小菜蛾鞣化激素基因克隆及其功能分析 被引量：4

1

作者 马小丽 何玮毅 +5 位作者 尤燕春 李晓静 徐秀凤 胡玉兰 杨广 尤民生 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1101-1109,共9页

鞣化激素是调节昆虫表皮骨化和翅膀发育的一种神经激素，尽管已经在许多不同种昆虫上克隆了鞣化激素基因，但是关于小菜蛾Plutella xylostella鞣化激素及其基因的研究至今未见报道。本研究克隆了两个小菜蛾鞣化激素基因Pxbursα和Pxbur... 鞣化激素是调节昆虫表皮骨化和翅膀发育的一种神经激素，尽管已经在许多不同种昆虫上克隆了鞣化激素基因，但是关于小菜蛾Plutella xylostella鞣化激素及其基因的研究至今未见报道。本研究克隆了两个小菜蛾鞣化激素基因Pxbursα和Pxbursβ（GenBank登录号分别为KF498645和KF498646）全长cDNA，其序列长度分别为537bp和360bp，与已报道的其他昆虫的鞣化激素氨基酸序列一致性分别为51％～68％和37％～57％。实时定量PCR分析发现Pxbursα和Pxbursβ均在蛹期表达量高，而在幼虫期和成虫期的表达量低。以Pxbursα部分序列的双链RNA（dsRNA）饲喂小菜蛾4龄末期幼虫，发现蛹期Pxbursα的表达受到了显著抑制，小菜蛾的发育停滞在蛹期而无法正常羽化，并最终死亡。由此推测，小菜蛾鞣化激素基因在蛹期的大量表达对其生长发育和羽化具有重要的作用。 展开更多

关键词 小菜蛾 鞣化激素 羽化 基因表达 实时定量PCR RNA干扰

在线阅读 下载PDF 职称材料

禾谷缢管蚜鞣化激素基因克隆及功能分析 被引量：3

2

作者 刘孝明 燕赛英 +4 位作者 孙成贤 高杜军 杜孟芳 安世恒 尹新明 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期103-114,共12页

【目的】探讨禾谷缢管蚜Rhopalosiphum padi(Linnaeus)鞣化激素基因的发育表达模式及功能。【方法】采用转录组测序得到禾谷缢管蚜鞣化激素基因bursicon-α和bursicon-βc DNA序列。通过实时荧光定量PCR方法,分析该基因的发育表达模式... 【目的】探讨禾谷缢管蚜Rhopalosiphum padi(Linnaeus)鞣化激素基因的发育表达模式及功能。【方法】采用转录组测序得到禾谷缢管蚜鞣化激素基因bursicon-α和bursicon-βc DNA序列。通过实时荧光定量PCR方法,分析该基因的发育表达模式。利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)介导bursicon-α和bursicon-β沉默,分析鞣化激素的功能。【结果】序列分析结果显示,禾谷缢管蚜鞣化激素α亚基基因(bursicon-α)c DNA序列开放阅读框为480bp,编码159个氨基酸残基;β亚基基因(bursicon-β)c DNA序列开放阅读框为417 bp,编码138个氨基酸残基。时序表达分析表明,鞣化激素两个亚基基因在禾谷缢管蚜整个发育期均有表达,以1龄若蚜期表达量最高;成蚜有翅个体中表达量显著高于无翅个体。RNAi介导的bursicon-α和bursicon-β沉默均能显著抑制禾谷缢管蚜成蚜表皮的黑化。【结论】研究结果表明,鞣化激素在禾谷缢管蚜体壁黑化中发挥着重要作用。该结果为进一步研究鞣化激素在蚜虫生长发育过程中的生理功能提供了基础资料。 展开更多

关键词 禾谷缢管蚜 鞣化激素 表皮鞣化 发育表达模式 荧光定量PCR RNA干扰

在线阅读 下载PDF 职称材料

南亚实蝇鞣化激素基因的克隆与表达分析 被引量：1

3

作者 张贺贺 张琪文 +2 位作者 林嘉 季清娥 陈家骅 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1237-1246,共10页

