20氨基酸残基位于膜内,44~515位于膜外。该蛋白无信号肽,为亲水稳定蛋白,主要由无规则卷曲(44.85%)和α-螺旋(40.58%)构成。Gr G10H蛋白与川西獐牙菜Sm G10H蛋白具有较高的相似性(87%),且亲缘关系最近。原核表达结果表明,Gr G10H基因在大肠杆菌中表达的重组蛋白相对分子质量约为83.74 k D(含GST标签26.00 k D),与预期蛋白大小一致。组织特异性表达分析结果表明Gr G10H基因主要在叶中表达。【结论】克隆到滇龙胆Gr G10H基因,并成功在大肠杆菌中表达,推测其在主要叶片中起作用。
关键词
滇龙胆
香叶醇10-羟化酶
基因克隆
表达分析
Keywords
Gentiana rigescens
Geraniol
10
-
hydroxylase
Gene cloning
Expression analysis
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
滇龙胆草中香叶醇10-羟化酶基因的克隆、蛋白结构及表达分析
王迎夏
赵赛静
田维圣
崔晓雪
黄文倩
屠鹏飞
史社坡
刘晓
《天然产物研究与开发》
CAS
CSCD
北大核心
2024
2
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职称材料
2
滇龙胆香叶醇10-羟化酶基因的克隆与表达分析
张晓东
李彩霞
李爽
刘倩倩
王元忠
王家金
《西南农业学报》
CSCD
北大核心
2017
3
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