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适用于玉米螟虫蜕DNA提取方法的筛选与验证
1
作者 孙健博 丁新华 +5 位作者 贾尊尊 高国文 付开赟 吐尔逊·阿合买提 安尼瓦尔·库尔班 郭文超 《新疆农业科学》 北大核心 2025年第2期379-385,共7页
【目的】新疆伊犁河谷是亚洲玉米螟和欧洲玉米螟混合发生区,采用一种对玉米螟无损伤的提取方法,高效建立纯系种群,准确分离鉴定亚洲玉米螟和欧洲玉米螟,为后期开展生物学生态学研究提供科学依据。【方法】以玉米螟虫蜕为材料,建立一套... 【目的】新疆伊犁河谷是亚洲玉米螟和欧洲玉米螟混合发生区,采用一种对玉米螟无损伤的提取方法,高效建立纯系种群,准确分离鉴定亚洲玉米螟和欧洲玉米螟,为后期开展生物学生态学研究提供科学依据。【方法】以玉米螟虫蜕为材料,建立一套无形态特征损伤、经济适用、操作简单、快速且能满足后续PCR扩增检测技术的DNA提取方法。基于筛选试剂盒法(KM)、蛋白酶法(PM)、CTAB法(CM)等常用DNA提取方法,提取玉米螟虫蜕DNA、靶标COI序列扩增、琼脂糖凝胶检测。【结果】虫蜕有效的提取方法为处理3:蛋白酶法,其中蛋白酶法提取虫蜕的DNA浓度最高,为(23.03±0.01)ng/μL,但其纯度不高,不利于后续PCR扩增。处理3提取虫蜕的DNA浓度平均值为(8.46±0.22)ng/μL,符合提取要求,纯度较高为1.86,满足后续PCR扩增试验。【结论】处理3与蛋白酶法可以用于大批量提取玉米螟虫蜕gDNA,种群鉴定具有对玉米螟无损伤、成本低、步骤简单、避免氯仿和异丙醇伤害等优点,处理3较蛋白酶法有较高的扩增效率。 展开更多
关键词 玉米螟 幼虫蜕 dna提取 试剂 蛋白酶
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运用Identifiler试剂盒对硅珠法提取石蜡包埋组织DNA质量的评估 被引量:1
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作者 林旭 王建文 +2 位作者 尹雅莎 谢素梅 冀强 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期577-581,共5页
目的:运用硅珠法从石蜡包埋的组织中提出DNA,Identifiler试剂盒评估DNA质量。方法:南京医科大学第一附属医院病理科2009~2011年石蜡包块49例,运用硅珠法提取石蜡包埋组织DNA,通过紫外分光光度计测定DNA纯度和Identifiler试剂盒PCR后313... 目的:运用硅珠法从石蜡包埋的组织中提出DNA,Identifiler试剂盒评估DNA质量。方法:南京医科大学第一附属医院病理科2009~2011年石蜡包块49例,运用硅珠法提取石蜡包埋组织DNA,通过紫外分光光度计测定DNA纯度和Identifiler试剂盒PCR后3130型毛细管电泳仪分析提取DNA片段的完整性。结果:经紫外分光光度计测定胃癌组织D(260 nm)/D(280nm)均值为1.84±0.02,肺癌组织为1.85±0.02,甲状腺癌组织为1.82±0.02,3组间比较P>0.05,因此硅珠法提取石蜡包埋组织DNA不会因组织差异而影响提取效果;Identifiler试剂盒PCR后毛细管电泳显示其提取效果,46例(93%)得出完整的16个基因座STR峰型。结论:硅珠法可应用于多种组织的DNA提取,并保证提取DNA样品的纯度和完整度。 展开更多
关键词 石蜡包埋组织 硅珠 Identifiler试剂 dna
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应用泛特津试剂盒提取染色体DNA的方法
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作者 曾秀 孔路军 +4 位作者 王孝友 黄伟 辜玉红 范首诚 杨松全 《四川畜牧兽医》 2002年第1期18-18,共1页
