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敲低肿瘤细胞来源的颗粒体蛋白前体抑制C57BL/6J小鼠黑色素移植瘤的生长
1
作者 李娜 杜庆林 +1 位作者 张伟 马小京 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期799-809,共11页
颗粒体蛋白前体(progranulin,PGRN)在多种肿瘤中过表达。但PGRN在黑色素瘤发生发展中的作用尚无报道。为探究PGRN在黑色素肿瘤中的作用,本研究采用CRISPR-Cas9基因编辑技术建立了稳定敲低PGRN的小鼠黑色素瘤B16细胞株B16-PGRNlow。MTS法... 颗粒体蛋白前体(progranulin,PGRN)在多种肿瘤中过表达。但PGRN在黑色素瘤发生发展中的作用尚无报道。为探究PGRN在黑色素肿瘤中的作用,本研究采用CRISPR-Cas9基因编辑技术建立了稳定敲低PGRN的小鼠黑色素瘤B16细胞株B16-PGRNlow。MTS法和Brd U掺入结合流式细胞(计量)术分析证明,敲低PGRN不影响B16细胞的细胞周期和增殖。将B16-ctrl(对照)和B16-PGRNlow细胞分别皮下接种野生型(WT)和PGRN敲除(KO)的C57BL/6J小鼠,比较观察黑色素移植瘤体积大小。移植瘤形成20 d后,与B16-ctrl细胞接种的移植瘤比较,无论在WT还是在KO荷瘤小鼠,B16-PGRNlow形成的移植瘤体积明显减小(WT鼠:P<0.05;KO鼠:P<0.01)。然而,比较B16-PGRNlow或B16-ctrl在WT鼠与KO鼠形成的移植瘤体积大小,并无显著差异,提示B16肿瘤细胞PGRN而非宿主PGRN影响移植瘤的生长。流式细胞术分析显示,在荷B16-PGRNlow移植瘤的WT型小鼠脾和淋巴结中,CD4+、CD8+T细胞数(百分比)比荷B16-ctrl移植瘤的WT鼠脾和淋巴结的CD4+、CD8+T细胞数明显增多(P<0.05,P<0.01),而在KO鼠却未见明显差异。上述结果证明,敲低肿瘤细胞PGRN可抑制黑色素移植瘤的生长。上述结果还提示,抑制PGRN在黑色瘤的表达可引起脾和淋巴结CD4+和CD8+T细胞增加,提高宿主的细胞免疫能力。其机制尚待进一步研究。本文的发现为PGRN作为黑色素瘤治疗的潜在靶点提供了新证据。 展开更多
关键词 颗粒体蛋白前体 黑色素瘤 CRISPR-Cas9 CD4+T细胞 CD8+T细胞
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过表达PGRN抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤 被引量：11
2
作者 尚立群 张永庆 +1 位作者 苗毅 杨淑梅 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期877-883,共7页
目的:探讨颗粒体蛋白前体(progranulin,PGRN)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人肺泡上皮A549细胞和HPAEpi C细胞增殖、凋亡及炎症的影响。方法:实验分为4组:对照(control)组为正常培养的细胞;LPS组用LPS(10 mg/L)处理;PGRN+LPS... 目的:探讨颗粒体蛋白前体(progranulin,PGRN)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人肺泡上皮A549细胞和HPAEpi C细胞增殖、凋亡及炎症的影响。方法:实验分为4组:对照(control)组为正常培养的细胞;LPS组用LPS(10 mg/L)处理;PGRN+LPS组在转染pc DNA3.1-PGRN质粒后加入LPS处理;pc DNA3.1+LPS组在转染pc DNA3.1-EGFP质粒后加入LPS处理。