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金属硫蛋白非融合性原核表达载体的构建被引量：1: 1; 作者谭洁莹付欣李冰《实用医学杂志》 CAS 2008年第14期2370-2372,共3页; 目的:构建表达金属硫蛋白(metallo thionein,MT)的非融合性原核表达载体。方法:以大肠杆菌BL21中的PET-GST-MT质粒为模板,PCR扩增目的片段,双酶切,胶回收纯化,连接至pGEM-T载体扩增,双酶切,亚克隆至pBV220载体,转入大肠杆菌DH-5α中。结... 展开更多; 关键词金属硫蛋白基因重组 pBV220载体非融合表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

α-银环蛇毒素基因的克隆及其非融合型原核表达被引量：5: 2; 作者胡延春张乃生 +3 位作者邓俊良左之才廖玉辉欧阳红生《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期463-469,共7页; 根据文献报道α-银环蛇毒素的氨基酸序列推导出其DNA序列,设计并人工合成两两互补的14条寡核苷酸片段。经片段延伸、PCR、克隆,成功构建α-银环蛇毒素基因克隆质粒;质粒经XbaⅠ和EcoRⅠ双酶切回收后连接于表达载体pET28a(+)中,分别转化B... 展开更多; 关键词 Α-银环蛇毒素基因克隆非融合原核表达免疫原性生物学活性; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪白细胞介素-6基因的非融合原核表达研究被引量：2: 3; 作者张桂红林海波 +7 位作者詹国英廖明任涛罗开健曹伟胜徐成刚江经纬辛朝安《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期474-477,共4页; 用DNA重组技术,将已克隆的猪IL-6基因阅读框片段插入非融合原核表达质粒pBV220中的适当位置,获得重组质粒pBVpIL-6,转化大肠杆菌DH5α后,42℃诱导阳性表达菌。经SDS-PAGE检测发现目的蛋白获得了高效表达,表达量约占总蛋白的20%。表达的... 展开更多; 关键词猪白细胞介素-6基因非融合原核表达 SDS-PAGE ELISA; 在线阅读下载PDF 职称材料

枯草芽孢杆菌植酸酶基因在大肠杆菌中的表达及其对酶热稳定性的影响被引量：8: 4; 作者吴琦王红宁 +2 位作者邹立扣赵海霞刘世贵《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2004年第5期23-27,共5页; 采用PCR法，获得不含有信号肽序列的来源于枯草芽孢杆菌的植酸酶phyC基因的非融合和融合表达片段，分别构建带有T7lac启动子的大肠杆菌的植酸酶pET30NFphyC和pET30FphyC表达载体，并转入大肠杆菌BL21(DE3)。大肠杆菌分别在30℃和25℃经I... 展开更多; 关键词枯草芽孢杆菌植酸酶大肠杆菌热稳定性基因表达诱导温度非融合表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

截短型人胰岛素样生长因子-Ⅰ 在大肠杆菌中的表达、纯化和鉴定被引量：4: 5; 作者刘晓辉梁述文 +2 位作者王伟申泉郭焱《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第5期738-741,共4页; 利用PCR、删除突变和基因重组技术构建了N端缺失3个氨基酸的人胰岛素样生长因子-[des(1-3)IGF-]的表达载体pExSec/IGF,在大肠杆菌蛋白酶缺陷株BL21(DE3)中,通过用IPTG于超常规的12℃低温诱导16h,des(1-3)IGF-获得了可溶性表达。表达水... 展开更多; 关键词截短型胰岛素样生长因子非融合表达纯化; 在线阅读下载PDF 职称材料

传染性法氏囊病病毒HZ96 VP2 cDNA的结构分析及在大肠杆菌中的表达被引量：7: 6; 作者于涟宋坤华 +2 位作者金勇丰李双茂张耀洲《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1999年第2期97-100,共4页; 以随机引物反转录传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）杭州分离株ＨＺ９６基因组合成第１链ｃＤＮＡ。以第１链ｃＤＮＡ为模板，ＰＣＲ扩增ＨＺ９６ＶＰ２ｃＤＮＡ；Ｓａｎｇｅｒ双脱氧法测序ＨＺ９６ＶＰ２ｃＤＮＡ，并对其基... 展开更多; 关键词 IBDV VP2 CDNA 结构分析非融合表达大肠杆菌; 在线阅读下载PDF 职称材料