采用一种简单、快速、安全、无污染的方法,从黑曲霉细胞中提取基因组DNA,以满足各种目的的PCR、Southern印迹的分析要求。该方法可在短时间内制备大量样品,浓度高、质量好,操作简单、实用,推广性强。
关键词 黑曲霉 基因组dna PCR 染色体dna 提取 泛特津试剂
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牛奶中牛DNA提取试剂盒法的建立 被引量:1
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作者 王一凡 乔春艳 刘永峰 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2020年第9期137-146,共10页
【目的】提高牛奶中牛DNA的分离提取效率,建立稳定的牛奶中牛DNA提取的试剂盒法。【方法】以从牧场中采集的新鲜牛奶为材料,在前期建立的牛奶中牛DNA提取方法基础上,针对消化温度(55,60,65℃)、消化时间(10,60,120,180,240 min)、质量分... 【目的】提高牛奶中牛DNA的分离提取效率,建立稳定的牛奶中牛DNA提取的试剂盒法。【方法】以从牧场中采集的新鲜牛奶为材料,在前期建立的牛奶中牛DNA提取方法基础上,针对消化温度(55,60,65℃)、消化时间(10,60,120,180,240 min)、质量分数20%十二烷基硫酸钠(SDS)裂解液用量(20,35,50,65,80μL)、20 mg/mL蛋白酶K用量(0,10,30,50,70μL)等重要参数依次进行优化,通过DNA品质测定筛选最佳的DNA提取条件,建立稳定的牛奶中牛DNA提取的试剂盒方法,并用深加工的奶粉和高低温液态奶制品对试剂盒方法进行验证。【结果】不同消化温度和消化时间从牛奶中提取的总DNA、线粒体DNA(mtDNA)和核DNA(nDNA)的完整性均表现良好,但不同消化温度和消化时间的DNA质量浓度和纯度存在差异,在消化温度为60℃、消化时间为10 min、SDS裂解液用量为50μL、蛋白酶K用量为50μL时,提取的DNA品质较优,是最佳的DNA提取条件,该条件下DNA平均质量浓度为97 ng/μL,平均纯度为1.44。对优化指标后建立的试剂盒方法进行验证,结果表明该方法不仅适用于生鲜牛奶,而且还适用于液态和固态奶制品。【结论】在所获得的最佳DNA提取条件下,牛奶体细胞裂解充分、完全,所提DNA质量浓度和纯度较高,完整性较好,PCR扩增性能较强。建立的牛奶中牛DNA提取试剂盒法适用范围较广。 展开更多
关键词 牛奶 dna提取 提取条件优化 试剂
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兴安落叶松DNA提取-试剂盒改良法 被引量:3
5
作者 王洪梅 李艳霞 +4 位作者 翁海龙 周显昌 康迎昆 王福德 王鑫 《安徽农业科学》 CAS 2012年第35期17029-17030,17041,共3页
[目的]寻找一种快速简便的兴安落叶松基因组DNA的提取方法。[方法]对DNA提取试剂盒进行改良,与原试剂盒法(离心柱)进行比较,并用琼脂糖凝胶电泳、蛋白核酸测定和ISSR-PCR对所提取的总DNA进行检测。[结果]试剂盒改良法提取的总DNA纯度和... [目的]寻找一种快速简便的兴安落叶松基因组DNA的提取方法。[方法]对DNA提取试剂盒进行改良,与原试剂盒法(离心柱)进行比较,并用琼脂糖凝胶电泳、蛋白核酸测定和ISSR-PCR对所提取的总DNA进行检测。[结果]试剂盒改良法提取的总DNA纯度和浓度较高,电泳显示其主条带较清晰,无降解现象,A260/A280值为1.75~1.84。[结论]改良后的DNA提取方法更适合兴安落叶松基因组DNA的提取。 展开更多
关键词 兴安落叶松 dna提取 基因组dna 提取试剂 改良
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适合转录组测序的葡萄叶片总RNA试剂盒提取法的改进 被引量:13
6
作者 杨晓燕 张波 +3 位作者 黄方爱 颜欢 李月荣 郑秋生 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期215-220,共6页
