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信息素脂蛋白PplA对单核细胞增生性李斯特菌运动性和生物被膜形成调控的研究
1
作者 杜小栩 陈绵绵 +5 位作者 任耿佳 杨立锋 丁强 宋厚辉 江玲丽 孙静 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第7期667-675,共9页
为研究单核细胞增生性李斯特菌(LM)脂蛋白PplA在细菌运动、鞭毛形成和生物被膜(BF)形成中的调控作用,本研究从LM野生株EGD-e中扩增pplA基因的上下游片段分别克隆至pKSV7载体中构建pplA基因缺失重组质粒并采用PCR与测序鉴定;以EGD-e为模... 为研究单核细胞增生性李斯特菌(LM)脂蛋白PplA在细菌运动、鞭毛形成和生物被膜(BF)形成中的调控作用,本研究从LM野生株EGD-e中扩增pplA基因的上下游片段分别克隆至pKSV7载体中构建pplA基因缺失重组质粒并采用PCR与测序鉴定;以EGD-e为模板扩增pplA基因及其启动子片段,分别克隆至pIMK2质粒中构建pplA基因回补质粒并经PCR与测序鉴定。将缺失重组质粒转化EGD-e感受态细胞并利用双重压力(42℃、氯霉素抗性)使重组质粒中的同源臂序列与LM基因组发生交换,获得携带缺失重组质粒的pplA基因缺失菌株后,在30℃无抗环境下传代培养使缺失重组质粒丢失,以获得缺失株(ΔpplA)并经PCR与测序鉴定;将回补质粒转化ΔpplA感受态细胞,利用卡那霉素抗性培养基筛选得到回补株(CΔpplA)并经PCR与测序鉴定。在37℃和30℃分别培养各菌株,每隔1 h测定各菌株菌液的OD_(600nm)值,共测12 h以绘制各菌株的生长曲线,同时对各菌株点板计数,结果显示,PplA不影响LM的体外生长能力。将各菌株菌液接种于TSA半固体培养基,培养至24 h和48 h时检测细菌运动圈大小,结果显示,与野生菌株和回补株相比,ΔpplA株运动圈直径极显著和显著增大(P<0.01、P<0.05)。采用RT-qPCR方法检测野生株与ΔpplA株中鞭毛相关基因(flgB、flgC、flgD、flgE、flgG、flgK、flgL、mogR、gmaR、flhA、flhB、flaA、fliD、fliE、fliF、fliG、fliH、fliI、fliM、fliP、fliQ、fliR、mot B)的转录水平。结果显示,与野生株相比,ΔpplA株鞭毛相关基因的转录水平显著提高,其中flhB、fliF、flgD和flgE基因转录水平的变化最显著。在4℃、25℃以及37℃条件下静置培养EGD-e、ΔpplA及CΔpplA株,通过结晶紫法中的酶标仪检测法和显微镜观察法分别检测BF的形成量和BF结构的变化。结果显示,在4℃和25℃条件下,ΔpplA株BF的形成量显著和极显著低于野生株和回补株(P<0.05、P<0.001),而在37℃时,ΔpplA株BF的形成量极显著高于野生株和回补株(P<0.01)。在4℃和25℃条件下,ΔpplA株的BF结构较野生株和回补株更为疏松,而在37℃条件下,ΔpplA株BF的结构较野生株和回补株最为紧密。以上结果表明,LM信息素脂蛋白PplA不影响细菌的体外生长能力,但可以通过调控鞭毛相关基因的转录水平抑制细菌的体外运动能力,并通过鞭毛的形成影响LMBF的形成能力。本研究为探究LM通过PplA调控鞭毛形成相关基因的表达以适应外界和宿主环境的分子机制提供数据参考。 展开更多
关键词 单核细胞增生性李斯特菌 信息素脂蛋白PplA 运动性 鞭毛基因转录 生物被膜形成
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误诊为急性播散性脑脊髓炎的单核细胞增生李斯特菌脑干脑炎合并脊髓炎一例
2
作者 吴丹瑛 王沁雪 +3 位作者 朱冬梅 甘宇婧 黄敏 周苏明 《中国医学科学院学报》 北大核心 2025年第4期673-678,共6页
单核细胞增生李斯特菌脑干脑炎合并脊髓炎临床上较为罕见,临床表现缺乏特异性,MRI有助于诊断,脑脊液培养阳性为诊断金标准。本文报道1例免疫功能正常的成人感染单核细胞增生李斯特菌脑干脑炎合并脊髓炎病例,以提高对本病的认识。
关键词 单核细胞增生李斯特菌 脑干脑炎 脊髓炎 急性播散性脑脊髓炎
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基于RPA-侧向流试纸条技术的单核细胞增生李斯特氏菌快检技术
3
作者 曹悦 李龙 +5 位作者 索一平 李庆尧 王青龙 张爽 邢超 宋丽萍 《分析测试学报》 北大核心 2025年第11期2223-2228,共6页