大鼠神经突起因子的克隆及表达载体的构建被引量：2: 7; 作者于娜黄瑾 +2 位作者仙玲玲潘泽民何玲《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2004年第2期139-142,共4页; 从成年SD大鼠脑组织分离提取总RNA,反转录PCR扩增出鼠神经突起因子(neuritin)cDNA的最大开放阅读框(openingreadingframe,ORF)后,重组于克隆载体pGEM3z上,经PCR、限制内切酶鉴定和DNA测序鉴定,扩增出的cDNA426bp全部核苷酸序列与国外文... 展开更多; 关键词大鼠神经突起因子克隆构建非融合表达载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名金属硫蛋白非融合性原核表达载体的构建被引量：1: 1; 作者谭洁莹付欣李冰; 机构广州医学院实验医学研究中心; 出处《实用医学杂志》 CAS 2008年第14期2370-2372,共3页; 基金广州市科技局重点项目(编号:2003Z2-E0193); 文摘目的:构建表达金属硫蛋白(metallo thionein,MT)的非融合性原核表达载体。方法:以大肠杆菌BL21中的PET-GST-MT质粒为模板,PCR扩增目的片段,双酶切,胶回收纯化,连接至pGEM-T载体扩增,双酶切,亚克隆至pBV220载体,转入大肠杆菌DH-5α中。结果:PCR产物大小符合要求,重组质粒PBV220-MT双酶切鉴定与其一致,测序结果正确。结论:成功构建MT原核表达载体,为下一步从DH-5α-pBV220-MT工程菌中表达并纯化非融合性MT打下基础。; 关键词金属硫蛋白基因重组 pBV220载体非融合表达; Keywords Metallothionein Gene recombination pBV220 vector Non-fusion expression; 分类号 R346 [医药卫生—基础医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名α-银环蛇毒素基因的克隆及其非融合型原核表达被引量：5: 2; 作者胡延春张乃生邓俊良左之才廖玉辉欧阳红生; 机构四川农业大学动物科技学院吉林大学畜牧兽医学院; 出处《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期463-469,共7页; 文摘根据文献报道α-银环蛇毒素的氨基酸序列推导出其DNA序列,设计并人工合成两两互补的14条寡核苷酸片段。经片段延伸、PCR、克隆,成功构建α-银环蛇毒素基因克隆质粒;质粒经XbaⅠ和EcoRⅠ双酶切回收后连接于表达载体pET28a(+)中,分别转化BL21(DE3)、BL21(DE3)Codon plus、BL21(DE3)plysS进行诱导表达,表达产物经Tris/tricine系统进行SDS-PAGE分析。结果表明:该基因已在大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌中进行了非融合表达,其表达量占细菌总蛋白的11.98%,主要以包涵体形式存在;同时对表达条件进行了优化,其表达量可达16.28%。经Western blot分析,在大约8 kDa处出现明显的目的带,与预计蛋白分子量大小一致,说明表达产物与天然α-银环蛇毒素具有相似的免疫原性。表达产物纯化、复性后经动物毒性试验表明:表达的α-银环蛇毒素蛋白具有生物学活性,小鼠腹腔注射其LD50约为1.28μg/g。; 关键词 Α-银环蛇毒素基因克隆非融合原核表达免疫原性生物学活性; Keywords alpha-bungarotoxin gene cloning non-fusion prokaryotic expressions immunogenicity biological activity; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学] S852 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪白细胞介素-6基因的非融合原核表达研究被引量：2: 3; 作者张桂红林海波詹国英廖明任涛罗开健曹伟胜徐成刚江经纬辛朝安; 机构华南农业大学兽医学院禽病室; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期474-477,共4页; 基金广东省科技攻关项目(粤科计字【2003】292号) 华南农业大学校长基金(K03005); 文摘用DNA重组技术,将已克隆的猪IL-6基因阅读框片段插入非融合原核表达质粒pBV220中的适当位置,获得重组质粒pBVpIL-6,转化大肠杆菌DH5α后,42℃诱导阳性表达菌。