【目的】克隆南亚实蝇Zeugodacus tau鞣化激素基因,分析其分子特征及时空表达模式,为探索其生理功能奠定基础。【方法】利用同源克隆和RACE技术从南亚实蝇刚羽化成虫中克隆鞣化激素基因bursicon-α和bursicon-β的全长cDNA序列,并用邻接... 【目的】克隆南亚实蝇Zeugodacus tau鞣化激素基因,分析其分子特征及时空表达模式,为探索其生理功能奠定基础。【方法】利用同源克隆和RACE技术从南亚实蝇刚羽化成虫中克隆鞣化激素基因bursicon-α和bursicon-β的全长cDNA序列,并用邻接法(neighbor-joining method)与其他昆虫同源序列构建系统发育进化树。利用荧光定量PCR技术检测这两个基因在南亚实蝇不同发育阶段(卵、1-3龄幼虫、预蛹、蛹和刚羽化成虫)的表达特性。【结果】克隆获得南亚实蝇鞣化激素基因bursicon-α(GenBank登录号:MH421861)和bursicon-β(GenBank登录号:MH421862)。bursicon-α基因开放阅读框为551 bp,编码183个氨基酸;bursicon-β基因开放阅读框为467 bp,编码156个氨基酸。基于两个鞣化激素基因的氨基酸序列的系统发育树分析显示,南亚实蝇Bursicon-α与Bursicon-β均与瓜实蝇Zeugodacus cucurbitae的同源蛋白亲缘关系最近,且与其他双翅目昆虫的同源蛋白聚为一类,形成独立的分支。荧光定量PCR结果表明,两个基因在南亚实蝇各龄期均有表达,均在第5天蛹和刚羽化成虫翅伸展时期表达量最高。【结论】bursicon-α和bursicon-β基因在南亚实蝇不同发育阶段表达量不同,推测其在南亚实蝇成虫表皮鞣化和翅的形成中发挥着重要作用。本研究为进一步探索鞣化激素在南亚实蝇生长过程中表皮的骨化、翅的重建等方面的功能机制奠定了基础。 展开更多

关键词 南亚实蝇 鞣化激素 表皮骨化 基因表达 翅伸展 系统发育

在线阅读 下载PDF 职称材料

昆虫鞣化激素研究进展 被引量：5

4

作者 朱斌 刘孝明 +2 位作者 杜孟芳 尹新明 安世恒 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1469-1479,共11页

鞣化激素是调控昆虫体壁黑化及翅伸展的一类激素,是由BURS和PBURS两个亚基组成的一种异源二聚体蛋白质。BURS和PBURS亚基在结构及其进化上相对较为保守,氨基酸序列中均含有11个半胱氨酸残基。鞣化激素主要是在胸腹神经节中合成的,一旦... 鞣化激素是调控昆虫体壁黑化及翅伸展的一类激素,是由BURS和PBURS两个亚基组成的一种异源二聚体蛋白质。BURS和PBURS亚基在结构及其进化上相对较为保守,氨基酸序列中均含有11个半胱氨酸残基。鞣化激素主要是在胸腹神经节中合成的,一旦释放到血淋巴就与其受体LGR2结合进而激活cAMP/PKA信号,从而促进酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的磷酸化。活化后的TH将酪氨酸(tyrosine)转变为多巴(DOPA),引起昆虫表皮鞣化。同时,cAMP/PKA信号也引起翅真皮细胞凋亡从而促进翅的伸展。除了鞣化激素异聚体调控表皮鞣化及翅的伸展外,BURS亚基或PBURS亚基组成的同源二聚体经IMD路径,激活转录因子Relish调控昆虫的免疫反应。本文就鞣化激素分子结构特性、作用机制及功能等方面的研究进展进行了综述,旨在为进一步研究昆虫鞣化激素提供借鉴和参考。 展开更多

