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胰岛素样生长因子结合蛋白-6的核定位 被引量:1
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作者 韩建军 黄秉仁 +2 位作者 王欣 马晓骊 陈虹 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期735-739,801,共6页
目的研究胰岛素样生长因子结合蛋白-6(IGFBP-6)在细胞中的定位。方法用重叠PCR法构建IGFBP-6的核定位序列缺失体(pEGFP-C1-BP6ΔNLS)及突变体(pEGFP-C1-BP6-Mut)质粒,与野生型IGFBP-6质粒分别转染PC-3M细胞,激光扫描共聚焦显微镜观察绿... 目的研究胰岛素样生长因子结合蛋白-6(IGFBP-6)在细胞中的定位。方法用重叠PCR法构建IGFBP-6的核定位序列缺失体(pEGFP-C1-BP6ΔNLS)及突变体(pEGFP-C1-BP6-Mut)质粒,与野生型IGFBP-6质粒分别转染PC-3M细胞,激光扫描共聚焦显微镜观察绿色荧光融合蛋白在细胞中的分布,并计算这些转染阳性细胞中绿色荧光强度的核质比(Fn/c)。结果激光扫描共聚焦显微镜观察显示,野生型IGFBP-6绿色荧光信号在细胞核内聚集分布,与转染EGFP空载体的对照组相比,Fn/c差异具有显著性(P<0.05)。过表达pEGFP-C1-BP6ΔNLS的细胞中,绿色荧光信号在细胞核内聚集的现象消失,在整个细胞呈均匀分布;过表达pEGFP-C1-BP6-Mut的细胞中,细胞核内绿色荧光信号也有所减弱;两者的Fn/c与转染野生型IGFBP-6的细胞相比差异均具有显著性(P<0.05)。结论IGFBP-6可以定位于细胞核内,它在细胞核内的分布与其核定位序列相关,为进一步研究IGFBP-6不依赖于胰岛素样生长因子的生物学活性提供了新的实验依据。 展开更多
关键词 胰岛素生长因子结合蛋白-6 核定位 核定位顺序 非胰岛素样生长因子依赖的生物学活性
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利用杆状病毒载体高效表达人胰岛素样生长因子-1及其纯化的研究 被引量:1
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作者 段宇 汪承亚 +1 位作者 赵红 陈家伟 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期173-177,共5页
目的 :利用杆状病毒载体在家蚕幼虫中研制有生物学活性的重组人胰岛素样生长因子 1(rhIGF 1)。方法 :将 15kDhIGF 1前体cDNA基因插入家蚕核型多角体病毒 (BmNPV)转移载体pBakPAK8中 ,构建重组病毒BmNPV/IGF 1。用BmNPV/IGF 1感染家蚕幼... 目的 :利用杆状病毒载体在家蚕幼虫中研制有生物学活性的重组人胰岛素样生长因子 1(rhIGF 1)。方法 :将 15kDhIGF 1前体cDNA基因插入家蚕核型多角体病毒 (BmNPV)转移载体pBakPAK8中 ,构建重组病毒BmNPV/IGF 1。用BmNPV/IGF 1感染家蚕幼虫 ,提取家蚕血淋巴液 ,采用亲和层析法纯化rhIGF 1,ELISA法测定rhIGF 1含量 ,用SDS PAGE和Western blot分析鉴定rhIGF 1纯度及免疫学活性 ,MTT法观察其对MCF 7细胞增殖的影响。结果 :ELISA测定显示 ,BmNPV/IGF 1感染家蚕幼虫 12 0hrhIGF 1含量达最高值 ( 2 3 36 μg/ml)。rhIGF 1纯度为 4 0 % ,Western blot分析发现主要纯化产物为 7 5kD成熟hIGF 1。细胞活性刺激实验显示 ,纯化后rhIGF 1对MCF 7细胞促增殖能力明显优于来源于大肠杆菌的rhIGF 1产品。结论 :实现了具有免疫学活性及生物学活性rhIGF 1在杆状病毒表达系统的高效表达 ,并使rhIGF 展开更多
关键词 胰岛素生长因子-1 基因表达 重组家蚕核型多角体病毒 亲和层析 生物学活性
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类胰岛素生长因子结合蛋白IGFBP-3的研究进展 被引量:9
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作者 李筠 钟英斌 +2 位作者 卢玲 陈晨 段存明 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期41-47,共7页
类胰岛素生长因子(Insulin-like growth factor,IGF)信号系统是进化上非常保守的信号转导途径,包括2个IGF配体、2个IGF受体和6个IGF结合蛋白(IGF binging protein,IGFBP)。IGFBP能结合IGF并调节其作用。IGFBP-3是血液中主要的IGF载体蛋... 类胰岛素生长因子(Insulin-like growth factor,IGF)信号系统是进化上非常保守的信号转导途径,包括2个IGF配体、2个IGF受体和6个IGF结合蛋白(IGF binging protein,IGFBP)。IGFBP能结合IGF并调节其作用。IGFBP-3是血液中主要的IGF载体蛋白。离体(in vitro)实验研究发现,IGFBP-3可以抑制或促进IGF的作用,在缺乏IGF受体的细胞中IGFBP-3仍然具有活性。由此可见,IGFBP-3除了具有IGF依赖性作用,还具有IGF非依赖性作用。此外还发现IG-FBP-3能定位于细胞核并与类视黄醇X受体-α(Retinoid X receptor-α,RXRα)结合。越来越多的研究结果显示出IGFBP-3在生物体内作用的复杂性,使探讨IGFBP-3体内(in vivo)作用机制的研究成为热点。本文综述了IGFBP-3的功能、作用机制,与肿瘤、血管生成的关系,以及正常状态下IGFBP-3的生理功能。 展开更多
