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题名非融合型重组人白细胞介素-18的纯化及鉴定
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作者
朱永红
邹全明
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机构
第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室
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出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第16期1424-1427,共4页
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基金
重庆市医学科技计划资助项目 ( 2 0 0 110 2 0 )
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文摘
目的 获得高纯度的重组人白细胞介素 18(rhIL 18)。方法 采用溶菌酶加超声破菌的方法抽提包涵体 ,以8mol/L尿素溶解包涵体 ,变性条件下以阴离子柱层析进行首步纯化 ,复性后再进行凝胶过滤层析。对纯化的样品进行了SDS PAGE、HPLC、N端氨基酸序列、免疫印迹及生物学活性分析。结果 rhIL 18在大肠杆菌中以不溶性包涵体形式存在 ,所提取的包涵体中重组蛋白纯度可达到 80 %以上 ,包涵体经二步柱层析纯化后 ,HPLC分析纯度达 98%以上 ,SDS PAGE测定其分子质量约 19× 10 3 ,N端 15个氨基酸序列与预期一致 ,生物学活性分析证实纯化的rhIL 18具有诱导人外周血单个核细胞 (PBMC)产生IFN γ的能力。结论 所建立的纯化rhIL 18的方法简便有效 ,为开展rhIL 18的结构活性关系研究及其大规模纯化打下了良好的基础。
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关键词
非融合型重组人白细胞介素-18
纯化
鉴定
溶菌酶
超声破菌
包涵体
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Keywords
recombinant human interleukin 18
purification
characterization
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分类号
R392.12
[医药卫生—免疫学]
R394
[医药卫生—医学遗传学]
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