RNA试剂盒法是获取植物高质量RNA样品的常用技术,针对3种常见RNA提取试剂盒在红地球葡萄叶样品RNA提取效果进行评估和优化,以期找到适合红地球葡萄叶片RNA表达谱测序需求的高质量RNA提取策略。试验依据3种试剂盒推荐时间和条件进行RNA提... RNA试剂盒法是获取植物高质量RNA样品的常用技术,针对3种常见RNA提取试剂盒在红地球葡萄叶样品RNA提取效果进行评估和优化,以期找到适合红地球葡萄叶片RNA表达谱测序需求的高质量RNA提取策略。试验依据3种试剂盒推荐时间和条件进行RNA提取,并对时间等条件进行优化,比对了优化前后RNA质量。结果显示,试剂盒经优化后的方法提取的RNA收率高,完整性好,OD260/OD280在1.8-2.2之间,OD260/OD230大于2,28S与18S条带清晰完整,RNA-Seq测序质量及基因覆盖度符合要求。在红地球葡萄叶片上的RNA提取结果表明,延长提取试剂与样品的接触时间操作可以显著提高RNA提取质量(纯度/完整性)。 展开更多
关键词 红地球葡萄 RNA提取 试剂 转录组短枪测序
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不同DNA提取试剂盒提取作物种子基因组DNA效果的比较 被引量:10
7
作者 李会 任志莹 +1 位作者 王颖 王建忠 《湖北农业科学》 北大核心 2013年第8期1956-1958,共3页
比较3种不同DNA提取试剂盒(宝生物、天根、LGC)在转基因产品检测中的应用效果,分别提取玉米、水稻和大豆种子的基因组DNA。结果表明,天根DNA提取试剂盒DP305更为适合从作物种子中提取基因组DNA进行转基因成分检测。
关键词 dna提取试剂 基因组dna 作物 比较
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国标法和试剂盒法对婴幼儿食品中生物素质量分数的测定 被引量:6
8
作者 徐琼 王志伟 +3 位作者 冯琦 陈欣钦 顾文佳 曲勤凤 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2014年第7期56-59,共4页
比较GB5413.19-2010《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中游离生物素的测定》中微生物法和商品化生物素检测试剂盒法对婴幼儿食品中生物素质量分数测定的差异性,为相关企业和检测机构提供有益参考.两方法均是利用植物乳杆菌(Lactobaci... 比较GB5413.19-2010《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中游离生物素的测定》中微生物法和商品化生物素检测试剂盒法对婴幼儿食品中生物素质量分数测定的差异性,为相关企业和检测机构提供有益参考.两方法均是利用植物乳杆菌(LactobaciLLuspLantarum)对生物素具有敏感性的特点,通过测定菌株的生长变化来反映样品中生物素质量分数.结果表明,国标法测定标准曲线在生物素质量分数为(0.01~0.1)× 10-2 μg/g范围内具有良好的线性关系(R2=0.9963),试剂盒法在(0.08~0.72)×10-2 μg/g范围内线性良好(R2=0.9747).以这两种方法对5份婴幼儿食品中生物素质量分数进行检测比较,两者均能有效测定生物素质量分数,国标法检测最大RSD%为2.836,而试剂盒法最大RSD%为9.777,但均不影响最终结果判断.两种方法均适合于婴幼儿食品中生物素的测定,国标法相对于试剂盒法有更好的稳定性,但操作过程较为繁杂;而试剂盒法的检测周期短,适合于大批量检测工作. 展开更多
关键词 生物素 国标 试剂 食品分析
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常见病原菌基因组DNA快速提取试剂盒研制 被引量:2
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作者 曹飞扬 王娉 +4 位作者 赵晓美 谈笑 李菲 江连洲 陈颖 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期81-88,共8页