基于重组聚合酶扩增(RPA)-侧向流试纸条技术(LFS),开发了针对单核细胞增生李斯特氏菌(单增李斯特氏菌)的快速检测技术,并对该方法的特异性、灵敏度和检出限等性能指标进行了系统评估。结果显示,RPA扩增15 min后,侧向流试纸条的检测灵敏... 基于重组聚合酶扩增(RPA)-侧向流试纸条技术(LFS),开发了针对单核细胞增生李斯特氏菌(单增李斯特氏菌)的快速检测技术,并对该方法的特异性、灵敏度和检出限等性能指标进行了系统评估。结果显示,RPA扩增15 min后,侧向流试纸条的检测灵敏度为6.5×10^(2)CFU/mL;对人工污染样品进行8 h增菌后,检出限可达1 CFU/mL。所建立的快检方法无需大型实验设备、操作简单,检测人员进行简单培训即可在20 min内完成单增李斯特氏菌的检测工作,为食品生产企业从源头加强生产环境中单增李斯特氏菌的监控提供了技术支持,有助于提升整个行业食品安全质量控制水平。 展开更多
关键词 食源性致病菌 重组聚合酶扩增(RPA)-侧向流试纸条 单核细胞增生李斯特氏菌 食品安全质量控制水平
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新药治疗多发性骨髓瘤过程中合并李斯特菌感染临床分析
4
作者 贾静 刘念 吴垠 《中国实验血液学杂志》 北大核心 2025年第1期157-162,共6页
目的:通过分析多发性骨髓瘤(MM)患者新药治疗过程中单核细胞性李斯特菌(LM)感染的疾病特点,提高临床医生对该病的认识。方法:回顾性分析北京朝阳医院2018年10月-2022年10月诊治的4例MM患者感染LM的临床特点、治疗及转归。结果:4例患者... 目的:通过分析多发性骨髓瘤(MM)患者新药治疗过程中单核细胞性李斯特菌(LM)感染的疾病特点,提高临床医生对该病的认识。方法:回顾性分析北京朝阳医院2018年10月-2022年10月诊治的4例MM患者感染LM的临床特点、治疗及转归。结果:4例患者平均年龄为(57.5±4.1)岁,均为诱导治疗未达深度缓解或疾病多线复发者,存在免疫球蛋白水平下降及淋巴细胞计数下降。首发症状均为发热,3例患者发病2-3 d出现神经系统症状,脑脊液检查提示合并脑膜炎。发病4-5 d后获取病原学结果调整为敏感药物抗感染方案,2例患者治疗后好转,1例放弃治疗出院后死亡,1例经敏感药物治疗后仍死亡。结论:MM患者新药治疗过程中,LM感染尤其重症风险可能增加,预防及早期敏感药物治疗可降低严重感染风险及死亡率。 展开更多
关键词 单核细胞性李斯特菌 多发性骨髓瘤 新药治疗
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单核细胞增多性李斯特菌主要毒力因子研究进展 被引量：18
5
作者 江玲丽 陈健舜 方维焕 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期733-735,F0003,共4页
关键词 单核细胞增多性李斯特菌 毒力因子 巨噬细胞 人兽共患 上皮细胞 病原菌 食源性 胃肠炎
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鲜活农产品中单核细胞增多性李斯特菌快速检测技术的研究进展 被引量：4
6
作者 关棣锴 胡文忠 +1 位作者 姜爱丽 萨仁高娃 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期361-364,368,共5页
单核细胞增多性李斯特菌是一种食源性致病菌,其引发的李斯特菌病致死率高达30%。本文综述了单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)的生物学特性和毒力因子,着重介绍了单核细胞增多性李斯特菌基于分子生物学、免疫学等技术的... 单核细胞增多性李斯特菌是一种食源性致病菌,其引发的李斯特菌病致死率高达30%。本文综述了单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)的生物学特性和毒力因子,着重介绍了单核细胞增多性李斯特菌基于分子生物学、免疫学等技术的几种快速检测方法,旨在为单核细胞增多性李斯特菌的深入研究提供参考。 展开更多
关键词 单核细胞增多性李斯特菌 快速检测 进展
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TaqMan探针法荧光定量PCR检测鲜切甜瓜中单核细胞增多性李斯特菌的研究 被引量：3
7