经SDS-PAGE检测发现目的蛋白获得了高效表达,表达量约占总蛋白的20%。表达的蛋白以包涵体形式存在,包涵体经过变性溶解和复性后用酶联免疫吸附试验(ELISA)做定性定量检测。ELISA结果证实了所表达的蛋白为猪IL-6,复性后具有一定活性,并测出了复性后活性蛋白的浓度。; 关键词猪白细胞介素-6基因非融合原核表达 SDS-PAGE ELISA; Keywords swine interleukin-6 gene non-fusion prokaryotic expression SDS-PAGE ELISA; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名枯草芽孢杆菌植酸酶基因在大肠杆菌中的表达及其对酶热稳定性的影响被引量：8: 4; 作者吴琦王红宁邹立扣赵海霞刘世贵; 机构四川大学生命科学学院四川农业大学动物科技学院雅安; 出处《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2004年第5期23-27,共5页; 文摘采用PCR法，获得不含有信号肽序列的来源于枯草芽孢杆菌的植酸酶phyC基因的非融合和融合表达片段，分别构建带有T7lac启动子的大肠杆菌的植酸酶pET30NFphyC和pET30FphyC表达载体，并转入大肠杆菌BL21(DE3)。大肠杆菌分别在30℃和25℃经IPTG诱导后实现了植酸酶的表达，非融合和融合植酸酶的表达量分别约占菌体总蛋白的13％和15％，分子量分别为40．13kDa和43．27kDa。表达产物具有植酸酶的生物学活性，非融合植酸酶和融合植酸酶的最适反应温度分别为50℃和75℃，经90℃处理10min，残留酶活性分别为37℃时的31．9％和75．7％。分析表明，含13个氨基酸残基的融合片段有助于植酸酶的表达和酶热稳定性的提高。; 关键词枯草芽孢杆菌植酸酶大肠杆菌热稳定性基因表达诱导温度非融合表达; 分类号 R378.21 [医药卫生—病原生物学] Q786 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名截短型人胰岛素样生长因子-Ⅰ 在大肠杆菌中的表达、纯化和鉴定被引量：4: 5; 作者刘晓辉梁述文王伟申泉郭焱; 机构山西大学生命科学系生物工程实验室; 出处《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第5期738-741,共4页; 基金山西省自然科学基金!( 95 10 2 9) 山西省留学归国科研基金( 9412 4)资助项目; 文摘利用PCR、删除突变和基因重组技术构建了N端缺失3个氨基酸的人胰岛素样生长因子-[des(1-3)IGF-]的表达载体pExSec/IGF,在大肠杆菌蛋白酶缺陷株BL21(DE3)中,通过用IPTG于超常规的12℃低温诱导16h,des(1-3)IGF-获得了可溶性表达。表达水平达到可溶性细菌总蛋白约15%。经超滤和SephadexG-50凝胶过滤,des(1-3)IGF-纯度分别达到49%和82%,且表现出明显的免疫学活性和刺激Balb3T3细胞增殖的生物学活性。; 关键词截短型胰岛素样生长因子非融合表达纯化; Keywords Des(1-3)IGF Ⅰ Low temperature induction Direct expression Purification Activity assay; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学] Q516 [生物学—生物化学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名传染性法氏囊病病毒HZ96 VP2 cDNA的结构分析及在大肠杆菌中的表达被引量：7: 6; 作者于涟宋坤华金勇丰李双茂张耀洲; 机构浙江大学华家池校区动物免疫研究所生物化学研究所; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1999年第2期97-100,共4页; 基金国家自然科学基金浙江省科委"九五"攻关项目; 文摘以随机引物反转录传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）杭州分离株ＨＺ９６基因组合成第１链ｃＤＮＡ。