以单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌等6种常见食源性致病菌为研究对象,优化试剂盒工艺参数,采用琼脂糖凝胶电泳及OD260/OD280分析基因组DNA提取效果。结果表明,试验试剂盒可在30 min内完成基因组DNA提取,对常见10类食品样品抗基质干扰... 以单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌等6种常见食源性致病菌为研究对象,优化试剂盒工艺参数,采用琼脂糖凝胶电泳及OD260/OD280分析基因组DNA提取效果。结果表明,试验试剂盒可在30 min内完成基因组DNA提取,对常见10类食品样品抗基质干扰能力强。与实时荧光PCR技术联用,检测染菌量1~10 cfu·25 g-1食品样品时,仅一次增菌可得阳性结果;市售食品样品检测与国标方法结果无显著差异。所研制病原菌基因组DNA提取试剂盒适用于食品病原菌快速检测。 展开更多
关键词 食源性致病菌 基因组dna 提取试剂 快速
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3种试剂盒提取烤后烟叶DNA的效果比较 被引量:5
10
作者 陆铮铮 李芳 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2018年第1期172-175,共4页
【目的】筛选出简单、快速及高效的烤后烟叶DNA提取试剂盒。【方法】选用3种不同的DNA提取试剂盒提取烤后烟叶DNA,通过比较DNA的纯度和浓度、实时荧光定量PCR扩增Ct值以及凝胶电泳图谱分析的方法,综合评价DNA提取效果。【结果】AxyPrep... 【目的】筛选出简单、快速及高效的烤后烟叶DNA提取试剂盒。【方法】选用3种不同的DNA提取试剂盒提取烤后烟叶DNA,通过比较DNA的纯度和浓度、实时荧光定量PCR扩增Ct值以及凝胶电泳图谱分析的方法,综合评价DNA提取效果。【结果】AxyPrep基因组DNA小量试剂盒所提取的DNA,其纯度和浓度较高,用时短,DNA质量好,适用于小量DNA的提取;磁珠法植物基因组DNA试剂盒提取DNA,其浓度和纯度虽然略高于前者,但用时很长,比较适用于批量DNA的提取;Gene Pure新型植物基因组DNA快速提取试剂盒提取DNA,其纯度高、但浓度低。【结论】烤后烟叶DNA的提取推荐使用AxyPrep基因组DNA小量试剂盒。 展开更多
关键词 烤后烟叶 dna提取试剂 实时荧光定量PCR 凝胶电泳
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植物DNA提取方法的研究进展 被引量:3
11
作者 张紫量 李旭鹏 +3 位作者 申君毅 张楠 王倩 张璐 《农业与技术》 2024年第14期166-170,共5页
随着分子生物学的快速发展,植物DNA提取技术在植物科学研究、农业生产、环境保护和法医物证学等领域发挥着至关重要的作用。传统方法如CTAB法、SDS法和高盐低pH法,虽然在提取效率和纯度方面取得了一定的成功,但存在操作繁琐、耗时长、... 随着分子生物学的快速发展,植物DNA提取技术在植物科学研究、农业生产、环境保护和法医物证学等领域发挥着至关重要的作用。传统方法如CTAB法、SDS法和高盐低pH法,虽然在提取效率和纯度方面取得了一定的成功,但存在操作繁琐、耗时长、试剂对人体有害等问题。为了克服这些问题,研究者开发了一系列快速、高效的提取方法,如微针贴片法、纤维素滤纸法、EZ-D法和碱裂解法。这些方法在提高提取速度和纯度的同时,减少了对环境和操作人员的影响。本文总结了植物DNA提取的传统方法和近年来发展起来的快速提取新技术的优缺点。 展开更多
关键词 植物dna dna提取 CTAB 试剂 医物证学
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使用PrepFiler试剂盒提取牙齿检材DNA
12