作者 关棣锴 胡文忠 +1 位作者 朴永哲 冯可 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第19期297-300,共4页
根据多条单核细胞增多性李斯特菌的hly基因序列,设计了1对简并引物和1条TaqMan探针,建立荧光定量PCR快速检测单核细胞增多性李斯特菌的方法,对该方法的特异性、灵敏度进行了验证,并采用该法对染菌的鲜切甜瓜进行了检测。结果表明,该方... 根据多条单核细胞增多性李斯特菌的hly基因序列,设计了1对简并引物和1条TaqMan探针,建立荧光定量PCR快速检测单核细胞增多性李斯特菌的方法,对该方法的特异性、灵敏度进行了验证,并采用该法对染菌的鲜切甜瓜进行了检测。结果表明,该方法具有较好的特异性,对质粒标准品的灵敏度为1.12×102copies/μL,对染菌的鲜切甜瓜中单核细胞增多性李斯特菌的最低检出限为6.28×102cfu/mL。该方法可为快速检测鲜切果蔬病原微生物污染度及其控制奠定技术基础。 展开更多
关键词 单核细胞增多性李斯特菌 hly基因 荧光定量PCR TAQMAN探针 鲜切甜瓜
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单核细胞增多性李斯特菌LIPI-1全基因克隆与序列分析 被引量：1
8
作者 谭炳乾 何启盖 +1 位作者 肖军 陈焕春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期627-633,共7页
参考GenBank中单核细胞增多性李斯特菌(LM)第I毒力岛(LIPI-1)有关基因序列设计引物,分段扩增、克隆了分离菌株XFL0605LIPI-1毒力岛全基因序列,序列全长8 558 bp,包括完整的prfA、plcA、hly、mpl、actA和plcB6个基因。对LIPI-1编码的6个... 参考GenBank中单核细胞增多性李斯特菌(LM)第I毒力岛(LIPI-1)有关基因序列设计引物,分段扩增、克隆了分离菌株XFL0605LIPI-1毒力岛全基因序列,序列全长8 558 bp,包括完整的prfA、plcA、hly、mpl、actA和plcB6个基因。对LIPI-1编码的6个毒力基因进行序列分析,各毒力基因反映的进化关系不尽一致,表明李斯特菌株在获得外源性毒力基因方面具有不同步性,各毒力基因来源也不尽相同。应用相应软件对各毒力基因编码蛋白的信号肽、跨膜区进行预测,确定了基因序列中调控蛋白PrfA结合区核苷酸序列。分析并确认了hlyA基因及推导氨基酸序列PEST基序和C端保守11肽序列。研究还发现LM菌株XFL0605actA基因编码604个氨基酸,缺失了105 bp富脯氨酸重复片段编码碱基,只有2个E/DFPPPPXD/E重复序列。 展开更多
关键词 单核细胞增多性李斯特菌 李斯特菌第I毒力岛 prfA基因簇 遗传进化分析
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单核细胞增多性李斯特菌对小鼠血脑屏障通透性的影响 被引量：2
9
作者 郑德良 马勋 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期449-451,共3页
为研究小鼠感染单核细胞增多性李斯特菌(LM)90SB2株后血脑屏障通透性的变化,本实验采用ELISA方法检测小鼠血清中髓鞘碱性蛋白(MBP)的水平和甲酰胺-紫外分光光度法检测脑组织中伊文思蓝(EB)的含量。结果显示:MBP于感染后4 h开始升高,10 ... 为研究小鼠感染单核细胞增多性李斯特菌(LM)90SB2株后血脑屏障通透性的变化,本实验采用ELISA方法检测小鼠血清中髓鞘碱性蛋白(MBP)的水平和甲酰胺-紫外分光光度法检测脑组织中伊文思蓝(EB)的含量。结果显示:MBP于感染后4 h开始升高,10 h后维持较高水平,10 h、24 h、48 h、120 h和144 h各时间点与对照组比较均有显著性差异(p<0.05);EB在感染后24 h之内无明显增加,24 h后有较大幅度升高,并且与对照组比较存在显著性差异(p<0.05);但72 h后开始缓慢下降。表明小鼠感染LM后会导致血脑屏障通透性一定程度的升高。 展开更多
关键词 单核细胞增多性李斯特菌 血脑屏障 髓鞘碱性蛋白 伊文思蓝
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表达绿色荧光蛋白重组单核细胞增多性李斯特菌的构建(英文)
10
作者 柯春林 宋厚辉 +2 位作者 江玲丽 张桂芝 方维焕 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期638-644,共7页
