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马铃薯块茎颗粒结合型淀粉合酶基因的克隆及其RNAi载体的构建
被引量:
7
1
作者
刘玉汇
王丽
+4 位作者
杨宏羽
余斌
李元铭
张俊莲
王蒂
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第7期1187-1195,共9页
GBSSI是马铃薯块茎中控制直链淀粉合成的关键酶,为培育高支链淀粉含量或纯支链淀粉含量的转基因马铃薯材料,根据GenBank登录号X58453的序列设计特异引物,采用RT-PCR技术获得马铃薯块茎GBSSI相似基因,并利用生物信息学相关软件分析,预测G...
GBSSI是马铃薯块茎中控制直链淀粉合成的关键酶,为培育高支链淀粉含量或纯支链淀粉含量的转基因马铃薯材料,根据GenBank登录号X58453的序列设计特异引物,采用RT-PCR技术获得马铃薯块茎GBSSI相似基因,并利用生物信息学相关软件分析,预测GBSSI相似基因cDNA序列编码的蛋白质结构和功能。结果表明,克隆的GBSSI相似基因与报道的GBSSI基因序列相似性达到99.78%,其开放阅读框长1824bp,编码607个氨基酸,具有许多重要功能位点。三级结构预测结果表明,该蛋白具有淀粉合成功能,基因序列已注册到GenBank,序列登录号为EU403426。以此基因CDS内542bp的靶标序列作为干扰区段,扩增GBSSI的正反向基因片段,并引入237bp的内含子序列,构建由Patatin启动子驱动的具有"正义基因片段gbssA-内含子VP1-ABI3-like protein-反义基因片段gbssB"的植物干扰表达载体pBI121g-PgABI。本研究结果将为淀粉合成的进一步研究和高支链淀粉含量或纯支链淀粉含量的马铃薯品种的培育奠定基础。
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关键词
马铃薯
颗粒
结合
型
淀粉
合
酶
基因克隆
序列分析
RNAI载体
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职称材料
百合GBSS基因RNAi载体构建
被引量:
1
2
作者
张进忠
《农学学报》
2022年第7期69-73,共5页
为研究GBSS基因在百合鳞茎形成及发育过程中影响鳞茎淀粉合成代谢的作用机理,构建干扰GBSS基因的RNAi载体为其在转录水平沉默表达提供材料。从百合鳞片克隆GBSS基因300 bp的保守序列,通过BP与LR反应将该序列正反向连接到干扰载体pJawohl...
为研究GBSS基因在百合鳞茎形成及发育过程中影响鳞茎淀粉合成代谢的作用机理,构建干扰GBSS基因的RNAi载体为其在转录水平沉默表达提供材料。从百合鳞片克隆GBSS基因300 bp的保守序列,通过BP与LR反应将该序列正反向连接到干扰载体pJawohl8-RNAi中,经过酶切反应鉴定所构建RNAi表达载体的正确性。实验成功构建pDONR221-GBSS入门克隆与pJawohl8-RNAi-GBSS表达载体,为在百合鳞茎淀粉合成代谢途径中研究GBSS基因功能及对鳞茎发育的影响提供了材料与思路。
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关键词
百
合
GBSS基因
鳞茎
淀粉
代谢
机理
颗粒结合淀粉合酶
RNAI
表达载体
鳞茎发育
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职称材料
水稻糯性突变体r162的鉴定与基因定位
被引量:
2
3
作者
何羽喆
徐善斌
+6 位作者
陈彦宇
杨雪
段二超
滕烜
王益华
董慧
万建民
《浙江大学学报(农业与生命科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第3期368-381,共14页
直链淀粉是影响稻米食味品质和外观品质的重要因素,主要由Waxy(Wx)基因编码的颗粒结合淀粉合酶Ⅰ(granule-bound starch synthaseⅠ, GBSSⅠ)介导合成。本研究从宁粳2号的甲基磺酸乙酯(ethyl methanesulfonate,EMS)诱变材料中筛选到了...