作者 陈爱萍 刘峰 尹路 《法医学杂志》 CAS CSCD 2012年第1期55-55,58,共2页
牙齿质地坚硬不易腐败,常用于高度腐败或白骨化尸体的DNA检验,其提取也较困难。常用的牙齿DNA提取步骤包括脱钙、裂解、浓缩和纯化等[1]。这些方法虽能有效地提取牙齿中的DNA,但使用的有毒试剂较多,步骤繁杂,耗费时间较长。为简化实验方... 牙齿质地坚硬不易腐败,常用于高度腐败或白骨化尸体的DNA检验,其提取也较困难。常用的牙齿DNA提取步骤包括脱钙、裂解、浓缩和纯化等[1]。这些方法虽能有效地提取牙齿中的DNA,但使用的有毒试剂较多,步骤繁杂,耗费时间较长。为简化实验方法,本研究使用PrepFiler法医DNA提取试剂盒(简称PrepFiler试剂盒)对牙齿进行提取及纯化,并对脱钙和不脱钙的检测结果进行了比较,现报道如下。 展开更多
关键词 医遗传学 dna PrepFilerdna提取试剂
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血液样本中DNA与RNA提取效率的研究
13
作者 宿星蕾 路平 +3 位作者 彭俊杰 汪滋民 宋萍 韩达 《上海交通大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第4期476-486,共11页
目的·全面评估不同试剂盒及不同方法对血液样本中DNA与RNA提取的效率。方法·收集来自阿尔茨海默病(20例)、纤维化(5例)、结直肠癌患者(108例)及健康个体(12例)的血液样本,共145例。采用柱法试剂盒(Kit A)和核酸提取仪来提取... 目的·全面评估不同试剂盒及不同方法对血液样本中DNA与RNA提取的效率。方法·收集来自阿尔茨海默病(20例)、纤维化(5例)、结直肠癌患者(108例)及健康个体(12例)的血液样本,共145例。采用柱法试剂盒(Kit A)和核酸提取仪来提取血液中白细胞的基因组DNA(genomic DNA,gDNA)。使用5种试剂盒(Kit B~F),通过柱法(Kit B、E)或磁珠法(Kit C、D、F)对血浆中的游离DNA(cell-free DNA,cfDNA)和游离RNA(cell-free RNA,cfRNA)进行提取。对Kit B提取过程进行优化,包括增加血浆上样体积和延长洗脱孵育时间,并且采用该方案对100例结直肠癌患者血浆样本cfDNA进行提取。使用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)对提取出的DNA和RNA进行定量分析,比较提取的DNA或RNA分子的数量以评估提取效率,并结合成本及操作时间等进行综合评价。结果·在gDNA提取中,尽管核酸提取仪缩短了操作时间,但Kit A(柱法)提取的DNA分子数的中位数是其25.36倍(P<0.001)。对于cfDNA提取,3种试剂盒(Kit B~D)的总体效率相近,但Kit B(柱法)在低浓度样本中的表现较为突出,其DNA提取量的平均值分别是基于磁珠法的Kit D和Kit C的4.24倍和1.18倍。提取步骤优化后的Kit B进一步提高了cfDNA的提取效率。对比3例样本在不同血浆上样体积下的cfDNA提取量,结果显示大上样体积提取的cfDNA量分别为小上样体积的3.98倍、2.38倍和3.82倍;对100例结直肠癌患者血浆样本cfDNA提取结果表明,该提取方案可在临床样本中稳定提取足够量的cfDNA。在cfRNA提取方面,Kit E(柱法)因其高效、便捷且经济性好,被广泛推荐;其提取的cfRNA含量中位数是Kit F(磁珠法)的5.01倍。比较血浆中cfDNA与cfRNA的拷贝数,结果显示每毫升血浆中cfRNA的拷贝数平均数是cfDNA的27.65倍。结论·Kit A、Kit B和Kit E分别在白细胞gDNA、血浆cfDNA以及血浆cfRNA提取方面表现出更高的效率。然而,尽管Kit E在提取效率和成本上具有优势,其安全性仍需进一步评估。 展开更多
关键词 核酸提取 血浆游离dna 血浆游离RNA 提取试剂 实时荧光定量PCR
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15种常见食(药)用菌的3种总DNA提取方法比较研究 被引量:14