关键词 昆虫 鞣化激素 异源二聚体 骨化 翅展 免疫反应

在线阅读 下载PDF 职称材料

桃蚜鞣化激素基因克隆与表达分析 被引量：5

5

作者 张超 杨洪 +2 位作者 杨茂发 喻会平 张伟 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2017年第11期1244-1250,共7页

Bursicon是调节昆虫表皮硬化及展翅的激素类蛋白,它在昆虫表皮硬化和翅伸展过程中起着关键作用。本研究克隆获得桃蚜Bursicon基因(burs-α和burs-β)全长,分别命名为Mpburs-α(GenBank登录号:MF083566)和Mpburs-β(GenBank登录号:MF0835... Bursicon是调节昆虫表皮硬化及展翅的激素类蛋白,它在昆虫表皮硬化和翅伸展过程中起着关键作用。本研究克隆获得桃蚜Bursicon基因(burs-α和burs-β)全长,分别命名为Mpburs-α(GenBank登录号:MF083566)和Mpburs-β(GenBank登录号:MF083567)。Mpburs-α开放阅读框长483bp,编码160个氨基酸。其相对分子量为17.59kDa,分子式为C_(759)H_(1204)N_(210)O_(232)S_(19);理论等电点为7.96,Mpburs-β开放阅读框长417bp,编码138个氨基酸。其相对分子量为15.45kDa,分子式为C672H1072N180O212S12;理论等电点为4.84。分子系统进化树分析表明,桃蚜与豌豆蚜Acyrthosiphon pisum和麦双尾蚜Diuraphis noxia具有较近的亲缘关系。RT-qPCR结果表明:Mpburs-α和Mpburs-β在桃蚜各龄期均有表达,以1龄若蚜期表达量最高;成蚜有翅个体中表达量显著高于无翅个体。推测Bursicon在桃蚜翅的形成中发挥着重要作用。研究结果可为续研究Bursicon在桃蚜蜕皮后表皮的骨化、翅的形成方面相关的功能机制奠定基础。 展开更多

关键词 桃蚜 鞣化激素基因 克隆 表达分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

家蚕鞣化激素基因对翅展及繁殖力的调控作用 被引量：2

6

作者 杨佳鹏 龙贵云 +4 位作者 金道超 戴仁怀 吴丽红 周操 杨熙彬 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期558-565,共8页

【目的】昆虫鞣化激素(Bursicon)是由神经系统分泌的一种异源二聚体神经肽,对昆虫表皮鞣化、翅展等功能具有调控作用。本研究旨在探究鞣化激素基因与家蚕Bombyx mori翅发育及对繁殖力相关基因的关系,明确其对翅展和繁殖力的调控作用。... 【目的】昆虫鞣化激素(Bursicon)是由神经系统分泌的一种异源二聚体神经肽,对昆虫表皮鞣化、翅展等功能具有调控作用。本研究旨在探究鞣化激素基因与家蚕Bombyx mori翅发育及对繁殖力相关基因的关系,明确其对翅展和繁殖力的调控作用。【方法】采用RNAi技术,分别注射Bursicon基因的dsRNA(dsBmBurs-α,dsBmBurs-β和dsBmBurs-α+dsBmBurs-β)到家蚕1日龄蛹,以注射dsGFP为对照。观察RNAi后家蚕表型,并计算家蚕单雌产卵量;利用实时定量PCR技术检测Bursicon基因RNAi后家蚕羽化后24 h成虫中翅发育相关基因(BmWg,BmFt,BmFj和BmDs)和RNAi 48和72 h后家蚕蛹中繁殖相关基因(卵黄原蛋白基因BmVg和卵黄原蛋白受体基因BmVgR)的表达水平。【结果】家蚕Bursicon基因被RNAi后,羽化后24 h的家蚕翅不能正常伸展,dsBmBurs-α,dsBmBurs-β和dsBmBurs-α+dsBmBurs-β处理组的翅畸形率分别为93.33%,96.67%和96.43%;平均单雌产卵量分别为312.67,332.00和284.00粒,显著低于对照组(406.00粒)。RNAi干扰Bursicon基因后,家蚕Bursicon基因BmBurs-α和BmBurs-β表达量显著下调,其相关基因BmWg,BmFt,BmFj,BmDs,BmVg和BmVgR的表达水平均显著低于对照组。【结论】鞣化激素基因参与调节家蚕翅发育相关基因的转录水平来调控翅展。同时,它们还可以参与调节繁殖相关基因BmVg和BmVgR的表达,从而影响家蚕的繁殖。 展开更多