将编码绿色荧光蛋白(GFP)的基因融合到单核细胞增多性李斯特菌actA基因启动子和信号肽下游,应用同源重组技术构建了含gfp的重组李斯特菌突变株.PCR扩增及其产物的酶切鉴定均证实目的基因gfp融合到李斯特菌基因组中.荧光显微镜下可见重... 将编码绿色荧光蛋白(GFP)的基因融合到单核细胞增多性李斯特菌actA基因启动子和信号肽下游,应用同源重组技术构建了含gfp的重组李斯特菌突变株.PCR扩增及其产物的酶切鉴定均证实目的基因gfp融合到李斯特菌基因组中.荧光显微镜下可见重组菌体发绿色荧光.SDS-PAGE电泳和免疫印迹结果显示重组李斯特菌表达的GFP分子量约为28 kD,与预计的分子量大小一致.重组菌对鸡胚和小鼠的毒力以及对体外培养细胞的侵袭力均低于野生型李斯特菌.该重组菌可用于研究李斯特菌的致病机理和食品加工过程中微生物污染控制的指示性细菌. 展开更多
关键词 单核细胞增多性李斯特菌 同源重组 绿色荧光蛋白 外源基因表达
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食源性单核细胞增生型李斯特菌arcD基因克隆及序列分析
11
作者 刘扬扬 马勋 +4 位作者 康立超 李红欢 钱凌霄 江婉琳 阮婷玉 《青海畜牧兽医杂志》 2019年第6期21-26,共6页
为了对食源性单核细胞增生型李斯特菌LM5567的arcD基因进行克隆和序列分析,实验利用PCR方法对arcD基因进行扩增,连接至pMD19-T载体,将连接产物转化至DH5接感受态细胞,筛选阳性菌株进行测序比对分析。结果显示:扩增获得的arcD基因序列长... 为了对食源性单核细胞增生型李斯特菌LM5567的arcD基因进行克隆和序列分析,实验利用PCR方法对arcD基因进行扩增,连接至pMD19-T载体,将连接产物转化至DH5接感受态细胞,筛选阳性菌株进行测序比对分析。结果显示:扩增获得的arcD基因序列长为915bp,克隆得到arcD基因的阳性转化子;生物信息学分析表明:arcD蛋白属于跨膜蛋白,无信号肽序列;LM5567的arcD基因核苷酸序列与02-6680株(4b,奶酪,加拿大)相似性99.9%,与10-0811株(1/2b,螃蟹,加拿大)相似性99.7%,与10-0809株(4b,粪便,加拿大)、81-0558株(4b,脑脊髓液,加拿大)、02-1103株、02-1792(4b,奶酪,加拿大)和81-0861株(4b,卷心菜,加拿大)相似性均为100%。LM5567arcD基因编码的氨基酸序列与上述菌株相似性为89.4%~89.9%。本实验成功克隆了arcD基因,为进一步探究arcD基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 食源性单核细胞增多性李斯特菌 arcD基因 生物信息学分析
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食源性单核细胞增生李斯特菌毒力岛4携带株的分型、毒力及生物被膜形成能力的测定 被引量：12
12
作者 刘扬扬 康立超 +3 位作者 马勋 王静 李红欢 钱凌霄 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期567-571,600,共6页
为了解食源性单核细胞增生李斯特菌(LM)毒力岛4(LIPI-4)携带株的血清分型、多位点序列分型、小鼠的半数致死量(LD50)和生物被膜的形成能力,本研究以新疆各师局2014年~2017年常规送检的1027份食品中分离的5株携带LIPI-4的LM(菌株编号LM46... 为了解食源性单核细胞增生李斯特菌(LM)毒力岛4(LIPI-4)携带株的血清分型、多位点序列分型、小鼠的半数致死量(LD50)和生物被膜的形成能力,本研究以新疆各师局2014年~2017年常规送检的1027份食品中分离的5株携带LIPI-4的LM(菌株编号LM461、LM873、LM928、LM2947、LM5573)为研究对象,采用PCR对分离菌株进行血清分型,对其7个看家基因的序列进行多位点序列分型(MLST),并通过腹腔注射法测定小鼠LD50,利用结晶紫染色法测定其生物被膜的形成能力。结果显示,5株食源性LM LIPI-4携带菌株血清型PCR分组均为1/2b、3b和7;多位点序列分析结果均为ST87(CC87);LM928、LM2947、LM5573、LM461和LM873菌株对小鼠的LD50分别为107.2 cfu、107.2 cfu、107.3 cfu、107.5 cfu、108.6 cfu;5株LM分离株均能形成生物被膜,其中LM928和LM2947形成能力最强,LM873最弱。本研究首次明确LIPI-4不仅仅存在于LM CC4克隆群,同时也存在于ST87型,CC87克隆群,该结论对LM LIPI-4的致病性及其致病机理的进一步探究具有重要意义。 展开更多