14
作者 江树勋 邵碧英 +4 位作者 陈文炳 李寿崧 王泽生 朱晓南 廖剑华 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第5期36-40,共5页
本文研究了15种主要食(药)用菌共16个样品的3种总DNA提取方法之比较,它们分别是CTAB法、食品DNA提取试剂盒法和QIAGEN试剂盒法。提取结果分别经过核酸蛋白分析仪、电泳以及RAPD检测。紫外检测结果表明3种方法提取到的总DNA质量均不理想... 本文研究了15种主要食(药)用菌共16个样品的3种总DNA提取方法之比较,它们分别是CTAB法、食品DNA提取试剂盒法和QIAGEN试剂盒法。提取结果分别经过核酸蛋白分析仪、电泳以及RAPD检测。紫外检测结果表明3种方法提取到的总DNA质量均不理想,电泳结果表明3种方法均能提取出小平菇、红菇、香菇、双孢蘑菇、竹荪、黑木耳、姬松茸等7种食(药)用菌总DNA,RAPD检测结果表明CTAB法适用于所有15种食(药)用菌提取用于PCR的总DNA。根据以上结果,我们认为可以选用CTAB法作为在检测这些食(药)用菌的转基因成分时的总DNA提取方法。 展开更多
关键词 食用菌 药用菌 dna 提取 比较研究 CTAB 食品dna提取试剂盒法 QIAGEN试剂
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三种试剂盒提取粪便隐孢子虫微量DNA的效果比较 被引量:5
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作者 赵梅珍 刘晖 +1 位作者 贺莉芳 马元芬 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第26期16130-16131,共2页
[目的]筛选一种高效、简单、快速、价格合理的粪便微量DNA提取试剂盒。[方法]用3种不同的试剂盒提取粪便DNA,通过比较所提取DNA的浓度、纯度、提取率及巢式PCR产物等评价提取效果。[结果]Genmed试剂盒提取的DNA浓度最高、PCR产物条带最... [目的]筛选一种高效、简单、快速、价格合理的粪便微量DNA提取试剂盒。[方法]用3种不同的试剂盒提取粪便DNA,通过比较所提取DNA的浓度、纯度、提取率及巢式PCR产物等评价提取效果。[结果]Genmed试剂盒提取的DNA浓度最高、PCR产物条带最亮,但提取时间相对较长,成本相对较高。天根试剂盒提取的DNA纯度最高,DNA浓度适中,成本适中,提取时间最短。碧云天试剂盒提取的DNA纯度、浓度均不高且提取时间最长,但成本最低。[结论]Genmed试剂盒提取粪便微量DNA最灵敏。天根试剂盒提取DNA适于DNA纯度要求较高的分子生物学研究。 展开更多
关键词 粪便dna dna提取 试剂
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4种试剂盒提取病理组织切片中裂头蚴DNA效果的比较 被引量:1
16
作者 蒙兴慧 陈艳 +3 位作者 李金福 胡月 刘巧霞 刘鉴 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期635-638,642,共5页
目的筛选一种快速、简单、高效、价格合理的从病理组织切片中提取猬裂头蚴DNA的试剂盒。方法用4种不同的试剂盒提取病理组织切片(含虫白片/HE染色片)中裂头蚴DNA,通过比较所提取DNA的浓度、纯度、提取率、提取时间、提取价格及PCR产物... 目的筛选一种快速、简单、高效、价格合理的从病理组织切片中提取猬裂头蚴DNA的试剂盒。方法用4种不同的试剂盒提取病理组织切片(含虫白片/HE染色片)中裂头蚴DNA,通过比较所提取DNA的浓度、纯度、提取率、提取时间、提取价格及PCR产物的亮度,评价4种市售商品试剂盒提取DNA的效果。结果 4种试剂盒提取裂头蚴有虫组织白片DNA的结果:试剂盒1提取DNA的浓度、纯度及提取率最高,提取成本也最高且耗时较短;试剂盒2的提取效果与试剂盒1相近,提取成本较低且时间最短;试剂盒3的提取效果介于试剂盒2与试剂盒4之间,成本最低但时间长达26h;试剂盒4提取效果最低,PCR产物条带也最暗,提取成本较低但耗时较长。4种试剂盒提取HE染色片DNA的结果:试剂盒1与试剂盒2提取的效果相近,两者成本较高耗时较短,试剂盒3与试剂盒4的提取效果相近,两者成本低耗时长,试剂盒3与试剂盒4的提取效果均低于试剂盒1和试剂盒2的提取效果。结论 4种商品试剂盒均能满足裂头蚴感染有虫组织的DNA提取,其中试剂盒2更适用于快速提取。 展开更多