关键词 胰岛素生长因子 IGFBP-3 IGF依赖 IGF依赖
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非胰岛素依赖型糖尿病肾病肾组织中EGF,EGF-R和IGF-1R的检测及意义 被引量:1
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作者 刘志红 黎磊石 +2 位作者 周虹 王文庆 王建平 《医学研究生学报》 CAS 1993年第2期95-98,189,共5页
应用免疫组化定量分析法,首次对12例非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)肾病患者肾活检组织中胰岛素样生长因子-1(IGF-1)受体、表皮生长因子(EGF)和表皮生长因子受体(EGF-R)进行了观察,并结合患者病程、糖尿病肾病分期和肾功能进行了比较。发... 应用免疫组化定量分析法,首次对12例非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)肾病患者肾活检组织中胰岛素样生长因子-1(IGF-1)受体、表皮生长因子(EGF)和表皮生长因子受体(EGF-R)进行了观察,并结合患者病程、糖尿病肾病分期和肾功能进行了比较。发现NIDDM肾病患者肾小管上EGF和EGF-R的量明显高于正常人。正常人肾小球内EGF染色阴性,4例NIDDM肾病患者肾小球系膜区EGF阳性,且均伴明显系膜细胞和系膜基质增生。正常人和NIDDM肾病患者肾小球内IGF-1受体均为阴性,肾小管上IGF-1受体的量在二者之间也无明显差异。上述结果表明,肾小管上EGF和EGF-R含量增加可能参与NIDDM肾病的发病过程,而肾小球内EGF的出现则提示其与系膜细胞和系膜基质增生有关。 展开更多
关键词 胰岛素依赖型糖尿病 糖尿病肾病 胰岛素生长因子-1受体 表皮生长因子 表皮生长因子受体
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蛇毒神经生长因子的应用研究进展 被引量:4
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作者 韦传宝 《实用医学杂志》 CAS 2007年第13期2106-2108,共3页
神经生长因子(nerve growth factor,NGF)是神经营养因子(neurotrophic factors)家族的典型代表。神经营养因子家族成员众多,除NGF外,还有成纤维细胞生长因子、睫状神经营养因子、白血病抑制因子、胶质源神经营养因子、胰岛素样... 神经生长因子(nerve growth factor,NGF)是神经营养因子(neurotrophic factors)家族的典型代表。神经营养因子家族成员众多,除NGF外,还有成纤维细胞生长因子、睫状神经营养因子、白血病抑制因子、胶质源神经营养因子、胰岛素样生长因子等。它们在氨基酸序列上具有高度的同源性,有相似的生物学活性。 展开更多
关键词 蛇毒神经生长因子 睫状神经营养因子 成纤维细胞生长因子 胰岛素生长因子 白血病抑制因子 家族成员 氨基酸序列 生物学活性
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梅花鹿IGF-1的原核表达与纯化 被引量:6
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作者 孟星宇 李婷 +3 位作者 李沐 刘宁 田玉华 胡薇 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2012年第7期7-13,共7页
【目的】克隆梅花鹿(Cervus nippon)胰岛素样生长因子1(Insulin-like growth factor 1,IGF-1)的成熟肽基因,并对其进行原核表达及纯化,以获得具有生物学活性的蛋白,为研究IGF-1在梅花鹿鹿茸生长发育中的调控作用及机理提供参考。【方法... 【目的】克隆梅花鹿(Cervus nippon)胰岛素样生长因子1(Insulin-like growth factor 1,IGF-1)的成熟肽基因,并对其进行原核表达及纯化,以获得具有生物学活性的蛋白,为研究IGF-1在梅花鹿鹿茸生长发育中的调控作用及机理提供参考。【方法】以GenBank中的梅花鹿IGF-1基因序列(登录号:HQ890468)设计1对引物,以构建的梅花鹿pMD-18T-IGF-1重组质粒为模板,克隆IGF-1成熟肽的基因序列,构建重组质粒pMD-IGF-1,将其插入pET-32a表达载体后,构建pET-32a-IGF-1质粒,鉴定后,将pET-32a-IGF-1转入Rosetta大肠杆菌进行诱导表达(0.6mmol/L IPTG,37℃,4h)后,对其表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting检测。用Ni-Agarose柱亲和层析试剂盒分离、羟胺裂解纯化目标蛋白,并利用四唑盐比色法(MTT法)和流式细胞仪检测目标蛋白对NIH3T3细胞增殖及不同细胞周期下NIH3T3细胞比例的影响。【结果】获得了梅花鹿IGF-1成熟肽基因序列(234bp);经鉴定,原核表达载体pET-32a-IGF-1构建成功;SDS-PAGE和Western blotting检测结果表明,在Rosetta中成功诱导表达了融合蛋白,且羟胺裂解纯化后的目的蛋白纯度较高;MTT法和细胞周期检测结果表明,复性后的IGF-1重组蛋白能促进细胞增殖。【结论】成功克隆了梅花鹿IGF-1成熟肽基因序列,获得了具有生物学活性的IGF-1蛋白。 展开更多
关键词 梅花鹿 胰岛素生长因子1 原核表达 蛋白纯化 生物学活性
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