关键词 食源性单核细胞增生李斯特菌 血清PCR分组 多位点序列分型 生物被膜 LD50
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单核细胞增多性李斯特菌iap基因的克隆、表达与p60蛋白的纯化 被引量：3
13
作者 吕添 武海涛 +1 位作者 曹正茂 王小红 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第11期157-161,共5页
以单增李斯特菌基因组DNA为模板,利用自行设计的引物,通过PCR法扩增出单增李斯特菌的iap基因。在iap基因的5'端和3'端分别引入EcoRⅠ和XhoⅠ2个酶切位点将其克隆到pMD-18T载体上,构建克隆载体pMD-18T-iap。经测序正确后,将iap... 以单增李斯特菌基因组DNA为模板,利用自行设计的引物,通过PCR法扩增出单增李斯特菌的iap基因。在iap基因的5'端和3'端分别引入EcoRⅠ和XhoⅠ2个酶切位点将其克隆到pMD-18T载体上,构建克隆载体pMD-18T-iap。经测序正确后,将iap基因克隆至表达载体pET-28a上构建表达质粒pET-28a-iap。在IPTG诱导下,携带pET-28a-iap的E.coliBL21(DE3)高效表达分子质量约为60kD的可溶性蛋白及包涵体形式的蛋白,其中可溶性蛋白占总p60蛋白含量的76.3%左右。诱导表达的可溶性蛋白通过Ni2+亲和层析柱纯化得到纯度在95.6%以上的重组p60蛋白,其提取率为68.3%左右。 展开更多
关键词 单核细胞增多性李斯特菌 iap基因 克隆 表达 p60蛋白 纯化
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单核细胞增多性李斯特菌p60蛋白表达条件的优化 被引量：3
14
作者 吕添 曹正茂 +1 位作者 武海涛 王小红 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第23期160-163,共4页
在成功构建重组表达载体pET-28a-p60和获得重组宿主菌E.coliBL21(DE3)的基础上,对重组宿主菌E.coliBL21(DE3)进行表达p60蛋白条件的优化研究。结果表明:将重组大肠杆菌培养至OD600nm达0.7～0.8左右时,加入浓度为1mmol/L的异丙基-β-D-... 在成功构建重组表达载体pET-28a-p60和获得重组宿主菌E.coliBL21(DE3)的基础上,对重组宿主菌E.coliBL21(DE3)进行表达p60蛋白条件的优化研究。结果表明:将重组大肠杆菌培养至OD600nm达0.7～0.8左右时,加入浓度为1mmol/L的异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG),在摇床温度为25℃,转速为150r/min条件下诱导表达6h,可得到重组表达的p60蛋白占总蛋白的比例为42.32%,其中可溶性蛋白占总p60蛋白的比例为85.36%左右,为p60蛋白诱导表达的最优条件。 展开更多
关键词 单核细胞增多性李斯特菌 p60蛋白 表达条件 优化
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应用两对引物PCR检测速冻食品中单核细胞增多性李斯特菌 被引量：10
15
作者 陈倩 付萍 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 1998年第12期40-41,共2页
应用两对引物（HIY1—2及Inl1—2对50件速冻食品经两次增菌后因相吸附法提取DNA，分别PCR检测单增李斯特菌的溶血素基因和内化素基因。PCR法检测标本阳性率为12％，与常规检测方法对比，结果一致，大大缩短了检测时间。方法简便，省时... 应用两对引物（HIY1—2及Inl1—2对50件速冻食品经两次增菌后因相吸附法提取DNA，分别PCR检测单增李斯特菌的溶血素基因和内化素基因。PCR法检测标本阳性率为12％，与常规检测方法对比，结果一致，大大缩短了检测时间。方法简便，省时省力，对自食品中分离致病性单增李斯特菌，特别是食物中毒病原菌快速检测具有重要意义，同时提示速冻食品中单增李斯特菌污染问题不可忽视。发展特异敏感的PCR方法鉴定食品中单增李斯特菌是今后工作的发展方向。 展开更多