关键词 猬裂头蚴 dna提取 病理组织切片 商品试剂
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三种游离核酸提取试剂盒对血浆cfDNA提取性能的比较 被引量:4
17
作者 应超 蔡燕宁 +3 位作者 郝淑文 王婷 刘沅贺 赵立芳 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第12期1556-1563,共8页
目的综合评估3种游离核酸(cfDNA)提取试剂盒,以筛选出经济可靠的商品试剂盒。方法我们使用了3种不同的试剂盒提取10名健康人血浆中的cfDNA,并使用Agilent 2100生物芯片分析仪对cfDNA片段大小和丰度进行评估。同时,我们还使用微滴式数字P... 目的综合评估3种游离核酸(cfDNA)提取试剂盒,以筛选出经济可靠的商品试剂盒。方法我们使用了3种不同的试剂盒提取10名健康人血浆中的cfDNA,并使用Agilent 2100生物芯片分析仪对cfDNA片段大小和丰度进行评估。同时,我们还使用微滴式数字PCR(ddPCR)对cfDNA中的核糖核酸酶P蛋白亚基p30(RPP30)、NADH脱氢酶亚基1(ND1)、NADH脱氢酶亚基4(ND4)基因拷贝数进行定量,并利用实时荧光定量PCR(qPCR)检测cfDNA中藤黄节杆菌序列(ALU)ALU115和ALU247的浓度。此外,我们还在混合血浆中掺入50~766 bp的DNA Ladder,然后使用上述3种提取试剂盒对其进行提取,并使用Agilent 2100生物芯片分析仪分析各DNA片段的浓度,以计算不同试剂盒对不同大小的DNA片段的回收率和提取偏好性。结果3种试剂盒从健康人血浆中纯化的100~300 bp cfDNA浓度分别为(5.10±1.99)、(4.64±3.09)和(1.82±1.29)ng/mL(P=0.006)。Kit A所提取的RPP30拷贝数显著高于Kit C(P=0.018),而Kit A和Kit B所提取的ND1和ND4拷贝数也均显著高于Kit C(P=0.001;P=0.001;P=0.001;P=0.001)。此外,Kit A所提取的cfDNA中,ALU 115和ALU 247的浓度也显著高于Kit C(P=0.009;P=0.003)。3种试剂盒对混合血浆中掺入的外源性DNA Ladder的回收率差异有统计学意义(P<0.001),同时Kit B和Kit C对不同大小的DNA片段也存在提取偏好性。结论Kit A性能最佳,Kit B是一种低成本替代方案,其工作流程更简单省时。 展开更多
关键词 游离dna 提取试剂 核酸提取
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8种试剂盒的水稻DNA提取效果比较研究 被引量:2
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作者 肖婉钰 孙艺嘉 +4 位作者 周贤玉 任海龙 邹集文 张晶 许东林 《种子科技》 2021年第18期5-6,12,共3页
水稻种子DNA的提取质量直接影响水稻种子真实性检验的效果。选取市面上常见的8种植物基因组DNA提取试剂盒(K1-K8)进行水稻种子DNA提取效果比较研究,结果表明,试剂盒K2提取得到的水稻种子DNA在0.8%琼脂糖凝胶电泳检测中,条带最明亮、整... 水稻种子DNA的提取质量直接影响水稻种子真实性检验的效果。选取市面上常见的8种植物基因组DNA提取试剂盒(K1-K8)进行水稻种子DNA提取效果比较研究,结果表明,试剂盒K2提取得到的水稻种子DNA在0.8%琼脂糖凝胶电泳检测中,条带最明亮、整齐且无拖尾,质量最高,试剂盒K8、K3的提取质量次之;试剂盒K1、K6提取的水稻种子DNA纯度最佳,试剂盒K2、K3、K5、K7、K8的提取产物纯度次之。因此,试剂盒K2的提取效果最好,K8、K3次之,8种试剂盒均适用于基于SSR片段分析的水稻品种真实性检测。 展开更多