MTT试剂盒检测细胞活力;Brd U掺入实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-q PCR和Western blot分别检测PGRN的mRNA和蛋白表达;Western blot检测caspase-3、Bcl-2、Bax、IL-1β、IL-6、TNF-α、p65和p-IκB-α的蛋白水平。结果:与对照组相比,LPS组的细胞增殖率下降(P<0.05),凋亡率上升(P<0.05),caspase-3和Bax的蛋白表达上调(P<0.05),Bcl-2的蛋白表达下调(P<0.05),IL-1β、IL-6和TNF-α的蛋白表达上调(P<0.05),p65和p-IκB-α的蛋白水平增加(P<0.05),与LPS组相比,PGRN+LPS组的细胞增殖率上升(P<0.05),凋亡率下降(P<0.05),caspase-3和Bax的蛋白表达下调(P<0.05),Bcl-2的蛋白表达上调(P<0.05),IL-1β、IL-6和TNF-α的蛋白表达下调(P<0.05),p65和p-IκB-α的蛋白水平降低(P<0.05)。结论:PGRN过表达可以减轻LPS诱导的A549细胞和HPAEpi C细胞增殖、凋亡异常及炎症因子产生等损伤,这可能与PGRN参与调控NF-κB信号通路有关。 展开更多
关键词 颗粒体蛋白前体 脂多糖 肺泡上皮细胞 细胞增殖 细胞凋亡 NF-ΚB信号通路
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rhPGRN通过MAPK/PI3K通路调控自噬和内质网应激并促进细胞增殖 被引量：7
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作者 罗瑞 秦启忠 +2 位作者 刘敏 尹丹旸 郭风劲 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1071-1081,共11页
目的:探讨重组人颗粒体蛋白前体(rhPGRN)对人软骨细胞C28I2和小鼠巨噬细胞RAW264. 7增殖、自噬和内质网应激(ERS)的影响及作用机制。方法:采用Ni-NTA琼脂糖树脂对组氨酸标签蛋白进行特异性亲和纯化,通过考马斯亮蓝染色、BCA法和Western ... 目的:探讨重组人颗粒体蛋白前体(rhPGRN)对人软骨细胞C28I2和小鼠巨噬细胞RAW264. 7增殖、自噬和内质网应激(ERS)的影响及作用机制。方法:采用Ni-NTA琼脂糖树脂对组氨酸标签蛋白进行特异性亲和纯化,通过考马斯亮蓝染色、BCA法和Western blot验证目的蛋白的浓度和纯度。将细胞随机分为对照组、rhPGRN组、U0126组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、rhPGRN+U0126、rhPGRN+3-MA、rhPGRN+巴弗洛霉素A1(Baf-A1)和rhPGRN+4-苯基丁酸(4-PBA)组,采用细胞计数法、Western blot和RT-qPCR检测rhPGRN对C28I2和RAW264. 7两种不同类型细胞增殖、自噬和ERS的影响。结果:(1)在含有His标签的PGRN稳转细胞株中成功提取高纯度、具有生物活性的人源重组蛋白rhPGRN。(2)rhPGRN能促进C28I2和RAW264. 7细胞的增殖,促进细胞周期相关分子(PCNA、cyclin B1和cyclin D1)的mRNA表达(P<0. 05),上调细胞周期调控蛋白Ki67表达,并提高增殖相关信号分子ERK和Akt蛋白的磷酸化水平(P<0. 05)。(3)ERK通路抑制剂U0126抑制了rhPGRN诱导的细胞增殖、自噬和ERS(P<0. 05);使用3-MA抑制PI3K/Akt通路后,rhPGRN诱导的细胞自噬被显著抑制(P<0. 05);自噬抑制剂Baf-A1和ERS抑制剂4-PBA显著下调了rhPGRN诱导的Ki67蛋白表达(P<0. 05)。结论:rhPGRN通过MAPK和PI3K/Akt通路调控自噬和ERS,从而促进C28I2和RAW264. 7细胞增殖。 展开更多
关键词 重组人颗粒体蛋白前体 真核表达 细胞增殖 自噬 内质网应激
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