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橡胶草顺式异戊烯基转移酶基因的克隆与原核表达
被引量：
6
1
作者
王秀珍
赵丽娟
+4 位作者
赵李婧
李永梅
袁彬青
闫洁
祝建波
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第8期84-91,共8页
克隆新疆野生橡胶草顺式异戊烯转移酶基因,对其进行生物信息学分析,构建该基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白,为进一步研究该基因的功能和植物体内天然橡胶合成分子机制奠定基础。采用同源克隆法结合RT-PCR技术获得目的...
克隆新疆野生橡胶草顺式异戊烯转移酶基因,对其进行生物信息学分析,构建该基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白,为进一步研究该基因的功能和植物体内天然橡胶合成分子机制奠定基础。采用同源克隆法结合RT-PCR技术获得目的基因,测序正确后将该基因片段连接到原核表达载体pET-30a中,转化大肠杆菌BL21并诱导表达。结果表明:该基因开放阅读框为927bp,编码308个氨基酸,推测的蛋白分子质量为34.9ku,理论等电点为8.74;具有cis-异戊烯基转移酶的5个高度保守区,属于cis-IPPS superfamily蛋白家族;系统进化树表明,橡胶草顺式异戊烯基转移酶与短角蒲公英的亲缘关系最近;经IPTG诱导和SDS-PAGE检测,所构建的原核表达载体表达的融合蛋白与预期蛋白相符合。可见,利用RT-PCR技术从橡胶草叶片中克隆得到顺式异戊烯转移酶基因,成功构建原核表达载体,并使其在大肠杆菌中得到表达。
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关键词
橡胶草
顺式异戊烯转移酶
序列分析
原核表达
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职称材料
题名
橡胶草顺式异戊烯基转移酶基因的克隆与原核表达
被引量：
6
1
作者
王秀珍
赵丽娟
赵李婧
李永梅
袁彬青
闫洁
祝建波
机构
新疆石河子大学生命科学学院
出处
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第8期84-91,共8页
基金
国家自然科学基金(31360060)
文摘
克隆新疆野生橡胶草顺式异戊烯转移酶基因,对其进行生物信息学分析,构建该基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白,为进一步研究该基因的功能和植物体内天然橡胶合成分子机制奠定基础。采用同源克隆法结合RT-PCR技术获得目的基因,测序正确后将该基因片段连接到原核表达载体pET-30a中,转化大肠杆菌BL21并诱导表达。结果表明:该基因开放阅读框为927bp,编码308个氨基酸,推测的蛋白分子质量为34.9ku,理论等电点为8.74;具有cis-异戊烯基转移酶的5个高度保守区,属于cis-IPPS superfamily蛋白家族;系统进化树表明,橡胶草顺式异戊烯基转移酶与短角蒲公英的亲缘关系最近;经IPTG诱导和SDS-PAGE检测,所构建的原核表达载体表达的融合蛋白与预期蛋白相符合。可见,利用RT-PCR技术从橡胶草叶片中克隆得到顺式异戊烯转移酶基因,成功构建原核表达载体,并使其在大肠杆菌中得到表达。
关键词
橡胶草
顺式异戊烯转移酶
序列分析
原核表达
Keywords
Taraxacum kok-saghyz Rodin
Cis-prenyltransferase
Sequence analysis
Prokaryotic expression
分类号
Q943.2 [生物学—植物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
橡胶草顺式异戊烯基转移酶基因的克隆与原核表达
王秀珍
赵丽娟
赵李婧
李永梅
袁彬青
闫洁
祝建波
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
6
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