关键词 水稻 dna提取试剂 品种真实性
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不同商品化病毒DNA提取试剂盒对非洲猪瘟病毒检测效果的比较研究
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作者 杨云龙 冯永智 +3 位作者 高琦 吴小仪 龚浪 张桂红 《广东畜牧兽医科技》 2023年第1期39-43,共5页
为建立快速、准确的非洲猪瘟(African swine fever,ASF)检测方法,试验针对ASFV的晚期翻译p72蛋白基因构建了标准品质粒和标准曲线,并利用荧光定量PCR技术对OIE和CADC提供的引物和探针进行灵敏性的比对及对多种DNA提取试剂盒提取的ASFV ... 为建立快速、准确的非洲猪瘟(African swine fever,ASF)检测方法,试验针对ASFV的晚期翻译p72蛋白基因构建了标准品质粒和标准曲线,并利用荧光定量PCR技术对OIE和CADC提供的引物和探针进行灵敏性的比对及对多种DNA提取试剂盒提取的ASFV DNA检测效率进行了评价,为ASFV的高效检测提供数据参考。结果表明:构建的ASFV晚期p72基因的标准品质粒和标准曲线中,p72标准品质粒的检测效率与灵敏度较优。通过使用OIE、CADC分别提供的引物、探针和多种DNA提取试剂盒进行ASFV荧光定量PCR检测,发现CADC提供的引物和探针对于ASFV的检测更加灵敏,Axygen品牌的DNA提取试剂盒对ASFV的检测性价比更高。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 p72 标准曲线 dna提取试剂
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柑橘黄龙病病原DNA提取方法比较 被引量:13
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作者 王茜 廖惠红 +5 位作者 黄宏明 陆玉英 李文信 徐宁 韦宗便 李一伟 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期225-229,共5页
【目的】筛选出一种快速高效获取柑橘黄龙病病原DNA的提取方法,为黄龙病亚洲种病原的检测奠定基础。【方法】选取5份疑似黄龙病症状柑橘叶片样品,分别采用4种试剂盒(快捷型基因组DNA提取系统、新型植物基因组DNA提取试剂盒、植物基因组... 【目的】筛选出一种快速高效获取柑橘黄龙病病原DNA的提取方法,为黄龙病亚洲种病原的检测奠定基础。【方法】选取5份疑似黄龙病症状柑橘叶片样品,分别采用4种试剂盒(快捷型基因组DNA提取系统、新型植物基因组DNA提取试剂盒、植物基因组DNA提取试剂盒、快速DNA提取扩增套装)及CTAB法提取柑橘叶脉基因组DNA,并用柑橘黄龙病亚洲种的16SrDNA特异引物fD1/fD2和OI1/OI2c进行PCR扩增,DNA提取产物及PCR扩增产物在1%琼脂糖凝胶电泳上检测。【结果】快捷型基因组DNA提取系统获得的DNA质量最好,植物基因组DNA提取试剂盒和CTAB法提取DNA方法提取得到的DNA质量较好,新型植物基因组DNA提取试剂盒所获得的DNA质量较差,快速DNA提取扩增套装所获得的DNA质量最差。除快速DNA提取扩增套装外,其余4种DNA提取方法均扩增出黄龙病亚洲种病原。【结论】快捷型植物基因组DNA提取系统试剂盒操作简单快捷,耗时短,提取的DNA效果较好,能够满足黄龙病病原PCR检测的要求。 展开更多
关键词 柑橘 黄龙病 试剂 CTAB dna提取 PCR
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