直链淀粉是影响稻米食味品质和外观品质的重要因素,主要由Waxy(Wx)基因编码的颗粒结合淀粉合酶Ⅰ(granule-bound starch synthaseⅠ, GBSSⅠ)介导合成。本研究从宁粳2号的甲基磺酸乙酯(ethyl methanesulfonate,EMS)诱变材料中筛选到了一个糯性突变体r162,与野生型相比,其籽粒外观呈不透明的云雾状,种子和糙米的粒长、粒宽以及千粒重显著下降。通过扫描电镜对淀粉形态进行观察,发现突变体的淀粉颗粒上存在孔洞。半薄切片碘染结果表明,突变体r162发育时期胚乳的造粉体排列结构与野生型相似,但碘染后颜色更浅。理化性质分析发现,突变体r162的总淀粉、总蛋白质和总脂肪含量与野生型相比无显著差异,但是表观直链淀粉含量极显著下降、胶稠度极显著增加,糊化特性发生明显改变,并且淀粉的崩解值、回生值、回复值以及米粉在尿素中的膨胀体积均小于野生型。通过基因定位和测序发现,突变基因Wx位于第6号染色体短臂上,Wx基因第7个内含子的第1个碱基(Int7-1)由鸟嘌呤(G)替换为腺嘌呤(A),造成Wx基因的编码区存在10个碱基的缺失,导致其编码的GBSSⅠ蛋白自第256位氨基酸起出现错误翻译,使蛋白质翻译提前终止,因此将该等位变异命名为Wx-r162。进一步通过蛋白质印迹法检测发现,突变体中的GBSSⅠ蛋白水平极显著下降。酶活性测定也证实,突变体r162中GBSSⅠ活性明显降低。综上所述,Wx-r162基因被视为一个新的等位变异,这种突变导致GBSSⅠ活性下降,进而造成突变体r162表观直链淀粉含量降低和籽粒表现出不透明的表型。
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关键词
水稻
稻米品质
直链
淀粉
含量
Waxy(Wx)基因
颗粒结合淀粉合酶
Ⅰ
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职称材料
利用基因编辑技术创制福香占糯稻新种质
4
作者
魏林艳
樊佳星
+4 位作者
张敏
王进兰
谢鸿光
魏毅东
张建福
《福建农业科技》
CAS
2023年第10期34-39,共6页
福香占是新育成的优质、抗稻瘟病、长粒籼稻品种,具有较好的推广潜力。本研究旨在利用基因编辑技术快速创制福香占糯稻材料。通过筛选和优化靶点序列,成功地利用CRISPR/Cas9技术敲除水稻颗粒结合型淀粉合酶基因(Waxy,Wx),获得了Wx基因...
福香占是新育成的优质、抗稻瘟病、长粒籼稻品种,具有较好的推广潜力。本研究旨在利用基因编辑技术快速创制福香占糯稻材料。通过筛选和优化靶点序列,成功地利用CRISPR/Cas9技术敲除水稻颗粒结合型淀粉合酶基因(Waxy,Wx),获得了Wx基因的缺失突变体。通过后代农艺性状和米质鉴定,结果表明敲除材料的淀粉含量从16.3%下降至1.67%~1.81%,达到了糯稻水平。此外,敲除植株在株叶态、产量和抗性方面并没有显著变化。此项研究为福香占的应用推广提供了新的途径,并丰富了抗瘟糯稻的种质资源。
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关键词
基因编辑
糯稻
福香占
颗粒
结合
型
淀粉
合
酶
基因
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职称材料
题名
马铃薯块茎颗粒结合型淀粉合酶基因的克隆及其RNAi载体的构建
被引量:
7
1
作者
刘玉汇
王丽
杨宏羽
余斌
李元铭
张俊莲
王蒂
机构
甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室/甘肃农业大学农学院
甘肃省干旱生境作物学重点实验室
甘肃农业大学生命科学技术学院
甘肃农村发展研究院
出处
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第7期1187-1195,共9页
基金
国家科技支撑计划项目(2012BAD06B03)
国家现代农业产业技术体系建设项目(CARS-10-P18)
甘肃省重大专项(1102NKDM025)资助
文摘