关键词 家蚕 鞣化激素 翅展 繁殖力 Hippo信号通路

在线阅读 下载PDF 职称材料

棉铃虫鞣化激素基因克隆及分子特性分析

7

作者 马星宇 嵇玉洁 +5 位作者 薛玉莹 杜孟芳 魏纪珍 尹新明 刘晓光 安世恒 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期589-599,共11页

【目的】获得棉铃虫鞣化激素2个亚基(α亚基和β亚基)基因序列,分析其分子特性和表达模式,研究棉铃虫鞣化激素的作用机制奠定基础。【方法】通过生物信息学和分子生物学技术分别得到棉铃虫鞣化激素α和β亚基cDNA序列,将棉铃虫及NCBI中... 【目的】获得棉铃虫鞣化激素2个亚基(α亚基和β亚基)基因序列,分析其分子特性和表达模式,研究棉铃虫鞣化激素的作用机制奠定基础。【方法】通过生物信息学和分子生物学技术分别得到棉铃虫鞣化激素α和β亚基cDNA序列,将棉铃虫及NCBI中公布的已知其它昆虫鞣化激素α和β亚基氨基酸序列分别整理分析,利用MEGA7(7.0.14)软件的Jones-Taylor-Thornton(JTT)模型构建系统进化树并进行聚类分析,qRT-PCR分别检测两亚基在棉铃虫不同生长发育阶段的表达模式。【结果】分别获得了棉铃虫鞣化激素α亚基与β亚基核苷酸序列。其中α亚基(GenBank登录号:AHM0247472.1)cDNA片段长694 bp,开放阅读框480 bp,编码159个氨基酸残基,预测该蛋白质分子量为17.7 kDa。该基因在卵期第3 d、1龄幼虫第1 d、3~5龄幼虫第1 d、2和3龄末蜕皮期(3M和4M)、蛹期第0 d、第3 d和第7 d表达量相对较高。β亚基(GenBank登录号:AHM0247473.1)cDNA片段长779 bp,开放阅读框420 bp,编码139个氨基酸残基,预测该蛋白质分子量为15.9 kDa。该基因在卵期至2龄末蜕皮期(3M)、3龄幼虫第2 d、4~5龄幼虫第1 d、蛹期第1 d至羽化前表达量相对较高。鞣化激素α亚基和β亚基基因均在棉铃虫胸神经节中相对表达量最高,咽下神经节次之,脑部和腹部相对表达量较弱。【结论】鞣化激素在鳞翅目昆虫中具有较高的保守性;α亚基和β亚基基因主要在棉铃虫卵期、初孵幼虫期、蛹期和新羽化成虫期发挥作用;鞣化激素在棉铃虫幼虫体内主要由胸部神经节转录合成。 展开更多

关键词 棉铃虫 鞣化激素 Α亚基 Β亚基 基因克隆

在线阅读 下载PDF 职称材料

棉铃虫鞣化激素β亚基参与脂肪组织免疫的相关功能基因表达模式

8

作者 嵇玉洁 马星宇 +5 位作者 宋永辉 杜孟芳 魏纪珍 尹新明 刘晓光 安世恒 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期600-607,共8页