关键词 单核细胞增多性 李斯特菌 速冻食品 PCR 检测
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单核细胞增生李斯特菌LIPI-4 Lm4b_02327的基因克隆、生物信息学分析及原核表达
16
作者 刘彩霞 马勋 +7 位作者 吕双飞 王静 寇丽君 史唯地 孔翠莲 钱瑞宣 高盛杰 任慧杰 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2024年第3期313-320,共8页
目的 试验旨在获得单核细胞增生李斯特菌新疆冷冻鸡肉分离株LM928中LIPI-4 Lm4b_02327基因的重组蛋白。方法 根据Gen Bank中LM Clip80459菌株(登录号CAS06084.1)Lm4b_02327序列设计特异性引物,利用PCR对Lm4b_02327基因进行扩增,纯化目... 目的 试验旨在获得单核细胞增生李斯特菌新疆冷冻鸡肉分离株LM928中LIPI-4 Lm4b_02327基因的重组蛋白。方法 根据Gen Bank中LM Clip80459菌株(登录号CAS06084.1)Lm4b_02327序列设计特异性引物,利用PCR对Lm4b_02327基因进行扩增,纯化目的片段后克隆至pMD19-T载体,双酶切筛选阳性克隆进行测序。测序后利用软件预测Lm4b_02327序列编码蛋白质的理化性质、二级结构和三级结构,对该基因片段的核苷酸序列及编码的氨基酸序列进行同源性对比。同时构建pET32a-Lm4b_02327重组质粒,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,诱导表达,经SDS-PAGE检测、纯化蛋白后用Western Blot鉴定。结果 LM928菌株的Lm4b_02327基因全长为315 bp,共编码105个氨基酸,该蛋白为偏酸性、无信号肽、亲水性、无跨膜结构、定位于细胞质的不稳定蛋白,该蛋白质预测为PTSLacEⅡA组分。LM928菌株Lm4b_02327基因的核苷酸和氨基酸序列与CFSAN023463、52854、02-6680、02-6679、ICDC-LM188、LM3、N2306、GTA-L356和Clip80459菌株的同源性均为100.0%,与52860、FSL-J1-158和FSL J1-208菌株的核苷酸同源性分别为99.7%、97.8%和97.8%,与52860、FSL-J1-158和FSL J1-208菌株的氨基酸同源性分别为99.0%、94.3%和94.3%。系统进化树显示,LM928菌株的Lm4b_02327基因与4b血清型菌株聚为同一分支。经诱导后,pET32a-Lm4b_02327重组质粒在大肠杆菌BL21中大量表达,经SDS-PAGE和Western Blot鉴定表明该重组蛋白大小约为30 kDa,与预期大小一致。结论 本研究成功克隆Lm4b_02327基因,并获得该蛋白的大量表达,为深入研究蛋白功能奠定基础。 展开更多
关键词 单核细胞增多李斯特菌 Lm4b_02327基因 生物信息学分析 原核表达
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单核细胞增多性李斯特菌mpl全基因克隆与序列分析 被引量：1
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作者 谭炳乾 何启盖 +1 位作者 肖军 陈焕春 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期988-992,共5页
目的克隆单核细胞增多性李斯特菌mpl全基因并进行序列比较分析。方法分别从参考菌株CCTC-CAB97021和分离菌株XFL0605中PCR扩增mpl全基因,连接到T克隆载体转化到受体菌DH5α中,经菌落PCR和提取质粒酶切鉴定,分别获得阳性克隆转化子后测序... 目的克隆单核细胞增多性李斯特菌mpl全基因并进行序列比较分析。方法分别从参考菌株CCTC-CAB97021和分离菌株XFL0605中PCR扩增mpl全基因,连接到T克隆载体转化到受体菌DH5α中,经菌落PCR和提取质粒酶切鉴定,分别获得阳性克隆转化子后测序,运用DNAStar软件对测定核苷酸及推导AA序列与GenBank中李斯特菌属的部分菌株进行分析。结果成功克隆了单核细胞增多性李斯特菌mpl全基因,所获得的mpl基因片段具有完整的ORF,均全长1533bp,编码510个氨基酸。对李斯特菌属mpl基因遗传性分析显示L.monocytogenes与L.seeligeri和L.ivanovii处于不同的分支,在L.monocytogenes种内分为两个群,表明mpl能够反应出这三种李斯特菌株的亲缘关系。结论单核细胞增多性李斯特菌mpl基因具有种的特异性。 展开更多
