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猪白细胞介素-6基因的非融合原核表达研究
被引量：
2
1
作者
张桂红
林海波
+7 位作者
詹国英
廖明
任涛
罗开健
曹伟胜
徐成刚
江经纬
辛朝安
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第4期474-477,共4页
用DNA重组技术,将已克隆的猪IL-6基因阅读框片段插入非融合原核表达质粒pBV220中的适当位置,获得重组质粒pBVpIL-6,转化大肠杆菌DH5α后,42℃诱导阳性表达菌。经SDS-PAGE检测发现目的蛋白获得了高效表达,表达量约占总蛋白的20%。表达的...
用DNA重组技术,将已克隆的猪IL-6基因阅读框片段插入非融合原核表达质粒pBV220中的适当位置,获得重组质粒pBVpIL-6,转化大肠杆菌DH5α后,42℃诱导阳性表达菌。经SDS-PAGE检测发现目的蛋白获得了高效表达,表达量约占总蛋白的20%。表达的蛋白以包涵体形式存在,包涵体经过变性溶解和复性后用酶联免疫吸附试验(ELISA)做定性定量检测。ELISA结果证实了所表达的蛋白为猪IL-6,复性后具有一定活性,并测出了复性后活性蛋白的浓度。
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关键词
猪
白细胞介素-6基因
非融合原核表达
SDS-PAGE
ELISA
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职称材料
α-银环蛇毒素基因的克隆及其非融合型原核表达
被引量：
5
2
作者
胡延春
张乃生
+3 位作者
邓俊良
左之才
廖玉辉
欧阳红生
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第4期463-469,共7页
根据文献报道α-银环蛇毒素的氨基酸序列推导出其DNA序列,设计并人工合成两两互补的14条寡核苷酸片段。经片段延伸、PCR、克隆,成功构建α-银环蛇毒素基因克隆质粒;质粒经XbaⅠ和EcoRⅠ双酶切回收后连接于表达载体pET28a(+)中,分别转化B...
根据文献报道α-银环蛇毒素的氨基酸序列推导出其DNA序列,设计并人工合成两两互补的14条寡核苷酸片段。经片段延伸、PCR、克隆,成功构建α-银环蛇毒素基因克隆质粒;质粒经XbaⅠ和EcoRⅠ双酶切回收后连接于表达载体pET28a(+)中,分别转化BL21(DE3)、BL21(DE3)Codon plus、BL21(DE3)plysS进行诱导表达,表达产物经Tris/tricine系统进行SDS-PAGE分析。结果表明:该基因已在大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌中进行了非融合表达,其表达量占细菌总蛋白的11.98%,主要以包涵体形式存在;同时对表达条件进行了优化,其表达量可达16.28%。经Western blot分析,在大约8 kDa处出现明显的目的带,与预计蛋白分子量大小一致,说明表达产物与天然α-银环蛇毒素具有相似的免疫原性。表达产物纯化、复性后经动物毒性试验表明:表达的α-银环蛇毒素蛋白具有生物学活性,小鼠腹腔注射其LD50约为1.28μg/g。
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关键词
Α-银环蛇毒素
基因克隆
非融合原核表达
免疫原性
生物学活性
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职称材料
题名
猪白细胞介素-6基因的非融合原核表达研究
被引量：
2
1
作者
张桂红
林海波
詹国英
廖明
任涛
罗开健
曹伟胜
徐成刚
江经纬
辛朝安
机构
华南农业大学兽医学院禽病室
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第4期474-477,共4页
基金
广东省科技攻关项目(粤科计字【2003】292号)
华南农业大学校长基金(K03005)
文摘
用DNA重组技术,将已克隆的猪IL-6基因阅读框片段插入非融合原核表达质粒pBV220中的适当位置,获得重组质粒pBVpIL-6,转化大肠杆菌DH5α后,42℃诱导阳性表达菌。经SDS-PAGE检测发现目的蛋白获得了高效表达,表达量约占总蛋白的20%。表达的蛋白以包涵体形式存在,包涵体经过变性溶解和复性后用酶联免疫吸附试验(ELISA)做定性定量检测。ELISA结果证实了所表达的蛋白为猪IL-6,复性后具有一定活性,并测出了复性后活性蛋白的浓度。
关键词
猪
白细胞介素-6基因
非融合原核表达
SDS-PAGE
ELISA
Keywords
swine
interleukin-6 gene
non-fusion prokaryotic expression
SDS-PAGE
ELISA
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
α-银环蛇毒素基因的克隆及其非融合型原核表达
被引量：
5
2
作者
胡延春
张乃生
邓俊良
左之才
廖玉辉
欧阳红生
机构
四川农业大学动物科技学院
吉林大学畜牧兽医学院
出处
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第4期463-469,共7页
文摘
根据文献报道α-银环蛇毒素的氨基酸序列推导出其DNA序列,设计并人工合成两两互补的14条寡核苷酸片段。经片段延伸、PCR、克隆,成功构建α-银环蛇毒素基因克隆质粒;质粒经XbaⅠ和EcoRⅠ双酶切回收后连接于表达载体pET28a(+)中,分别转化BL21(DE3)、BL21(DE3)Codon plus、BL21(DE3)plysS进行诱导表达,表达产物经Tris/tricine系统进行SDS-PAGE分析。结果表明:该基因已在大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌中进行了非融合表达,其表达量占细菌总蛋白的11.98%,主要以包涵体形式存在;同时对表达条件进行了优化,其表达量可达16.28%。经Western blot分析,在大约8 kDa处出现明显的目的带,与预计蛋白分子量大小一致,说明表达产物与天然α-银环蛇毒素具有相似的免疫原性。表达产物纯化、复性后经动物毒性试验表明:表达的α-银环蛇毒素蛋白具有生物学活性,小鼠腹腔注射其LD50约为1.28μg/g。
关键词
Α-银环蛇毒素
基因克隆
非融合原核表达
免疫原性
生物学活性
Keywords
alpha-bungarotoxin
gene cloning
non-fusion prokaryotic expressions immunogenicity
biological activity
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
S852 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪白细胞介素-6基因的非融合原核表达研究
张桂红
林海波
詹国英
廖明
任涛
罗开健
曹伟胜
徐成刚
江经纬
辛朝安
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
α-银环蛇毒素基因的克隆及其非融合型原核表达
胡延春
张乃生
邓俊良
左之才
廖玉辉
欧阳红生
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2006
5
在线阅读
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职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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