【目的】研究棉铃虫鞣化激素β亚基参与脂肪组织免疫的相关功能基因表达模式。【方法】利用多肽激素体外处理与活体RNAi验证,将保存的鞣化激素β亚基同聚体重组蛋白,体外处理棉铃虫幼虫脂肪体组织,分别处理0、0.5、1和3 h,及体内注射鞣... 【目的】研究棉铃虫鞣化激素β亚基参与脂肪组织免疫的相关功能基因表达模式。【方法】利用多肽激素体外处理与活体RNAi验证,将保存的鞣化激素β亚基同聚体重组蛋白,体外处理棉铃虫幼虫脂肪体组织,分别处理0、0.5、1和3 h,及体内注射鞣化激素β亚基dsRNA,72 h后取样,通过qRT-PCR检测棉铃虫幼虫脂肪体相关免疫基因表达模式。【结果】鞣化激素β亚基同源二聚体蛋白体外处理棉铃虫幼虫脂肪体后,免疫相关基因cecropin1、cecropin2、cecropin3、attacin、cecropin D、gloverin、defensin、moricin和lebocin在0.5 h转录水平迅速上升,随后在1 h恢复至初始水平,在3 h与初始转录水平亦无显著变化,具有相同的变化趋势;棉铃虫体内注射鞣化激素Burs-β亚基dsRNA,72 h后,moricin转录水平无显著差异,cecropin1、cecropin2、cecropin3、attacin、cecropin D、gloverin、defensin、moricin和lebocin等8个免疫相关基因转录水平的表达均下调。【结论】鞣化激素β亚基同聚体蛋白质能够参与棉铃虫的免疫相关基因转录。 展开更多

关键词 棉铃虫 鞣化激素β亚基 免疫反应 RNAI

在线阅读 下载PDF 职称材料

米虾鞣化激素的表达特征分析及体外合成

9

作者 任丽琦 翁洁羊 +2 位作者 王鑫 孙金生 李冉 《安徽农业科学》 CAS 2018年第12期112-117,共6页

[目的]观察米虾的胚胎发育过程。制备米虾发育过程中鞣化激素(Bursicon)的α和β这2个亚基基因蛋白并探讨其在不同组织中的表达特征。[方法]利用光学显微镜观察米虾的胚胎发育过程。根据转录组提示,PCR扩增2个亚基基因的编码区。目的片... [目的]观察米虾的胚胎发育过程。制备米虾发育过程中鞣化激素(Bursicon)的α和β这2个亚基基因蛋白并探讨其在不同组织中的表达特征。[方法]利用光学显微镜观察米虾的胚胎发育过程。根据转录组提示,PCR扩增2个亚基基因的编码区。目的片段经双酶切后分别连入载体p ET-28a-c(+)中,构建表达载体p ET-28a-α、p ET-28a-β。重组质粒转入Rosetta表达菌后用IPTG诱导其表达。采用实时荧光定量PCR检测bursicon-α和bursicon-β在米虾的眼柄、心、胸神经节和腹神经节4个组织中的表达差异。[结果]米虾胚胎发育阶段包括卵裂期、囊胚期、原肠期、前无节幼体期、后无节幼体期、复眼色素形成期以及蚤状幼体期共7个阶段。SDS-PAGE凝胶电泳检测发现体外原核系统能够成功表达Bursα和Bursβ,二者的相对分子质量约为15 k D。此外表达特征分析显示bursicon-α和bursicon-β在米虾腹神经节中的相对表达量最高,胸神经节中的相对表达量次之,在眼柄和心中的相对表达量较低。[结论]米虾中鞣化激素的2个亚基基因主要是在其腹神经节中表达,属于神经多肽激素,能够分泌到血淋巴中发挥调节作用;体外原核表达系统获得重组蛋白Bursα和Bursβ,为进一步研究其功能及应用于生产奠定了基础。 展开更多

关键词 米虾 鞣化激素 原核表达 组织表达 实时荧光定量PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

棉铃虫酪氨酸羟化酶基因的分子特性及功能分析 被引量：5

10

作者 姚雪 李琳红 +5 位作者 魏纪珍 席玉强 杜孟芳 崔江宽 安世恒 刘晓光 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期294-303,共10页