关键词 单核细胞增多性李斯特菌 金属蛋白酶 mpl基因 T载体
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食品中单核细胞增多李斯特菌的快速检测 被引量：9
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作者 闫冰 李一松 +1 位作者 霍贵成 姜毓君 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期202-205,共4页
单核细胞增多李斯特菌是一种能引起人畜共患病和食源性疾病的致病菌。本文简述了单增李斯特菌的特性和毒力因子,介绍了从分子生物学和免疫学发展起来的核酸探针杂交、PCR、ELISA、免疫传感器等快速检测方法。这些快速检测方法与传统检... 单核细胞增多李斯特菌是一种能引起人畜共患病和食源性疾病的致病菌。本文简述了单增李斯特菌的特性和毒力因子,介绍了从分子生物学和免疫学发展起来的核酸探针杂交、PCR、ELISA、免疫传感器等快速检测方法。这些快速检测方法与传统检测方法相比不仅缩短了检测时间,提高了检测效率,还提高了检测方法的灵敏度和特异性,对于单增李斯特菌的检测具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 单核细胞增多李斯特菌 检测 分子生物学 免疫学
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衢州市食品中单核细胞增生性李斯特氏菌的检测 被引量：3
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作者 陈卫国 汪垂章 +5 位作者 张建民 金莞尔 王文英 杨瑞军 于丽莉 叶承华 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期95-95,共1页
关键词 单核细胞增生性李斯特氏菌 衢州市 食品 单增李斯特菌 检测 食源性病原菌 免疫功能低下 污染状况 结果报告 致病性
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食源性单核细胞增生李斯特菌lmoF2365_0037基因克隆及序列分析 被引量：1
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作者 刘扬扬 马勋 +5 位作者 王静 康立超 李红欢 钱凌霄 江婉琳 阮婷玉 《现代畜牧兽医》 2020年第2期1-6,共6页
为了对食源性单核细胞增生李斯特菌LM5567的lmoF23650037基因进行克隆和序列分析。试验利用PCR方法对lmoF23650037基因进行扩增,连接pMD19-T载体进行克隆,筛选阳性菌株进行测序比对分析。结果显示:扩增获得的lmoF23650037基因序列长为54... 为了对食源性单核细胞增生李斯特菌LM5567的lmoF23650037基因进行克隆和序列分析。试验利用PCR方法对lmoF23650037基因进行扩增,连接pMD19-T载体进行克隆,筛选阳性菌株进行测序比对分析。结果显示:扩增获得的lmoF23650037基因序列长为548 bp,克隆得到lmoF23650037基因的阳性转化子;生物信息学分析表明:lmoF23650037蛋白属于跨膜蛋白,无信号肽序列;二级结构中无规则卷曲和延伸链比例较大,分别是46.31%和32.89%;序列比对结果表明,LM5567株lmoF23650037基因核苷酸序列与02-6680株(4b,奶酪,加拿大)、10-0811株(1/2b,螃蟹,加拿大)、10-0809株(4b,粪便,加拿大)、81-0558株(4b,脑脊髓液、加拿大)、02-1103株、02-1792(4b,奶酪,加拿大)、81-0861株(4b,卷心菜,加拿大)相似性均为100%;LM5567 lmoF23650037基因编码的氨基酸序列与上述菌株相似性均为93.3%。本试验成功克隆了lmoF23650037基因,为进一步探究lmoF23650037基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 食源性单核细胞增生李斯特菌 lmoF23650037基因 PCR 生物信息学分析
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