以第１链ｃＤＮＡ为模板，ＰＣＲ扩增ＨＺ９６ＶＰ２ｃＤＮＡ；Ｓａｎｇｅｒ双脱氧法测序ＨＺ９６ＶＰ２ｃＤＮＡ，并对其基因结构氨基酸序列进行计算分析；构建非融合表达质粒，在大肠杆菌中表达ＶＰ２蛋白。结果表明，克隆的ＨＺ９６ＶＰ２ｃＤＮＡ全长为１４３１个核苷酸对（ｂｐ），含起始密码子ＡＴＧ和终止密码子ＴＡＡ，编码ＶＰ２第２０至第４９５共４７６个氨基酸；ＨＺ９６ＶＰ２在核苷酸和氨基酸水平上，与其它Ｉ型ＩＢＤＶＶＰ２的同性均在９０％以上；对ＨＺ９６分离株与强毒株ＶＰ２ｃＤＮＡ编码的氨基酸序列进行二级结构和亲水性分析发现，ＨＺ９６分离株ＶＰ２第２７９和２８４位氨基酸的变异，可导致附近区域（２７４～２９０位氨基酸）的亲水性降低和α－螺旋的消失。ＨＺ９６ＶＰ２在大肠杆菌中的表达量为８％。; 关键词 IBDV VP2 CDNA 结构分析非融合表达大肠杆菌; Keywords IBDV VP2 cDNA structural analysis non fusion expression; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学] Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名大鼠神经突起因子的克隆及表达载体的构建被引量：2: 7; 作者于娜黄瑾仙玲玲潘泽民何玲; 机构石河子大学医学院; 出处《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2004年第2期139-142,共4页; 基金国家自然科学基金资助项目(30260029) 新疆生产建设兵团医学专项基金(NKBOISDXNK29YX); 文摘从成年SD大鼠脑组织分离提取总RNA,反转录PCR扩增出鼠神经突起因子(neuritin)cDNA的最大开放阅读框(openingreadingframe,ORF)后,重组于克隆载体pGEM3z上,经PCR、限制内切酶鉴定和DNA测序鉴定,扩增出的cDNA426bp全部核苷酸序列与国外文献报道的完全一致;在已构建好的重组克隆载体neuritin pGEM3z基础上,将该neuritinORF亚克隆到原核表达载体pQE30上,为获取具有天然活性的neuritin蛋白及其功能研究提供了基础。; 关键词大鼠神经突起因子克隆构建非融合表达载体; Keywords rat neuritin cloning construction nonfusion expression vector; 分类号 Q523.8 [生物学—生物化学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	金属硫蛋白非融合性原核表达载体的构建	谭洁莹付欣李冰	《实用医学杂志》 CAS	2008	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	α-银环蛇毒素基因的克隆及其非融合型原核表达	胡延春张乃生邓俊良左之才廖玉辉欧阳红生	《遗传》 CAS CSCD 北大核心	2006	5	在线阅读下载PDF 职称材料
3	猪白细胞介素-6基因的非融合原核表达研究	张桂红林海波詹国英廖明任涛罗开健曹伟胜徐成刚江经纬辛朝安	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2006	2	在线阅读下载PDF 职称材料
4	枯草芽孢杆菌植酸酶基因在大肠杆菌中的表达及其对酶热稳定性的影响	吴琦王红宁邹立扣赵海霞刘世贵	《高技术通讯》 EI CAS CSCD	2004	8	在线阅读下载PDF 职称材料
5	截短型人胰岛素样生长因子-Ⅰ 在大肠杆菌中的表达、纯化和鉴定	刘晓辉梁述文王伟申泉郭焱	《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD	1999	4	在线阅读下载PDF 职称材料
6	传染性法氏囊病病毒HZ96 VP2 cDNA的结构分析及在大肠杆菌中的表达	于涟宋坤华金勇丰李双茂张耀洲	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD	1999	7	在线阅读下载PDF 职称材料
7	大鼠神经突起因子的克隆及表达载体的构建	于娜黄瑾仙玲玲潘泽民何玲	《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS	2004	2	在线阅读下载PDF 职称材料