【目的】酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase, TH)是黑色素形成的关键酶,在昆虫表皮骨化过程中扮演重要角色。本研究旨在获得棉铃虫Helicoverpa armigera TH基因序列,并研究其分子特性、表达模式和功能,为更深入探析该基因作用机理奠定... 【目的】酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase, TH)是黑色素形成的关键酶,在昆虫表皮骨化过程中扮演重要角色。本研究旨在获得棉铃虫Helicoverpa armigera TH基因序列,并研究其分子特性、表达模式和功能,为更深入探析该基因作用机理奠定基础。【方法】通过生物信息学和分子生物学技术获得了棉铃虫TH基因序列,利用qRT-PCR分析该基因在棉铃虫不同生长发育阶段的表达模式;利用qRT-PCR技术,分别测定了蜕皮激素20E(400 ng/头)处理不同时间和RNAi成功干扰蜕皮激素受体基因(EcR)前提下再用20E(400 ng/头)处理后,棉铃虫5龄幼虫TH表达量变化;采用生物化学方法检测鞣化激素(30μg/mg组织)和环腺苷酸(cAMP, 200 ng/mg组织)处理后棉铃虫幼虫脂肪体中TH活性。【结果】获得了棉铃虫酪氨酸羟化酶基因TH(GenBank登录号:MF440319) cDNA片段,长2 270 bp,开放阅读框1 686 bp,编码561个氨基酸残基。该基因在棉铃虫整个发育期均表达,其中在卵期第3天、2龄幼虫第1天、3-5龄蜕皮期、预蛹期和成虫羽化第1天表达量相对较高。研究还发现,400 ng/头20E注射能够促进TH的转录;在成功干扰并调低幼虫EcR转录水平的前提条件下(对照仅注射dsGFP)再注射20E,对TH表达量无明显影响;而鞣化激素(30μg/mg组织)和cAMP(200 ng/mg组织)均显著提高了TH的酶活性。【结论】20E在转录水平参与了TH的表达;鞣化激素和cAMP均能够提高TH活性,在蛋白水平上对TH进行调控。 展开更多

关键词 棉铃虫 酪氨酸羟化酶 RNA干扰 蜕皮激素 鞣化激素

在线阅读 下载PDF 职称材料

中国米虾bursicon基因的功能及作用机制

11

作者 任丽琦 翁洁羊 +2 位作者 王鑫 孙金生 李冉 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期503-511,共9页

为探讨米虾鞣化激素在其蜕皮周期及表皮角质层形成过程中的作用,采用PCR技术克隆得到了米虾鞣化激素两个亚基基因的开放阅读框(ORF)序列。bursicon-αORF全长441 bp,共编码146个氨基酸;bursicon-βORF全长411 bp,共编码136个氨基酸。利... 为探讨米虾鞣化激素在其蜕皮周期及表皮角质层形成过程中的作用,采用PCR技术克隆得到了米虾鞣化激素两个亚基基因的开放阅读框(ORF)序列。bursicon-αORF全长441 bp,共编码146个氨基酸;bursicon-βORF全长411 bp,共编码136个氨基酸。利用实时荧光定量PCR分析米虾整个蜕皮周期中鞣化激素2个亚基基因的表达特征,结果发现,鞣化激素bursicon-α和bursicon-β在米虾蜕皮周期的各个阶段的相对表达量存在差异,在蜕皮前期(D期)相对表达量开始上升,到D3期时相对表达量最高,蜕皮期E期相对表达量最低。RNA干扰(RNA interference,RNAi)介导bursicon-α和bursicon-β基因沉默后,发现米虾的蜕皮周期延长,表皮角质层明显变薄。结果提示,鞣化激素(Bursicon)与新形成的外骨骼中角质层的加厚与硬化密切相关,进而影响蜕皮时间。 展开更多

关键词 米虾 鞣化激素 表皮鞣化 蜕皮周期 实时荧光定量PCR RNA干扰

在线阅读 下载PDF 职称材料