GBSSI是马铃薯块茎中控制直链淀粉合成的关键酶,为培育高支链淀粉含量或纯支链淀粉含量的转基因马铃薯材料,根据GenBank登录号X58453的序列设计特异引物,采用RT-PCR技术获得马铃薯块茎GBSSI相似基因,并利用生物信息学相关软件分析,预测GBSSI相似基因cDNA序列编码的蛋白质结构和功能。结果表明,克隆的GBSSI相似基因与报道的GBSSI基因序列相似性达到99.78%,其开放阅读框长1824bp,编码607个氨基酸,具有许多重要功能位点。三级结构预测结果表明,该蛋白具有淀粉合成功能,基因序列已注册到GenBank,序列登录号为EU403426。以此基因CDS内542bp的靶标序列作为干扰区段,扩增GBSSI的正反向基因片段,并引入237bp的内含子序列,构建由Patatin启动子驱动的具有"正义基因片段gbssA-内含子VP1-ABI3-like protein-反义基因片段gbssB"的植物干扰表达载体pBI121g-PgABI。本研究结果将为淀粉合成的进一步研究和高支链淀粉含量或纯支链淀粉含量的马铃薯品种的培育奠定基础。
关键词
马铃薯
颗粒
结合
型
淀粉
合
酶
基因克隆
序列分析
RNAI载体
Keywords
Potato
GBSSI gene
Gene cloning
Sequence analysis
RNA interference vector
分类号
S532 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
百合GBSS基因RNAi载体构建
被引量:
1
2
作者
张进忠
机构
广西农业科学院花卉研究所
出处
《农学学报》
2022年第7期69-73,共5页
基金
广西科技计划项目“隆林县绿色生态农业一体化科技创新创业与服务”(桂科AD19110114)
广西农业科学院基本科研业务专项“百合组培鳞茎培育研究”(桂农科2019M26)。
文摘
为研究GBSS基因在百合鳞茎形成及发育过程中影响鳞茎淀粉合成代谢的作用机理,构建干扰GBSS基因的RNAi载体为其在转录水平沉默表达提供材料。从百合鳞片克隆GBSS基因300 bp的保守序列,通过BP与LR反应将该序列正反向连接到干扰载体pJawohl8-RNAi中,经过酶切反应鉴定所构建RNAi表达载体的正确性。实验成功构建pDONR221-GBSS入门克隆与pJawohl8-RNAi-GBSS表达载体,为在百合鳞茎淀粉合成代谢途径中研究GBSS基因功能及对鳞茎发育的影响提供了材料与思路。
关键词
百
合
GBSS基因
鳞茎
淀粉
代谢
机理
颗粒结合淀粉合酶
RNAI
表达载体
鳞茎发育
Keywords
Lilium
GBSS gene
bulb starch
metabolism
mechanism
granule-bound starch synthase
RNAi
expression vector
bulb development
分类号
Q812 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
水稻糯性突变体r162的鉴定与基因定位
被引量:
2
3
作者
何羽喆
徐善斌
陈彦宇
杨雪
段二超
滕烜
王益华
董慧
万建民
机构
南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室/江苏省现代作物生产协同创新中心
中国农业科学院作物科学研究所
出处
《浙江大学学报(农业与生命科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第3期368-381,共14页
基金
江苏省重点研发计划项目(BE2022383)。
文摘
直链淀粉是影响稻米食味品质和外观品质的重要因素,主要由Waxy(Wx)基因编码的颗粒结合淀粉合酶Ⅰ(granule-bound starch synthaseⅠ, GBSSⅠ)介导合成。本研究从宁粳2号的甲基磺酸乙酯(ethyl methanesulfonate,EMS)诱变材料中筛选到了一个糯性突变体r162,与野生型相比,其籽粒外观呈不透明的云雾状,种子和糙米的粒长、粒宽以及千粒重显著下降。通过扫描电镜对淀粉形态进行观察,发现突变体的淀粉颗粒上存在孔洞。半薄切片碘染结果表明,突变体r162发育时期胚乳的造粉体排列结构与野生型相似,但碘染后颜色更浅。理化性质分析发现,突变体r162的总淀粉、总蛋白质和总脂肪含量与野生型相比无显著差异,但是表观直链淀粉含量极显著下降、胶稠度极显著增加,糊化特性发生明显改变,并且淀粉的崩解值、回生值、回复值以及米粉在尿素中的膨胀体积均小于野生型。通过基因定位和测序发现,突变基因Wx位于第6号染色体短臂上,Wx基因第7个内含子的第1个碱基(Int7-1)由鸟嘌呤(G)替换为腺嘌呤(A),造成Wx基因的编码区存在10个碱基的缺失,导致其编码的GBSSⅠ蛋白自第256位氨基酸起出现错误翻译,使蛋白质翻译提前终止,因此将该等位变异命名为Wx-r162。进一步通过蛋白质印迹法检测发现,突变体中的GBSSⅠ蛋白水平极显著下降。酶活性测定也证实,突变体r162中GBSSⅠ活性明显降低。综上所述,Wx-r162基因被视为一个新的等位变异,这种突变导致GBSSⅠ活性下降,进而造成突变体r162表观直链淀粉含量降低和籽粒表现出不透明的表型。
关键词
水稻
稻米品质
直链
淀粉
含量
Waxy(Wx)基因
颗粒结合淀粉合酶
Ⅰ
Keywords
rice
grain quality
amylose content
Waxy(Wx)gene
granule-bound starch synthaseⅠ
分类号
S331 [农业科学—作物遗传育种]
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职称材料
题名
利用基因编辑技术创制福香占糯稻新种质
4
作者
魏林艳
樊佳星
张敏
王进兰
谢鸿光
魏毅东
张建福
机构
福建省农业科学院水稻研究所/水稻国家工程实验室
福建农林大学农学院
出处
《福建农业科技》
CAS
2023年第10期34-39,共6页
基金
福建省科技计划公益类项目(2023R1021001)
福建省科技计划项目——中央引导项目(2022L3018)
福建省科技重大专项(2022NZ030014)。
文摘
福香占是新育成的优质、抗稻瘟病、长粒籼稻品种,具有较好的推广潜力。本研究旨在利用基因编辑技术快速创制福香占糯稻材料。通过筛选和优化靶点序列,成功地利用CRISPR/Cas9技术敲除水稻颗粒结合型淀粉合酶基因(Waxy,Wx),获得了Wx基因的缺失突变体。通过后代农艺性状和米质鉴定,结果表明敲除材料的淀粉含量从16.3%下降至1.67%~1.81%,达到了糯稻水平。此外,敲除植株在株叶态、产量和抗性方面并没有显著变化。此项研究为福香占的应用推广提供了新的途径,并丰富了抗瘟糯稻的种质资源。
关键词
基因编辑
糯稻
福香占
颗粒
结合
型
淀粉
合
酶
基因
Keywords
Gene editing
Glutinous rice
Fuxiangzhan(FXZ)
Granule-bound starch gynthase gene
分类号
S511.32 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
马铃薯块茎颗粒结合型淀粉合酶基因的克隆及其RNAi载体的构建
刘玉汇
王丽
杨宏羽
余斌
李元铭
张俊莲
王蒂
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
7
在线阅读
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职称材料
2
百合GBSS基因RNAi载体构建
张进忠
《农学学报》
2022
1
在线阅读
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职称材料
3
水稻糯性突变体r162的鉴定与基因定位
何羽喆
徐善斌
陈彦宇
杨雪
段二超
滕烜
王益华
董慧
万建民
《浙江大学学报(农业与生命科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2024
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
4
利用基因编辑技术创制福香占糯稻新种质
魏林艳
樊佳星
张敏
王进兰
谢鸿光
魏毅东
张建福
《福建农业科技》
CAS
2023
0
在线阅读
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职称材料
已选择
0
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参考文献
引证文献
统计分析
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